全 文 ：18　
第 39卷　第 1期
2010年　1月
卫　生　研　究
JOURNALOFHYGIENERESEARCH　　　
Vol.39　No.1
Jan.　2010
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收稿日期:2009-05-16
文章编号:1000-8020(2010)01-0018-03 ·实验研究·
凹顶藻萜类化合物与维生素 E联合作用对酒精性
肝损伤大鼠肿瘤坏死因子 -α的影响
王海英
滨州职业学院 , 滨州　 256600
摘要:目的　研究凹顶藻萜类化合物(LET)与 VE合用对酒精诱导肝损伤大鼠的肝功能 、血脂 、肿瘤坏
死因子(TNF-α)水平的影响 ,并探讨其可能的作用机制。方法　70只雄性 Wistar大鼠随机分为 7组。酒精
模型组每天酒精 12ml/kgbw灌胃;阴性对照组给予等体积蒸馏水;VE干预组每天VE30mg/kgbw灌胃;LET
低 、中 、高剂量合用干预组每天分别 LET25mg/kgbw和 VE30mg/kgbw、LET50mg/kgbw和 VE30 mg/kg
bw、LET100mg/kgbw和 VE30mg/kgbw灌胃;甘草酸二胺胶囊干预组给予甘草酸二胺胶囊 200mg/kgbw灌
胃。除阴性对照组外 ,其余各组酒精剂量同模型组。实验进行 7周。 分别测定肝功 、血脂 、TNF-α水平。结
果　与阴性对照组比较 ,酒精模型组血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、
胆固醇(CHO)、TNF-α水平差异有统计学意义(P<0.05);与酒精模型组比较 , LET中 、高剂量合用组及甘草
酸二胺胶囊干预组 ALT、TG水平差异有统计学意义(P<0.05);中 、高剂量合用干预组 AST水平及高剂量合
用干预组 CHO水平差异有统计学意义(P<0.05)。高剂量合用干预组及甘草酸二胺胶囊组 TNF-α水平差
异有统计学意义(P<0.05)。结论　LET与 VE合用能调整酒精性肝损伤大鼠体内脂质代谢 , 改善肝功能 ,
降低 TNF-α的水平。
关键词:凹顶藻萜类化合物　维生素 E　酒精性肝损伤　肿瘤坏死因子-α
中图分类号:Q566　Q593.1　　　　　　文献标识码:A
作者简介:王海英 ,女 ,教师 ,研究方向:医学营养
　　酒精性肝病(ALD)是遗传 -环境 -代谢应激相关因素所
致的以肝细胞脂肪变性为主的临床病理综合征 , 是西方国家
导致肝硬化的最主要病因 , 也是十大常见死因之一 [ 1] 。 在我
国 , 随着嗜酒人数的增加 ,酒精性肝病有逐年增加趋势。在医
学研究中 , 建立符合现代人生活方式的酒精性肝损伤动物模
型 , 探讨其防治措施成为现代医学研究的重点。
从红藻门凹顶藻属植物三列凹顶藻中分离得到的凹顶藻
萜类化合物(laurenciaextract, LET)是一种具有代表性的海
洋天然活性物质。 前期研究表明 , LET中总萜含量为
63.29%, 具有抗肿瘤 、抑菌 、调节免疫和抗氧化等多方面的生
物活性 [ 2-6] 。维生素 E是一种天然的抗氧化剂。本研究建立
酒精性肝损伤大鼠模型 , 以凹顶藻萜类化合物与 VE作为干
预物 , 观察其对大鼠肝功 、脂质代谢和 TNF-α水平的影响。
1　材料与方法
1.1　一般资料
雄性 Wistar大鼠 70只 , SPF级 , 体重 180 ～ 200g, 由华中
科技大学实验动物中心提供 ,动物合格证号:SCXK(鄂)2004-
0007。动物饲料:康大牌实验动物标准饲料(济南康大饲料有
限公司 , 山东省实验动物中心联合生产)。
