全 文 ：收稿日期: 2012-03-14; 修回日期: 2012-05-25
基金项目: 国家自然科学基金资助项目(31070635)；北京林业大学青年科技启动基金资助项目(BLX006)
作者简介: 姚冬琳(1985-), 女, 河北沧州人, 硕士研究生, 主要从事植物发育生物学研究, E-mail: yaodonglinydl@126.com; *通讯作者: 谢响
明(1965-), 男, 湖北云梦人, 北京林业大学教授, 博士生导师, 主要从事资源与环境微生物学、林木基因工程等研究, Tel: 010-62336074, E-
mail: xiexiangm@bjfu.edu.cn.
厚荚相思 RNA提取方法的建立与优化
姚冬琳1, 刘伟娜1, 杨明嘉2, 郭惠红1, 金 一1, 谢响明1*
(1. 北京林业大学 生物科学与技术学院, 中国北京 100083; 2. 中国科学院 生态环境研究中心, 中国北京 100085)
摘 要: 针对厚荚相思叶片中单宁、酚类、色素、纤维素多糖物质含量高的特点 , 对 Trizol 法、改良的热硼酸盐
法、CTAB (hexadecyl trimethy ammonium bromide)法和超声波破碎结合 RNA 提取试剂盒法从厚荚相思体外培养
的叶片中提取总 RNA 进行比较研究, 结果表明: 在 RNA 提取试剂盒的基础之上, 引入 20 MHz 的超声波, 破碎
2 min (puls on 5 s, puls off 5 s)为假叶 RNA 提取的优化方法. 运用此方案获得的 RNA 片段较完整, 其 A260/A280
值均在 1.82~1.98 之间, 并成功进行了基因片段的 RT-PCR(reverse transcription PCR).
关键词: 厚荚相思; RNA 提取; 方法优化
中图分类号: Q946.2 文献标识码: A 文章编号: 1007-7847(2012)04-0301-06
The Establishment and Optimization of RNA Isolation
in Acacia crassicarpa
YAO Dong-lin1, LIU Wei-na1, YANG Ming-jia2, GUO Hui-hong1, JIN Yi1,
XIE Xiang-ming1*
(1. College of Biological Science and Biotechnology, Beijing Forestry University, Beijing 100083. China;
2. Research Center for Eco-Envionmental Sciences, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100085, China)
Abstract：Extraction of high-quality RNA from the phyllode of Acacia crassicarpa is very difficult due to
high levels of tannin, phenols, pigment, cellulose polysaccharide that bind or coprecipitate with RNA. There-
fore, the preferred RNA isolation protocols were optimized from the phyllode of Acacia crassicarpa, compar-
ing the Trizol method, improved hot-borate methods, CTAB and RNA isolation kit combined with ultrasonic
method. It was found that the RNA isolation kit combined with 20 MHz ultrasonic processor (puls on 5 s,
puls off 5 s) was optimal for the RNA isolation from Acacia crassicarpa. The extracted total RNA with this
method had high integrity, the ratio of A260/A280 was in the range of 1.82~1.98, and had been successfully
used for RT-PCR experiment.
Key words: Acacia crassicarpa; RNA isolation; optimized methods
（Life Science Research，2012，16（4）：301～306）
RNA 分离不仅是基因表达分析研究的第一
步, 也是基因遗传改良的重要基础[1]. 在进行North-
ern杂交分析、基因体外翻译、cDNA 文库构建、
cDNA末端快速扩增 (rapid amplification of cDNA
ends, RACE)、差异显示反转录 PCR (differential
display reverse transcription-PCR, DDRT-PCR)等研
究时均需要高质量 RNA[2]. 除此之外, 随着人们对
microRNA (miRNA)特性和功能的认识的不断深
入, 有关小分子 RNA 的研究成为生物界热点研
究之一[3, 4]. 近两年 miRNA的研究受到越来越多科
学家的关注, 大量的实验结果揭示了 miRNA 在
胚胎发育、癌症等方面起到非常重要的调控作用.
第 16 卷 第 4 期 生命科学研究 Vol．16 No．4
2012 年 8 月 Life Science Research Aug. 2012
生 命 科 学 研 究 2012 年
在 miRNA研究中, 相对分子质量低的 RNA的提
取是很重要的工作. 它是进行 miRNA cDNA文库
构建和 RT-PCR等的基础[5].
