全 文 ：反相高效液相色谱法测定接骨木籽油中维生素 E的含量
刘克海1，吕 慧1，骆蔚燕1，董 伶1，刘克武2*
(1．上海海洋大学食品学院，上海 201306;2．黑龙江省林副特产研究所，黑龙江省非木质林产品研发重点实验室，黑龙江牡丹江 157011)
摘要 ［目的］建立测定接骨木籽油中维生素 E 含量的方法。［方法］采用反相高效液相色谱法，色谱柱为 Kromasil C-18柱，流动相为甲
醇 －水(98∶ 2)，流速为 1． 0 ml /min，检测波长 280 nm，柱温 25 ℃。［结果］在上述条件下，维生素 E在 5 ～ 100 μg /ml范围内呈良好的线
性关系，平均回收率为 99． 29%，ＲSD =1． 44% (n =5)。［结论］该方法操作简便快捷、结果可靠、重复性好，适用于接骨木籽油中维生素
E含量的测定。
关键词 接骨木籽油;维生素 E;反相高效液相色谱法;含量
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2015)03 －055 －02
Determination of the Vitamin E in Sambucus Williamsii Seed Oil by Ｒeversed － phase High － performance Liquid Chromatography
LIU Ke-hai1，LV Hui1，LUO Wei-yan1，LIU Ke-wu2* et al (1． College of Food Science and Technology，Shanghai Ocean University，Shang-
hai 201306;2． Heilongjiang Forest By-Product and Speciality Ｒesearch Institute，Heilongjiang Provincial Key Laboratory of Non-wood Forest Prod-
uct Development，Mudanjiang，Heilongjiang 157011)
Abstract ［Objective］The research aimed to establish a method to determine the vitamin E in Sambucus Williamsii seed oil．［Method］Ｒe-
versed-phase high-performance liquid chromatography with Kromasil C-18 column was used． Mobile phase was methanol and water (98:2，v /v)
with a flow rate of 1． 0 ml /min． UV detection wavelength was 280 nm and the temperature of the column was 25 ℃．［Ｒesult］There was a good
linear relationship between 5 －100 μg /ml of the vitamin E，the average recovery rate was 99． 28% with the ＲSD of 1． 44% ．［Conclusion］This
method was simple and quick，reliable with good reproduction，and suitable for the determination of the content of vitamin E in Sambucus william-
sii seed oil．
Key words Sambucus Williamsii seed oil;Vitamin E;Ｒeversed-phase high-performance liquid chromatography;Content
基金项目 上海市科委工程中心建设项目(11DZ2280300) ;黑龙江省森
林工业总局攻关项目(sgzjY201402)。
作者简介 刘克海(1977 － )，山东日照人，副教授，在读博士，从事海洋
生物资源利用研究。* 通讯作者，副研究员，从事新资源食
品研究。
收稿日期 2014-12-11
接骨木生长在我国的东北地区，是一种乡土树种，它几
乎遍及黑、吉、辽等北方各个地区。接骨木为忍冬科接骨木
属植物［1］，属落叶灌木，资源丰富，约有 20 余种，我国产有
5 ～6种［2］，主要分布于我国东北、华北及朝鲜、俄罗斯部分地
区的丘陵地带。接骨木适应性强，易于种植，为珍稀的野生
木本油料植物。据文献记载，接骨木性味甘、苦、平，无毒，具
有接骨续筋、祛风利湿、活血止痛之功效［3］，同时还具有抗