1.2　试剂与仪器
1.2.1　材料　三列凹顶藻(LaurenciatristichaTseng), 由中国
科学院海洋研究所提供并鉴定 [高效液相色谱(HPLC)法测
得其总萜含量为 63.29%] ;维生素E:青岛双鲸药业有限公司
生产;某甘草酸二胺胶囊由江苏正大天晴药业股份有限公司
生产;分析纯无水乙醇:国药集团化学试剂有限公司生产。
1.2.2　检验试剂　丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶
(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)试剂盒由北京利德曼
生化技术有限公司提供;肿瘤坏死因子(TNF-α)试剂盒由北
京北方生物技术研究所提供。
1.2.3　主要仪器　DFM-96型 10管放射免疫 r计数器(众成
机电技术公司);制冰机(IM-20K-25英国 Hoshizaki公司);恒
温水浴箱(姜堰市天力医疗器械有限公司);日立 7600全自
动生化分析仪(日本日立公司);低温离心机(德国 Sigma公
司 3K30型)
1.3　动物模型及分组
70只雄性 Wistar大鼠适应性喂养 7天后 , 随机分为 7
组 ,每组 10只。无水乙醇用蒸馏水稀释为 50%(V/V)灌胃。
酒精模型组每天给予酒精 12ml/kgbw灌胃;阴性对照组给予
等体积蒸馏水;VE干预组每天给予酒精 +VE30mg/kgbw灌
第 1期 王海英.凹顶藻萜类化合物与维生素 E联合作用对酒精性肿损伤大鼠肝瘤坏死因子-α的影响 19　
胃;LET低 、中 、高剂量合用干预组每天分别给予酒精 +LET
25mg/kgbw+VE30mg/kgbw、酒精 +LET50mg/kgbw+VE
30mg/kgbw、酒精 +LET100mg/kgbw+VE30mg/kgbw灌胃;
甘草酸二胺胶囊干预组每天酒精 +甘草酸二胺胶囊 200mg/
kgbw灌胃 ,每组酒精剂量同模型组。实验进行 7周 。
1.4　样品采集及处理
末次灌胃后禁食 12h, 自由饮水 , 大鼠依次称重后给予
20%乌拉坦行腹腔注射麻醉 , 腹主动脉取血 ,分离血清 ,测定
ALT、AST、CHO、TG、TNF-α水平。
1.5　检测指标与方法
1.5.1　血清 ALT、AST、CHO、TG检测　使用全自动生化分析
仪进行自动检测。
1.5.2　TNF-α的测定　采用放射免疫分析方法 , 利用均相竞
争抑制原理。具体操作方法按试剂盒说明书进行。
1.6　统计学分析
所有数据均使用 SPSS11.5统计软件进行统计分析 , 结
果采用 x±s表示 , 组间差异采用单因素方差分析 , 两两比较
采用 Q检验。检验水准 α=0.05。
2　结果
2.1　常规观察
阴性对照组动物皮毛光亮整洁 , 灵活好动 , 大便呈颗粒
状 , 无死亡现象;模型对照组有不同程度的精神萎靡 , 活动减
少 , 饮食减少 ,大便稀软 ,皮毛凌乱无光泽等表现。 各干预组
以上现象较模型对照组有不同程度的改善。 7周末 , 阴性对
照组大鼠无一死亡 , 酒精模型组 、VE干预组 、低剂量合用干预
组各死亡 2只 , 中 、高剂量合用干预组及甘草酸二胺胶囊组各
死亡 1只 ,可能与体质降低导致耐受性差或灌胃时酒精误吸
入气管有关。各组死亡大鼠的相关数据均已经剔除 , 以下各
检测指标结果为 61只存活大鼠的数据。
2.2　各组大鼠体重变化结果
由表 1可见 , 与阴性对照组比较 ,酒精模型组至第 7周末
体重增长速度较慢 ,差异有统计学意义(P<0.05);与酒精模
型组比较 ,各干预组体重增长水平有不同程度提高 ,其中 LET
