全 文 ： 萃取物中的萜类化合物和文献 〔1〕中挥发油的
组成相符 ,主要是松油醇 、柠檬醛 、肉桂醛 、桉叶油醇
等 ,尽管含量较少 (相对含量约占 6.6%),但都属于
辛香物质 ,可能与豆豉姜的祛风散寒除湿 ,温中理气
止痛的功效有一定的相关性。
参 考 文 献
[ 1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会 . 中华本草(第
三册). 上海:上海科学技术出版社 , 1999:73.
[ 2] 杜淑清 , 黎淑芬 , 李沛林 . H PLC法在分离纯化豆鼓姜
抗血栓有效成分中的应用 . 中药材 , 1995, 18(8):404-
405.
[ 3] MCLAFFERTY F W. The W iley /NBS reg istry o f m ass
spec tral da ta. America:A W iley In te rscience Pub lica tion,
1989.
(2004 - 08 - 24收稿
2005 - 07 -10修回)
毛冬青药材中 neopubescensin的含量测定研究
刘 毅 1, 2 ,方 芳1 ,袁海龙 1* ,朱 军 2 ,肖小河 1 ,罗 云 2
(1.解放军第 302医院中药研究所 ,北京 100039;2.成都中医药大学药学院 ,四川成都 611731)
摘要 目的:建立 neopubescensin的含量测定方法。方法:HPLC法。色谱柱:C18柱;流动相:乙腈-0. 05%的磷
酸水溶液(20∶80);检测波长:230 nm。结果:该法的线性范围为 4. 45 ～ 106. 8 μg /m l, r=0.9993, 重复性实验 RSD
为 0. 69%(n=5), 平均回收率 100. 23%, RSD=1. 72%(n=5)。结论:本法简便 , 准确 ,可用于毛冬青药材的质量控
制。
关键词 毛冬青;HPLC法;neopubescensin
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2006)02-0144-02
*通讯作者:袁海龙 , 1970年生 ,男,药学博士 ,副主任药师。 Tel:(010)66933324
毛冬青为冬青科冬青属植物毛冬青 Ilex pu-
bescensHook. e t A rn的根 。主产于广东 、广西 、安
徽 、福建等地 。具有凉血 、活血 、通脉 、消肿止痛 、清
热解毒的作用 ,临床上常用于冠心病 、心绞痛和脉管
炎等的治疗 〔1, 2〕。冬青属全世界有 400余种 ,中国
约 150种 。
由于缺乏合理 、完善的质量控制指标及方法 ,使
得市售毛冬青不但品种混乱 ,质量千差万别 ,故在成
分和药理作用等方面差别较大 。随之而来的问题是
毛冬青制剂的质量得不到有效的控制 。比如现在市
售的大多数毛冬青制剂均以毛冬青根中不含有的芦
丁为指标性成分控制制剂中总黄酮的含量 ,显然这
是不合理和不科学的 。为探寻解决这一难题 ,我们
采用药效跟踪的方法确认了毛冬青治疗缺血性脑中
风的有效部位。然后对该部位进行植化分离 ,得到
了含量相对较高的 neopubescensin纯品 (为首次从
该属植物中分得 ,归一化法检测 ,纯度大于 98%)。
本试验建立了 HPLC法测定了毛冬青药材中 neopu-
bescensin含量的方法 ,本法简便 、准确 ,可用于毛冬
青药材的质量控制。
1 仪器与材料
1.1 材料 毛冬青药材购于广西玉林药材公司 ,
经解放军第 302医院中药研究所肖小河研究员鉴定
为毛冬青 Ilex pubescens Hook. e t A rn的干燥根。
neopubescensin自制 (98.37%)。乙腈为色谱纯 ,水
为重蒸水 ,其余试剂均为分析纯。
1.2 仪器 高效液相色谱仪 (配有 DAD , Ag ilent-
1100型 ,美国 );色谱柱 (ODS柱 , K romasil 250×4.6
mm , 5 μm , 瑞典 );微量进样器 (25μl, Hamilton, 美
国);微量分析天平 (Mettle rAE 163,瑞士)等 。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备 精密称取 neopubescen-
sin对照品 26.7 mg,置 25 m l量瓶中 ,加甲醇 20 m l
超声溶解 ,放冷 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,储存备用