植物组织 RNA的提取较动物和微生物困难,
原因是植物具有坚硬的细胞壁, 同时富含多种次
生代谢物, 如多糖、多酚、蛋白质等物质. 在细胞
破碎后, 这些物质将以不同方式干扰 RNA 的提
取, 如酚类物质氧化后可使 RNA活性丧失[6], 多糖
可形成难溶胶状物质与 RNA一起被沉淀[7]. 另外,
在植物细胞破碎后 , 细胞内以及操作体系中的
RNA酶(RNase)均会对分离组分中的 mRNA进行
降解, 加上 RNase极为稳定, 在实验操作中很难
将它们彻底除去. 提取木本植物完整的总 RNA
更是存在很多困难. 目前, 常用的植物总 RNA的
提取方法大多适用于草本植物, 对于多数木本植
物组织 RNA的提取则效果不佳, 表现为 RNA提
取的量极低.
厚荚相思(Acacia crassicarpa )为含羞草科常
绿乔木, 原产澳大利亚, 喜阳树种, 适生于热带、
亚热带气候, 土壤适应性强, 在滨海风沙土上生
长良好, 能够耐地表 50 ℃高温, 耐干旱、耐雨季
地表积水. 根系发达, 具根瘤, 有改良土壤的作用,
萌生力强, 砍伐后能萌蘖, 在相思类树种中生长
最快[8]. 本文比较研究了 Trizol法、改良的热硼酸
盐法、CTAB法和超声波破碎结合 RNA提取试剂
盒法从厚荚相思体外培养的叶片中提取总 RNA,
建立了假叶 RNA提取的优化方法: 在 RNA提取
试剂盒的基础之上, 引入 20 MHz的超声波, 破碎
2 min (puls on 5 s, puls off 5 s), 提取出了较高纯
度和质量的 RNA, 能够满足 miRNA研究的需求.
1 材料与方法
1.1 实验材料与试剂
1) 植物材料: 取自厚荚相思组培苗的新鲜假
叶或液氮速冻, -80 ℃保存的假叶;
2) 主要试剂: Trizol试剂、氯仿、异丙醇、交联
聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)、二硫苏糖醇(DTT)、乙基
苯基聚乙二醇(NP-40)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)、
蛋白酶 K、10 mmol/L Tris-HCl (pH 7.5)、2 mol/L
KCl、8 mol/L LiCl、CTAB 提取液、β-巯基乙醇、
SSTE缓冲液、RNase-free水、RNA提取试剂盒.
1.2 实验方法
1.2.1 RNA的提取方法
1.2.1.1 Trizol法
1) 称取新鲜厚荚相思假叶约 0.1 g, 加入液氮
研磨至细粉状, 放入 1.5 mL离心管中;
2) 每管加 1 mL Trizol试剂(样品体积不超过
Trizol试剂体积的 10%), 迅速混匀(若样品较多可
先将混好的样品置于冰上); 室温下静置 5~10 min
以利于核酸蛋白质复合体的解离;
3) 加 200 μL的氯仿, 剧烈振荡 15 s, 室温下
静置 5 min左右;
4) 2~8 ℃, 12 000 g 离心 10~15 min;
5) 将水相(上清)转入新的 1.5 mL离心管, 加
入 0.5 mL异丙醇, 室温下沉淀 10 min;
6) 2~8 ℃, 12 000 g 离心 15 min;
7) 弃上清, 加 1 mL 75％乙醇清洗 RNA, 振荡
片刻后 (务必使沉淀悬浮起来, 以确保洗涤干净),
7500 g 离心 5 min, 小心弃上清;
8) 室温静置 5~15 min,使 RNA沉淀恰好干燥,
加入 20 μL RNase-free水溶解, 将样品于-80 ℃保
存.