高剂量合用干预组及甘草酸二胺胶囊干预组差异有统计学意
义(P<0.05)。
表 1　各干预组对酒精性肝损伤大鼠体重的影响( x±s)
组别 n 体重增减(kg)
阴性对照组 10 145.525±30.021(2)
酒精模型组 8 76.247±15.851(1)
VE干预组 8 89.425±14.910
LET低剂量 +VE合用干预组 8 90.945±12.036
LET中剂量 +VE合用干预组 9 93.712±14.649
LET高剂量 +VE合用干预组 9 106.928±10.750(2)
甘草酸二胺胶囊干预组 9 100.909±10.014(2)
　　注:(1)与阴性对照组比较 , P<0.05;(2)与酒精模型组比较 ,
P<0.05。
2.3　血清 ALT、AST水平变化
由表 2可见 , 与阴性对照组比较 , 酒精模型组血清中
ALT、AST水平增高(P<0.05);与酒精模型组比较 , 各干预组
ALT、AST水平有不同程度降低 , 其中 LET中 、高剂量合用干
预组及甘草酸二胺胶囊干预组 ALT差异有统计学意义(P<
0.05), LET中 、高剂量合用干预组 AST差异有统计学意义
(P<0.05)。
表 2　各干预组对乙醇肝损伤大鼠血清ALT、AST的影响( x±s)
U/ml
组 别 n ALT AST
阴性对照组 10 45.125± 8.661(2) 78.875± 9.164(2)
酒精模型组 8 81.857±11.976(1)163.429±13.139(1)
VE干预组 8 79.632±10.962(1)157.833±12.801(1)
LET低剂量 +
VE合用干预组 8 58.760±10.662 140.182±11.427
LET中剂量 +
VE合用干预组 9 50.519± 8.100(2)103.924±10.567(2)
LET高剂量 +
VE合用干预组 9 49.666± 9.512(2)101.143± 9.946(2)
甘草酸二胺胶囊干预组 9 50.125± 9.095(2)128.097±10.732
　　注:(1)与阴性对照组比较, P<0.05;(2)与乙醇模型组比较 ,
P<0.05
2.4　血清脂质水平变化
由表 3可见 , 与阴性对照组比较 , 酒精模型组大鼠血清
TG、CHO水平升高 , 差异有统计学意义(P<0.05)。 与酒精
模型组比较 , 各干预组 TG、CHO水平有不同程度降低 , 其中
LET中 、高剂量合用干预组及甘草酸二胺胶囊干预组 TG水
平差异有统计学意义(P<0.05), LET高剂量合用干预组
CHO水平差异有统计学意义(P<0.05)。
表 3　各干预组对酒精肝损伤大鼠血清 TG、CHO影响( x±s)
mmol/L
组别 n TG CHO
阴性对照组 10 0.821±0.190(2) 1.594±0.103(2)
酒精模型组 8 1.507±0.204(1) 2.893±0.326(1)
VE干预组 8 1.298±0.212 2.482±0.165
LET低剂量 +VE合用干预组 8 1.013±0.127 2.470±0.243
LET中剂量 +VE合用干预组 9 0.960±0.353(2) 2.127±0.401
LET高剂量 +VE合用干预组 9 0.941±0.230(2) 1.701±0.239(2)
甘草酸二胺胶囊干预组 9 1.005±0.154(2) 2.361±0.414
　　注:(1)与阴性对照组比较 , P<0.05;(2)与酒精模型组比较 ,
P<0.05
2.5　血清中 TNF-α水平
