全 文 ：紫外分光光度法快速测定山葵中异硫氰酸酯的研究
方海仙１，２，梅文泉１，２，杨东顺１，２，汪禄祥１，２＊
（１．云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所，昆明　６５０２２３；
２．农业部农产品质量监督检验测试中心，昆明　６５０２２３）
摘要：目的：建立一种快速测定山葵中异硫氰酸酯含量的方法。方法：采用紫外分光光度法，以烯丙基
异硫氰酸酯为对照品，测定２４９ｎｍ处的吸光度。结果：对照品在０～８０μｇ／ｍＬ范围内，吸光度呈良好
的线性关系（Ｒ＝０．９９９７），回归方程为Ｙ＝０．０１２７Ｘ－０．０１３，加标回收率在８６．７％～９８．８％之间，方法
相对标准偏差为１．０９％～３．３３％，测得山葵中异硫氰酸酯含量为０．０７９％。结论：该方法简单快速、准
确度高、重复性好，为进一步开发利用山葵提供了理论基础。
关键词：山葵；异硫氰酸酯；紫外分光光度法；快速测定
中图分类号：ＴＳ２０１．２　　　文献标志码：Ａ　　　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－９９７３．２０１６．１０．０２４
文章编号：１０００－９９７３（２０１６）１０－０１０９－０３
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｒａｐｉｄ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅｓ　ｉｎ　Ｗａｓａｂｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ
Ｍａｓｔｕｍ　ｂｙ　Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ　Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ
ＦＡＮＧ　Ｈａｉ－ｘｉａｎ１，２，ＭＥＩ　Ｗｅｎ－ｑｕａｎ１，２，ＹＡＮＧ　Ｄｏｎｇ－ｓｈｕｎ１，２，ＷＡＮＧ　Ｌｕ－ｘｉａｎｇ１，２＊
（１．Ａｇｒｉ－Ｆｏｏｄ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｓｔａｎｄａｒｄ　ａｎｄ　Ｔｅｓｔｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｙｕｎｎａｎ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　６５０２２３，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ　＆Ｔｅｓｔｉｎｇ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｆａｒｍ
Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｑｕａｌｉｔｙ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　６５０２２３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｒａｐｉｄ　ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅｓ　ｉｎ　Ｗａｓａｂｉ　ｊａｐｏｎｉｃａ
Ｍａｓｔｕｍ　ｉｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｔｅｓｔ，ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅｓ　ｉｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ
ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ａｌｙｌ　ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ　ｉｓ　ｒｅｇａｒｄｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍａｘｉｍｕｍ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ
ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｉｓ　ａｔ　２４９ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｓｔａｎｄａｒｄ　ｉｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０～８０μｇ／ｍＬ　ｗｉｔｈ　ａ　ｒｅｌａｔｉｖｉｔｙ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ　０．９９９７，ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ
ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｅｑｕａｔｉｏｎ　ｉｓ：Ｙ＝０．０１２７Ｘ－０．０１３．Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｉｓ　８６．７％～９８．８％ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ
ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎ　ｉｓ　１．０９％～３．３３％，ｔｈｅ　ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅｓ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　Ｗａｓａｂｉ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｍａｓｔｕｍ　ｉｓ
０．０７９％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｆａｓｔ，ｈａｓ　ｈｉｇｈ　ａｃｃｕｒａｃｙ　ａｎｄ　ｇｏｏｄ　ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄ
ｉｔ　ｈａｓ　ｐｒｏｖｉｄｅｄ　ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｗａｓａｂｉ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｍａｓｔｕｍ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｗａｓａｂｉ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｍａｓｔｕｍ；ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅｓ；ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ；ｒａｐｉｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
　　山葵（Ｗａｓａｂｉ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｍａｓｔｕｍ），又称山嵛、山嵛
菜，系十字花科山葵属多年生宿根性草本植物，其地下
茎肥大，圆柱形，皮绿色，髓部偏白，肉质坚硬，原产于
日本，中国于２０世纪８０年代末９０年代初开始引进种
植［１－４］。山葵作为一种传统的辛辣调味品［５］，其风味
物质是植物组织中的硫葡糖苷经内源性芥子苷酶水解
而产生具有辛辣风味的异硫氰酸酯［６］，它抑菌、抑制血
小板聚集、抗癌和肿瘤等生物活性［７－９］，其含量的多少
是衡量山葵质量的重要指标。异硫氰酸酯的种类并不
单一，不同的Ｒ侧链基团构成了不同的异硫氰酸酯，
山葵 中 占 主 要 成 分 的 是 烯 丙 基 异 硫 氰 酸 酯
（＞８０％）［１０］。
异硫氰酸酯是一类极易挥发的成分，因此，建立一
种快速、简便的测定方法尤其重要。据文献［１１，１２］报
收稿日期：２０１６－０４－０２　　　　　　　　＊通讯作者
作者简介：方海仙（１９８８－），女，云南师宗人，助理研究员，硕士，主要从事食品安全检测工作。
—９０１—
第４１卷 第１０期
２０１６年１０月
　　　　　　　　　　　　　　　中 国 调 味 品
Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｎｄｉｍｅｎｔ 分析检测　　
道，异硫氰酸酯含量测定方法主要有氧化还原法、重量
法、紫外分光光度法、比色法、气（液）相色谱法等。以
上方法各有优缺点，比如滴定法具有设备简单、操作方
便的优点，但灵敏度较低；气（液）相色谱法具有灵敏度
高、操作简单的优点，但设备昂贵、对前处理要求较高。
紫外分度光度法具有设备简单、操作简便，灵敏度高的
优点。本文旨在建立一种简单实用的检测方法，达到
快速检测的目的。在参考文献的基础上，采用紫外分
光光度法对山葵中异硫氰酸酯含量进行快速测定［１３］。
１　仪器与材料
１．１　仪器
Ｓｐｅｃｏｒｄ　２１０ｐｌｕｓ紫外可见分光光度计　德国耶拿分
析仪器股份公司；ＡＥ－１００型电子分析天平（精度为
０．０００１ｇ）　梅特勒－托利多仪器有限公司；ＪＤ２００－２型　
电子天平（精度为０．０１ｇ）　沈阳龙腾电子有限公司。
１．２　材料
新鲜山葵：由昭通市威信县特色绿色产业办公室
提供，３～５℃下低温保藏。
标 准 品：烯 丙 基 异 硫 氰 酸 酯 （１００ ｍｇ，
ＡｃｃｕＳｔａｎｄａｒｄ公司，批号：１４００８）；正己烷（分析纯）、蒸
馏水。
２　实验方法
２．１　标准曲线的制作
２．１．１　标准溶液配制
精密称取烯丙基异硫氰酸酯标准品５１．２ｍｇ（精
确到０．１ｍｇ），加适量正己烷溶解，转移至５０ｍＬ容量
瓶中，并以正己烷定容，配成浓度为１．０２４ｍｇ／ｍＬ的
工作液，备用。
２．１．２　最佳检测波长确定
以正己烷为空白进行基线调零，烯丙基异硫氰酸
酯工作液于２２０～３５０ｎｍ范围内进行扫描，确定最大