1.2.1.2 热硼酸盐法
1) 取 0.1 g 植物叶片, 加入 10% (W/W)的交
联聚乙烯吡咯烷酮(PVPP), 液氮研磨成细粉状;
2) 加入 1 mL预热的样品缓冲液, 加入 0.01 g
二硫苏糖醇 (DTT), 10 μL乙基苯基聚乙二醇(NP-
40)和 0.02 g 聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40). 80 ℃水浴
下平衡 15 min;
3) 再加入 40 μL蛋白酶 K (10 g/L),置于 42 ℃,
120 r/min, 振荡提取 1.5 h;
4) 向样品管中加入 80 μL的 KCl (2 mol/L),
振荡混匀, 将样品在 4 ℃下静置 2 h;
5) 4 ℃, 12 000 r/min离心 20 min;
6) 取上清, 加入 1/4 体积 8 mol/L LiCl, 4 ℃
静置过夜;
7) 4 ℃, 12 000 r/min离心 20 min, RNA沉淀
留于管底;
8) 加入 1 mL冰冷 2 mol/L LiCl,轻缓振荡, 4 ℃,
12 000 r/min离心 10 min. 去除上清液. 重复此步
2~3次至上清液中无色素类物质;
9) 用 1 mL 10 mmol/L Tris-HCl (pH 7.5)溶解
沉淀, 4 ℃, 12 000 r/min 离心 10 min, 去除不溶
性沉淀;
10) 转移上清至新离心管, 加入 1/10体积的
2 mol/L KAc (pH 5.5), 于 4 ℃静置 30 min;
11) 4 ℃, 12 000 r/min 离心 10 min, 转移上
清至新离心管, 加入 2.5倍体积的 100%乙醇, 颠
302
第 4 期 姚冬琳等：厚荚相思 RNA提取方法的建立与优化
倒混匀, -80 ℃下静置 2 h;
12) 4 ℃, 9 000 r/min离心 30 min, RNA沉淀
留于管底;
13) 用 1~2 mL 70%的乙醇(-20 ℃预冷)清洗
沉淀. 4 ℃, 9 000 r/min, 离心 5 min, 去除上清, 室
温干燥 RNA沉淀 20~30 min至管内无水;
14) 用 20 μL RNase-free水充分溶解 RNA沉
淀, 加入 1/10体积的 3 mol/L NaAc (pH 5.2)和 2.5
倍体积的预冷无水乙醇 , 然后置于-20 ℃沉降
RNA 1~2 h;
15) 混合液在 4 ℃, 12 000 r/min离心 20 min,
去除上清液;
16) 用 1~2 mL 70%的乙醇(-20 ℃预冷)清洗
沉淀 . 4 ℃ , 9 000 r/min 离心 5 min, 去除上清 ,
RNA沉淀滞留于管底;
17) 室温干燥 RNA沉淀 20~30 min至管内无
水. 分别用 20 μL RNase-free水充分溶解 RNA沉
淀, 将样品于-80 ℃保存.
1.2.1.3 CTAB法
按照相关文献并略加改良提取:
1) 80 ℃水浴中预热 0.5 mL CTAB提取液 (已
加入 10 μL β-巯基乙醇);
2) 液氮中研磨 0.1 g新鲜植物叶片, 转移样品
至有 CTAB 提取液的离心管中 , 立即激烈涡旋
30~60 s, 放回 80 ℃水浴中(4~5 min);
3) 加入等体积的氯仿/异戊醇(24∶1)并涡旋混
合, 10 000 r/min常温离心 15 min, 沉淀蛋白质;
4) 将上清转移至一新离心管, 重复抽提一次,
沉淀蛋白质;
5) 将上清转移至一新离心管中, 加入等体积
的 4 mol/L LiCl, 使 LiCl的终浓度为 2 mol/L, 4 ℃
下沉淀过夜(<16 h);
6) 4 ℃, 15 000 r/min离心 1 h, 沉淀 RNA, 弃
上清去除 DNA, 用 500 μL 70%乙醇洗沉淀去除
杂质, 然后用 500 μL 100%乙醇洗沉淀;
7) 用 500 μL SSTE 溶解沉淀 (RNA), 转移至
1.5 mL离心管中, 加入等体积的氯仿/异戊醇去除
蛋白质杂质抽提一次;
8) 加入 1/10体积的 NaAc, 2倍体积的无水乙
醇, 在-70 ℃沉淀 30 min或-20 ℃沉淀 2 h;
9) 4 ℃, 15 000 r/min离心 20 min沉淀 RNA;
10) 先用 400 μL 70%乙醇洗沉淀, 然后用 400
μL 100%乙醇洗沉淀. 干燥后用 20 μL RNase-free
水溶解 RNA沉淀, 将样品于-80 ℃保存.
1.2.1.4 试剂盒法
采用某公司植物 RNA提取试剂盒, 提取厚荚
相思假叶的 RNA.具体操作方法见试剂盒说明书.