由表 4可见 , 与阴性对照组比较 , 模型组 TNF-α水平升
高 ,差异有统计学意义(P<0.05)。与酒精模型组比较 ,各干
预组 TNF-α水平有不同程度降低 ,其中 LET高剂量合用组及
甘草酸二胺胶囊组水平下降 , 差异有统计学意义(P<0.05)。
3　讨论
肝脏是全身酶最丰富的器官 , 不同的酶在肝脏不同的病
理状况下 , 会表现出不同的升降幅度。本实验联合检测
CHO、TG(反映肝脏脂肪代谢的能力)及 ALT、AST(反映肝细
20　 　　卫　　生　　研　　究 第 39卷
　　　　　　表 4 各干预组对酒精性肝损伤大鼠血清中 TNF-α
含量的影响( x±s) fmol/ml
组 别 n TNF-α
阴性对照组 10 19.253±4.021(2)
酒精模型组 8 35.334±8.017(1)
VE干预组 8 32.415±5.681
LET低剂量+VE合用干预组 8 26.872±6.102
LET中剂量+VE合用干预组 9 25.982±5.826
LET高剂量+VE合用干预组 9 22.952±5.573(2)
甘草酸二胺胶囊干预组 9 2 3.642±4.656(2)
　　注:(1)与阴性对照组比较 , P<0.05;(2)与酒精模型组比较 ,
P<0.05
胞损伤)这几种指标 ,可以从不同侧面全面地反映不同组别
大鼠肝脏的生理 、病理变化。本实验结果表明 , 酒精模型组以
上指标与阴性对照组比较 ,差异有统计学意义(P<0.05), 证
实酒精已对肝细胞造成损伤 , 造成脂质代谢障碍。 LET与 VE
合用干预后能改善肝功能 ,调节脂质代谢紊乱。
近年的动物实验及临床研究表明 ,内毒素 、炎症细胞因子
的改变与酒精性肝病的发生密切相关 [ 7] 。长期慢性酒精摄
入可使细胞因子生成异常 , 导致体内环境中促炎症细胞因子
与抗炎症细胞因子平衡失调 , 诱导肝细胞凋亡与坏死 , 介导肝
病的发生与发展。其中 TNF-α在 ALD的发病机制中起关键
作用 , 其可通过与肝细胞膜上的 TNF-α受体结合增加体内活
性氧 、促使肝脏贮脂细胞增殖合成胶原蛋白和蛋白多糖促使
肝纤维化 、诱导库普弗细胞产生自由基等途径导致肝细胞损
伤 、死亡。本研究结果显示酒精模型组血清 TNF-α含量高于
阴性对照组 , 表明酒精摄入后通过各种途径导致大鼠血清
TNF-α产生增多 ,提示血清 TNF-α水平与肝脏功能状态及肝
损害的发生 、发展密切相关。各干预组 TNF-α有不同程度降
低 , 不同剂量 LET与 VE合用干预 , 呈现出明显的剂量-反应
关系 , 同时表现出两者之间的协同作用 , 而且一定剂量的 LET
与 VE合用效果优于甘草酸二胺胶囊干预和 VE单用。可能
的作用机制是两者都能对 TNF-α引起的破坏产生间接保护
作用:(1)LET具有异戊二烯(C5H8)的碳架结构 , 含丰富的烯
键 ,化学性质活泼 ,有较强的还原性 , 能清除大量 TNF-α诱导
产生的自由基 , 而且 LET为脂溶性 , 容易进入细胞膜 ,能降低
细胞膜上的脂质过氧化反应 , 从而维持膜的完整性和功能;并
能增强巨噬细胞的吞噬能力 [ 6];(2)VE是存在于细胞膜上第
一线的脂溶性抗氧化剂 , 其自身结构的色原烷醇环上含有羟
基 ,具有还原性 ,其次在五碳环上有一饱和的侧链 ,这两点决
定了 VE具有还原性和亲脂性。在氧自由基攻击多不饱合脂
肪酸前将其捕获和清除 , 防止和抑制膜上磷脂形成脂质过氧
化;并能抑制贮脂细胞增殖及胶原合成 [ 8] 。 两者的其他保护
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收稿日期:2009-10-06