炎、镇痛活性、抗骨质疏松活性、抗氧化作用、抗糖尿病作用
以及促进骨折愈合作用等［2］，药用历史悠久，药用价值广泛。
接骨木籽的含油量很高，达 35% ～ 44%［2］，其中具有抗
血脂作用的 ɑ-亚麻酸含量较高［4］。从接骨木籽提取的接骨
木籽油，是一种呈橙黄色、澄清透明的油状液体，具有浓郁香
味，无异味。维生素 E是该油中的天然抗氧化剂，其含量越
高，接骨木籽油就越稳定。维生素 E，又名生育酚，是脂溶性
的维生素，对人体具有重要的生理功能。维生素 E不但可以
维持人体的肌肉和生殖系统正常代谢，还可以维持中枢神经
和血管系统的完整。此外，它还具有清除自由基的作用，可
作为抗氧化剂使用［5 －6］。维生素 E 是广泛存在于各类植物
油脂中的，且其对机体有着重要的生理功效，所以分析接骨
木籽油中维生素 E的含量是很必要的，同时这也是衡量该油
脂营养价值的一个参考标准。关于测定维生素 E 的方法主
要有薄层层析法、气相色谱法、比色法［7］和高效液相色谱法，
前 3种方法均存在着处理样品繁琐、准确性差、灵敏度低、精
密度低等缺点;而高效液相色谱法则弥补了上述方法的某些
缺点，具有快速、准确、高灵敏度和高精密度等优点。目前，
已有学者对接骨木籽油的理化常数、重金属含量以及脂肪酸
的组成进行了研究，并做了相应的含量测定，但还没有文献
报道关于测定接骨木籽油中维生素 E的含量。因此，笔者首
先采用超临界二氧化碳萃取接骨木籽油，然后采用反相高效
液相色谱法，以甲醇—水为流动相，采用外标法进行接骨木
籽油中维生素 E 的含量测定，为其开发利用提供科学的
依据。
1 材料与方法
1． 1 仪器 日立 L-2000 高效液相色谱仪(日本)，日立 L-
2400紫外检测器，日立 L-2130 高通量泵;Kromasil C-18 柱
(250 ×4． 6 mm) ;ＲE-52C 旋转蒸发器(上海青浦沪西仪器
厂) ;Spe-ed SFE-2 超临界二氧化碳萃取装置(美国 Applied
Separations 公司)。
1． 2 试剂 接骨木籽;维生素 E标准品(美国 Sigma公司) ;
甲醇为色谱纯;正己烷、乙醚均为分析纯;水为超纯水，流动
相经 0． 45 μm微孔滤膜减压过滤。
1． 3 超临界二氧化碳萃取接骨木籽油 称取 10 g粉碎后的
接骨木籽置于超临界装置的萃取釜里，然后在萃取压力为 40
Mpa、萃取温度为 40 ℃的条件下静态萃取 15 min后，再动态
萃取 3． 5 h，得到接骨木籽油［8 －9］。
1． 4 色谱条件 日本日立高效液相色谱仪(L-2000) ;色谱
柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的 Kromasil C-18 柱
(直径 4． 6 mm，高 250 mm) ;赛多利斯十万分之一电子天平
CPA225D;流动相为甲醇—水(98∶ 2) ;流速为 1． 5 ml /min;检
测波长 280 nm;柱温 25 ℃，进样量 10 μl。
1． 5 标准曲线的绘制 精密称取维生素 E 标准品适量，加
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2015，43(3):55 － 56，74 责任编辑 黄小燕 责任校对 李岩
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2015.03.019
正己烷制成每 1 ml含维生素 E标品 1 mg的溶液，即得维生
素 E标准品的标准溶液;然后分别取维生素 E标准溶液 50、
100、250、750、1 000 μl，用正己烷稀释定容至 10 ml的棕色容
量瓶内，制得 5、10、25、75、100 μg /ml的维生素 E标准溶液系
列。在上述的色谱条件下进样测定，记录对应的维生素 E的
峰面积;最后以不同浓度的维生素 E标准溶液的峰面积和对
应的浓度作图，绘制标准曲线。
1． 6 精密度试验 精密吸取维生素 E标准溶液，重复进样 5
次，求得维生素 E标准品的峰面积的 ＲSD。
1． 7 重复性试验 取同一批接骨木油样品 5 份，按样品测
试条件进样测定，求得维生素 E含量的 ＲSD。
1． 8 样品测定 超临界CO2 萃取制得接骨木籽油，在避光条
件下，取油样约 2 g，精密称定，置 50 ml分液漏斗中，用乙醚提
取 3次，每次 10 ml，然后合并乙醚液，置于水浴上蒸干乙醚，残
渣用正己烷溶解，移至 10 ml 棕色容量瓶中，再用正己烷定容
至刻度并摇匀。进样前，将溶液经 0． 45 μm微孔滤膜过滤后再
进样。以上述色谱条件测定样品溶液和标准品溶液，用外标峰
面积法计算接骨木籽油中维生素 E的含量［10］。
1． 9 加样回收率试验 精密称取已知维生素 E 含量的接
骨木籽油，约 1． 0 g，共取 5份，分别精密加入标准品溶液(25