1.2.2 RNA 提取方法的优化
本实验设计以下处理来优化 RNA提取质量:
1) 设定 3 个裂解温度分别为 42 ℃、90 min;
65 ℃、5 min; 80 ℃、5 min;
2) 提取缓冲液中的 β-巯基乙醇浓度设为
2%、4%、10%、20%.
1.2.3 采取超声波破碎植物组织对几种提取方法
的影响
RNA提取过程中, 及时抑制内源 RNase的活
性的关键在于快速裂解细胞. 而相思的外植体富
含纤维素. 液氮研磨不能将其及时破碎, 可能导
致胞内 RNase 不能及时与提取缓冲液接触而被
抑制. 这会直接导致 RNA提取的失败. 针对相思
的外植体的特殊性, 本试验引入了超声波破碎.
旨在彻底破碎细胞, RNase第一时间与其抑制剂
接触反应.
以上 4种方法的液氮研磨后再加入裂解缓冲
液.使用 20 MHz的超声波,破碎 2 min (puls on 5 s,
puls off 5 s). 以后的方法分别与前面提到的相同.
1.2.4 RNA的完整性电泳检测
取 2 μL提取的 RNA样品进行 0.8%琼脂糖
凝胶电泳检测.
1.2.5 RNA浓度与纯度检测
1) 取少量待测 RNA样品, 用 TE稀释 50倍;
2) 用 TE做空白, 在 260、280、310 nm处调节
紫外分光光度计的读数至零;
3) 加入待测 RNA样品在 3个波长处读取 A
值;
4) RNA 浓度的计算 : [ssRNA] =40 mg/L×
(A260-A310)×稀释倍数.
1.2.6 RT-PCR分析
通过 RT-PCR检测 RNA质量. 提取组织的总
RNA, 采用 Oligo(dT)为逆转录反应的引物反转录
合成 cDNA, 再以 cDNA为模板, 用 CAld5H蛋白
编码序列的特异性简并引物进行 PCR扩增.
2 结果
2.1 几种 RNA提取方法的效果的对比
使用热硼酸盐法提取厚荚相思假叶的 RNA,
经多次试验证实, 所得 RNA降解严重, 且由其弥
散条带亮度可知 RNA 得率很低. 可能是由于硼
303
生 命 科 学 研 究 2012 年
图 2 不同 β-巯基乙醇浓度对 RNA 提取效果的影响
β-巯基乙醇浓度 : 1: 20%; 2: 10%; 3: 4%; 4: 2%; M: DNA
相对分子质量标准.
Fig.2 Effects of different concentration of β-mercap-
toethanol in CTAB isolation buffer on RNA isolation
β-mercaptoethanol concentration: 1: 20%; 2: 10%; 3: 4%; 4:
2%; M: DNA Marker.
酸钠并不能及时完全裂解细胞所致. 因此热硼酸
盐法并不适合提取厚荚相思假叶的 RNA. 同时,
Trizol 法、RNA plant Reagent(天根)、奥莱博 RNA
提取试剂盒都不能提取到高质量的 RNA.
CTAB 法提取的厚荚相思假叶 RNA 也有降
解的情况发生, 但相对得率较高(图 1).
2.2 CTAB法提取 RNA的优化
2.2.1 β-巯基乙醇对 RNA提取的影响
增加 β-巯基乙醇的浓度并没有改善 RNA的
降解情况, 相反, β-巯基乙醇的增多直接降低了
RNA的得率(图 2).
2.2.2 裂解温度对 RNA提取的影响
由图 3可知, 较高的裂解温度可以有效提高
RNA的得率. 而参考松树 RNA提取时所使用的
较低温度并不适用于厚荚相思 RNA 的提取. 因
此得到较好的反应温度为 80 ℃、5 min.
2.3 超声波破碎植物组织对几种 RNA提取方法
的影响
实验结果表明(图 4), 当使用 CTAB法和热硼
酸盐法提取厚荚相思假叶 RNA 时, 使用超声波
破碎虽然可以提高 RNA产量(条带亮度), 但无法
实质性改变 RNA 的质量, 只有一条条带, 代表
RNA降解. 当使用 Trizol法时, 使用超声波破碎,
电泳结果无条带.