(每 1 m l含 neopubescensin 1.068mg)。
2.2 供试品溶液的制备 取毛冬青药材细粉 2.0
g,加入甲醇 50m l,称定重量 ,超声处理 30m in,冷却
后再称重量 ,加甲醇补足损失重量 ,滤过 。即得。
2.3 色谱条件 色谱柱:K rom asil, 5 μm C18柱
(250×4.6 mm);流动相:乙腈-0.5%醋酸水 (20∶
80);检测波长:230 nm;流速:1m l /m in;柱温:室温;
理论塔板数按 neopube scensin峰计算 , 应不低于
144 中药材第 29卷第 2期 2006年 2月
DOI牶牨牥牣牨牫牳牰牫牤j牣issn牨牥牥牨牠牬牬牭牬牣牪牥牥牰牣牥牪牣牥牪牥
2000。
2.4 线性关系考察 吸取 neopubescensin对照品
储备液 , 分别稀释成 4.45、 8.9、26.7、 53.4、 71.2、
106.8 μg /m l,溶液分别进样 10μl,按上述色谱条件
测定峰面积。以峰面积 (Y)为纵坐标 ,进样量 (X)
为横坐标 , 绘制标准曲线 , 计算回归方程 , y =
7377.40x +85.03, r =0.9993, neopubescensin在
4.45 ～ 106.8 μg /m l与峰面积呈良好的线性关系 。
色谱图见图 1。
图 1 neopubescensin对照品 (A)和
毛冬青样品(B)HPLC色谱图
2.5 精密度考察 精密吸取同一对照品溶液 10
μl,重复进样 5次 , neopubescensin峰面积 RSD为
0.50%(n=5),精密度良好。
2.6 重复性考察 取同一供试品溶液 ,按照供试
品溶液制备方法 ,制备 5份供试品溶液 ,各进样 10
μl。 5 份样品中 neopubescensin峰面积 RSD 为
1.48%。
2.7 稳定性考察 取同一供试品溶液 ,于配制后
0、2、4、8、24 h分别进样 10 μl,依法测定峰面积 ,峰
面积 RSD为 0.69%(n=5),表明供试品溶液在 24
h内基本稳定 。
2.8 回收率试验 精密称取已知含量的毛冬青药
材细粉 5份 ,每份 0.5 g,精密加入 neopubescensin对
照品溶液 0.5 m l(neopubescensin的浓度为 1.068
mg /m l,相当于 0.534 mg),按样品测定项下的方法
提取 , 测定 , 计算回收率 , 结果平均回收率为
100.23%, RSD为 1.72%。
2.9 样品测定 分别精密吸取 neopubescensin对
照品溶液和供试品溶液各 10μl,注入高效液相色谱
仪中 ,按上述色谱条件测定。测定结果见表 1。
表 1 毛冬青药材中 neopubescensin
含量测定结果(n=3)
编号 neopubescensin含量(%)
1 0. 11
2 0. 09
3 0. 12
3 讨论
实验过程中共选择了 3种流动相系统:①流动
相 A:0.05%磷酸水 ,梯度变化 100% ～ 0%,流动相
B:甲醇 ,梯度变化 0% ～ 100%;②流动相 A:0.05%
磷酸水 ,梯度变化 100% ～ 0%,流动相 B:乙腈 ,梯度
变化 100% ～ 0%;③流动相:乙腈-0.05%磷酸水
(20∶80)。结果表明 ,采用表明 ,采用乙腈-0.05%磷
酸水 (20∶80)恒定洗脱时基线稳定 ,谱图上各个色
谱峰 (230 nm)的分离度较好 ,保留时间适中 ,因此
选此流动相系统作为毛冬青药材的高效液相检测用
流动相。
检测波长的确定:实验中共考察了 210 nm、230
nm、254 nm、282 nm、320 nm 五个波长 ,结果表明 ,
210 nm波长下 ,溶剂吸收峰较高 , 254、320 nm波长
色谱峰数目少 ,检测波长为 230 nm、282 nm色谱峰
数目多 、峰型好 , 230 nm波长的色谱峰数目略多于
282 nm检测波长的色谱峰 ,综合考虑 ,选定 230 nm
为测定波长。
参 考 文 献
[ 1] 江苏新医学院 . 中医药大辞典(上册 ). 上海:上海人
民出版社 , 1977:441.
[ 2] 蔡雄 , 刘中秋 ,王培训 , 等 . 毛冬青化学成分 、药理作用
及临床应用研究进展 . 广东药学 , 2001, 11(1):4.
(2005 - 09 -26收稿)
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145中药材第 29卷第 2期 2006年 2月