μg /ml)10 ml，置于 20 ml 棕色容量瓶中，加正己烷溶解至刻
度，摇匀，然后精确移取 2 ml溶液至 10 ml的棕色容量瓶中，
加正己烷定容刻度，密塞，摇匀，用 0． 45 μm的微孔滤膜过滤
后进样，分别在上述色谱条件测定维生素 E 的含量，计算回
收率，回收率的计算公式为回收率 =［(加标样品的测定值 －
样品测定值)/加标溶液的理论值］×100%。
2 结果与分析
2． 1 超临界二氧化碳萃取接骨木籽油 在萃取压力为 40
Mpa、萃取温度为 40 ℃的条件下静态萃取 15 min后，再动态
萃取 3． 5 h，得到接骨木籽油的产率为 29． 64%，相对标准偏
差为 0． 41%。
2． 2 标准曲线 以维生素 E的峰面积对相应的浓度作图绘
制得到标准曲线(图 1)。结果表明，维生素 E在浓度为 5 ～100
μg /ml范围内呈良好的线性关系。此外，得到峰面积(y)与浓
度(x)的回归方程为 y =2 440．4x －1 351．4(Ｒ2 =0． 999 9)。
图 1 维生素 E标准品的标准曲线
2． 3 精密度试验 精密吸取维生素 E 标准品溶液，重复进
样 5次，求得标准品的峰面积的 ＲSD为 0． 43%。
2． 4 重复性试验 取同一批接骨木油样品 5 份，按样品测
试条件进行测定，求得维生素 E含量的 ＲSD为 1． 17%。
2． 5 样品测定 取同一批接骨木籽油 5份，按照“1． 8”中的
方法处理后，在“1． 4”色谱条件下进行测定，并计算。用外标
峰面积法计算接骨木籽油中维生素 E 的含量。从维生素 E
标准品和样品的 HPLC图谱(图 2)可以看出，样品中维生素
E的保留时间 tＲ =29． 29 min，与标准品 tＲ 基本相同。根据标
准曲线进行计算，得出这 5份接骨木籽油中的维生素 E含量
图 2 维生素 E标准品(a)和接骨木籽油中维生素 E(b)的 HPLC图谱
平均为 25． 92 mg /kg，ＲSD为 0． 43%。
2． 6 加样回收率 在已知含量的样品中分别加入不同量的
维生素 E标准品，配制成加标样品液。将加标样品液分别在
“1． 4”色谱条件下测定维生素 E 的含量，并计算，结果得出
(表 1)，平均的加样回收率为 99． 29%，ＲSD 为 1． 44%
(n =5)。
3 讨论
(1)该试验结果表明，用反相高效液相色谱法测定接骨
表 1 维生素 E回收率试验结果
样品量
g
样品中的
VE量∥mg
加入量
mg
测得量
mg
回收率
%
平均回
收率∥%
ＲSD
%
0． 992 3 0． 025 7 0． 25 0． 273 2 99． 00 99． 29 1． 44
0． 991 1 0． 025 6 0． 25 0． 270 1 97． 80
0． 996 8 0． 025 8 0． 25 0． 279 8 101． 60
0． 997 5 0． 025 9 0． 25 0． 272 2 98． 52
0． 991 4 0． 025 6 0． 25 0． 274 4 99． 52
(下转第 74页)
65 安徽农业科学 2015 年
量低于上部叶。该研究表明，烟叶总氮、烟碱含量表现出上
部叶高于中部叶、下部叶;与对照相比，总体而言有机肥能提
高上部叶的总氮、烟碱含量，对中部叶、下部叶无明显规律。
刘汉等［16］研究表明，有机无机肥配施可以增加烟叶总糖和
还原糖含量。而该研究结果与前人研究的不同之处是，有机
无机肥配施提高了下部烟叶水溶性总糖和还原糖含量(油枯
处理除外)，中上部烟叶的总糖含量显著降低。该试验中各
施肥方式的下部烟叶总糖及还原糖含量均在优质烤烟范围
内，所有处理中上部叶总糖、还原糖含量均在适宜范围内。
在研究条件下，各处理中上部烟叶含钾量低于优质烤烟
要求。可能原因是烟叶钾含量受到多种因素的综合影响，烟
叶钾含量不高。已有研究证明，在钾肥供应充足的条件下，
叶位由下到上含钾量一般呈下降趋势［17 －18］。该研究各部位
烟叶钾含量分布规律与前人研究类似。
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31 －34．
(上接第 56页)
木籽油中的维生素 E的含量具有较好的线性相关性、重复性
以及回收率。试验结果表明接骨木籽油中维生素 E 的含量
在 25． 92 mg /kg左右。该方法操作简便快捷、结果准确可靠、
重复性好，说明 HPLC法适用于接骨木籽油中维生素 E含量
的测定。
(2)试验发现，以甲醇—水(98∶ 2)为流动相时，维生素 E
在 30 min左右时出峰，且主峰与其他峰能达到基线分离。
(3)由于维生素 E很容易被氧化，所以在整个试验过程
中均应该注意避光，用棕色容量瓶来放置溶液，以免影响试
验结果。
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