从 RNA琼脂糖凝胶电泳检测图(图 5)中可以
看到, 超声波破碎对试剂盒法提取 RNA 的效果
显著. 28 S、18 S条带较为清晰, 且 28 S宽度约为
18 S的 2倍 (图 5). 说明 RNA完整性好. 经多次
试验测定 , A260/A280 在 1.82~1.98 之间 , 计算出
RNA 浓度为 0.2~0.3 g/L, 说明提取的 RNA 能有
图 1 不同提取方法对 RNA 提取效果的影响
1: 热硼酸盐法; 2: CTAB 法; 3: Trizol 法; 4: 试剂盒法.
Fig.1 Effects of different methods on RNA isolation
1: hot borate procedure; 2: CTAB procedure; 3: Trizol proce-
dure; 4: RNA isolation kit.
1 2 3 4
1 2 3 4 M
1 000
250
bp
图 3 不同裂解温度对 RNA 提取效果的影响
Fig.3 Effects of different isolation temperature on RNA
isolation
1: 80 ℃ 5 min; 2: 65 ℃ 5 min; 3: 42 ℃ 90 min.
1 2 3
图 4 超声波破碎对 CTAB 法和热硼酸盐法提取 RNA 的
影响
1: 热硼酸盐法 ; 2: 热硼酸盐法+超声波 ; 3: CTAB 法 ; 4:
CTAB 法+超声波; M: DNA 相对分子质量标准.
Fig.4 Effects of ultrasonic fragmentation on RNA iso-
lation when use CTAB or hot borate procedure
1: hot borate procedure; 2: hot borate procedure with ultra-
sonic fragmentation; 3: CTAB procedure; 4: CTAB with ul-
trasonic fragmentation; M: DNA Marker.
1 2 3 4 M
bp
2 500
1 000
250
304
第 4 期
效地去除蛋白、多糖等的污染. 须进一步验证其
逆转录活性, 确定其质量.
2.4 基于厚荚相思总 RNA的 RT-PCR
为了进一步确定所提取 RNA 的质量, 对超
声波法结合试剂盒提取的总 RNA进行了反转录.
以提取的总 RNA为模板, Oligo dT Primer做逆转
录引物逆转录酶进行 RT-PCR扩增, 并进行扩增
产物琼脂糖凝胶电泳检测, 结果显示在 500 bp左
右扩增出 PCR产物 (图 6). 扩增产物电泳的结果
表明此方法提取的 RNA能进行 PCR扩增并获得
扩增谱带.
3 讨论
提取纯度高、完整性好的总 RNA是开展植物
cDNA文库构建、RT-PCR、差异显示、Northern杂
交等分子生物学研究的基础[9]. 目前发表的关于植
物 RNA提取的文献有很多, 但由于每一种植物
及其自身的不同部位都有其各自的特点, 这些特
点反应在自身的结构和组成上, 因此很难用一种
方法来适应所有的植物组织.
试验采用了 Trizol法、改良的热硼酸盐法、
CTAB法和 RNA提取试剂盒法并进行了对比, 以
期找到厚荚相思假叶 RNA 提取的最佳方法. 热
硼酸盐法提取含酚类物质较高的作物如棉花的
RNA有良好的效果[10, 11]. 裴东和谷瑞升以胡杨、核
桃和白梨的叶片和根为试验材料提取 RNA, 比较
RNA的得率和纯度, 结果表明热硼酸盐法优于其
他 RNA的提取方法[12],并将该方法提取胡杨的RNA
成功用于 mRNA 分离、cDNA 合成、DDRT-PCR、
cDNA末端快速扩增、酶切等分析. CTAB抽提法
利用 LiCl沉淀和碱性、高盐离子条件下氯仿抽提
去除多糖的干扰, 利用螯合剂 PVP结合多酚, 加
入巯基乙醇防止酚类物质的氧化, 来去除植物中
各种复杂成分的干扰, 从植物组织中提出高质量
完整的 RNA. Chang[13]、Ildiko[14]和窦道龙等[15]应用
CTAB抽提法先后从高度富含次生代谢物质的松
树针叶和根、食肉植物茅膏菜以及棉花中分离出
高质量完整的 RNA. 在我们的试验中 , 应用
CTAB法处理的烟草进行对照, 获得了较完整的
RNA. 由此证明, 厚荚相思假叶 RNA的降解与外
源 RNase 的污染无关 . 其降解主要由其内源
RNase 引发 . 因而在提取的同时抑制其内源
RNase的活性成为了首要任务. 黄月琴[16]等在提
取半夏试管小块茎 RNA的过程中往提取缓冲液
中加入了高浓度的 β-巯基乙醇, 以及利用了异丙
醇和 NaAc联合沉淀多糖等手段. 因此我们对 β-
巯基乙醇这种抑制 RNase 活性的物质进行了研
究, 结果却是 β-巯基乙醇的增多降低了 RNA 的
得率, 可能的原因是 β-巯基乙醇干扰了 CTAB与
细胞之间的反应, 使得细胞并没有完全裂解, 降
低了裂解率. 同时, 裂解温度也成为制约裂解效
率[13]和 RNA得率的重要因素. 我们实验得到的相
对较好温度为 80 ℃、5 min.
Trizol 法、热硼酸盐法、CTAB 法与改良的
CTAB法以及单独使用试剂盒法均不能提取出条
带清晰的 RNA, 这也从一个侧面反映出厚荚相思
RNA提取的特殊性. 我们最终采用了超声波破碎
结合 RNA提取试剂盒的方法, 得到了条带清晰
且质量高的总 RNA, 实验总结提出了在 RNA提
取试剂盒的基础之上, 引入 20 MHz的超声波, 破
碎 2 min (puls on 5 s, puls off 5 s)为厚荚相思假
1 2 M
28 S
18 S
2 500
1 000
250
bp
图 5 超声波破碎对试剂盒法提取 RNA 的影响
1: 试剂盒法+超声波; 2: 试剂盒法; M: DNA 相对分子质量
标准.
Fig.5 Effects of ultrasonic fragmentation on RNA isola-
tion when use RNA isolation kit
1: RNA isolation kit with ultrasonic fragmentation; 2: RNA
isolation kit; M: DNA Marker.
图 6 厚荚相思 RT-PCR 结果
1、2: RT-PCR 产物; M: DNA 相对分子质量标准.
Fig.6 RT-PCR of A.crassicarpa
1, 2: production of RT-PCR; M: DNA Marker.
1 2 M
5 000
2 500
1 000
250
bp
姚冬琳等：厚荚相思 RNA提取方法的建立与优化 305
生 命 科 学 研 究 2012 年
叶 RNA的提取的优化方法.
分析其原因, 一种可能是由于厚荚相思的假
叶富含纤维素. 液氮研磨仍不能将其破碎, 可能
导致胞内 RNase 不能及时与提取缓冲液接触而
被抑制, 这是导致 RNA提取失败的直接原因. 采
取超声波处理可使细胞彻底破碎, 这样 RNase第
一时间与其抑制剂接触反应, 而不会造成提取的
RNA的降解. 另外, 相思富含单宁、橡胶等多种复
杂的次生代谢物质, 且叶面表面覆盖一层蜡质,
这些化学物质均可能是提取高质量 RNA的限制
性因素. 其中, 单宁是多酚中高度聚合的化合物,
与蛋白质形成难溶于水的复合物, 可能影响细胞
膜及核膜的破碎, 干扰 RNase 抑制剂的作用. 而
相思类所特有的橡胶类物质, 相对分子质量很大,
无外力作用下, 呈细团状, 这可能会阻碍裂解试
剂与生物膜的接触, 延缓 RNase抑制剂与 RNase
的反应. 采取超声波破碎细胞就可能会减弱其影
响 [17]. 蜡质主要是高分子一元醇与长链脂肪酸形
成的酯质, 不溶于水, 温度稍高时变软, 温度下降
时变硬, 其生物学功能是作为生物体对外界环境
的保护层 [18], 但我们不希望这种“保护”发生在
RNA提取过程中. 提高裂解温度、增加裂解液中
表面活性剂的浓度或超声波破碎细胞可能减弱蜡
质的影响. 总之, 厚荚相思 RNA提取存在不少困
难, 目前尚未见到国内外相关报道.
RT-PCR方法是检测 RNA质量的良好方法,
因为多糖等杂质的污染将抑制 RNA 的反转录 .
反转录对于 RNA的纯度是高度灵敏的, 在 RNA
中含有微量杂质都会干扰反转录. 制备质量合格
的 RNA是进行 cDNA文库等分子生物学研究的
关键[19].本研究中通过超声波法结合试剂盒提取的
RNA 进行的 RT-PCR 的检测结果说明制备的
RNA的质量和纯度较高, 完全可以满足后续分子
生物学实验的要求.
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