吸收波长。
２．１．３　标准曲线建立
取适量工作液用正己烷稀释，使浓度分别为１０，
２０，３０，４０，５０，６０，７０，８０μｇ／ｍＬ，置于２５ｍＬ容量瓶
中，正己烷定容，在最大吸收波长处测定该系列浓度标
准品的吸光度值。
２．２　山葵样品中异硫氰酸酯提取
挑选带皮的山葵，用清水洗净，去除叶子及根部，
留下可食用部分，除去外表皮及须根，用高速组织捣碎
机捣碎。
准确称取约 ２．００ｇ 捣碎的山葵样品，加入
５．０ｍＬ蒸馏水，用玻璃棒反复搅拌至样品分散均匀，
然后加入５０．０ｍＬ正己烷，振荡器振荡３０ｍｉｎ，上清
液备用。色素不溶于正己烷，最终的提取液应是无色
透明的（取上清液用于比色）。
２．３　样品含量测定
用紫外分光光度计在标准溶液确定的最大吸收波
长处测定提取液的吸光度。
３　结果与讨论
３．１　最大检测波长的确定
按照２．１．２的方法对标准品进行紫外扫描，结果
见图１。
图１　烯丙基异硫氰酸酯的紫外扫描图谱
Ｆｉｇ．１ＵＶ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ｏｆ　ａｌｙｌ　ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ
　　由图１可知，烯丙基异硫氰酸酯在２４９ｎｍ处有最
大吸收峰，因此，检测波长确定为２４９ｎｍ。
３．２　标准曲线线性关系
按照２．３的步骤，测定工作溶液在２４９ｎｍ处的吸
光度值，结果见表１。
表１　标准溶液的吸光度值
Ｔａｂｌｅ　１Ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ
Ｃ（μｇ／ｍＬ） １０　 ２０　 ３０　 ４０　 ５０　 ６０　 ７０　 ８０
Ａ　 ０．１０５９　０．２３６８　０．３６５９　０．４９０７　０．６１４９　０．７４０５　０．８６３３　１．０１３３
　　以浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，拟合的线性
方程为Ｙ＝０．０１２７Ｘ－０．０１３，相关系数（Ｒ＝０．９９９７）。
线性回归表明标准品溶液的浓度与光谱吸收值线性在
０～８０μｇ／ｍＬ范围内相关性较好，在此浓度范围内测
—０１１—
分析检测　　第４１卷 第１０期
２０１６年１０月
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Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｎｄｉｍｅｎｔ
定结果比较准确。
３．３　精密度
称取样品８份，按２．２方法进行处理和测定，结果
见表２。
表２　重复性试验
Ｔａｂｌｅ　２Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ　ｔｅｓｔ
组号
称样量
ｍ１（ｇ）
吸光度
（Ａ）
测定值
ｍ２（ｍｇ）
含量
Ｗ（％）
平均含量
Ｗ（％）
相对标准
偏差ＲＳＤ
（％）
１　 ２．２６　 ０．４６２３　 １．８７０　 ０．０８３
２　 ２．１８　 ０．４４４２　 １．８００　 ０．０８２
３　 ２．１９　 ０．４２７４　 １．７３５　 ０．０７９
４　 ２．３１　 ０．４３１９　 １．７５０　 ０．０７６　 ０．０７９　 ３．６１
５　 ２．２１　 ０．４１１０　 １．６７０　 ０．０７６
６　 ２．２５　 ０．４３０８　 １．７４５　 ０．０７８
７　 ２．３０　 ０．４３８８　 １．７８０　 ０．０７７
８　 ２．２０　 ０．４４４８　 １．８００　 ０．０８２
　　由表２可知，８组样品的ＲＳＤ＜５％，表明本实验
方法具有良好的重现性，条件合理。
３．４　加标回收率实验
称取样品３份，分别添加适量标准品，按２．２方法
进行处理测定，以加标测得量减去原样含量，除以加样
量，计算回收率，结果见表３。
表３　方法回收率和相对标准偏差测定结果
Ｔａｂｌｅ　３Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ
ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｗａｓａｂｉ　ｊａｐｏｎｉｃａ
％
样品
回收率
１　 ２　 ３
回收率平均值
相对标准偏差
ＲＳＤ
山葵根茎样品＋０．１ｍｇ
标准品 ８５　 ８５　 ９０　 ８６．７　 ３．３３
山葵根茎样品＋０．５ｍｇ
标准品 ８８　 ８９　 ９３　 ９０　 ２．９４
山葵根茎样品＋１．０ｍｇ
标准品 ９８　 １００　 ９８．５　 ９８．８　 １．０９
　　由表３可知，该方法的加标回收率在８６．７％～
９８．８％之间，ＲＳＤ＜５％，表明该方法具有可行性。
４　结论
本实验参考文献，采用紫外分光光度法，以烯丙基
异硫氰酸酯为对照品，做了系统实验，结果表明：山葵
根茎中异硫氰酸酯总量为０．０７９％，回归方程为 Ｙ＝
０．０１２７Ｘ－０．０１３（Ｒ＝０．９９９７），精密度（重复测定样品
的ＲＳＤ）＜５％，达到了准确测定山葵根茎中异硫氰酸
酯含量的要求。
在获得标准工作曲线的条件下，测定一个样品仅
需１ｈ左右，达到了快速测定的目的；该方法所需原料
用量少，操作步骤少，是一种简便实用的方法，对山葵
质量控制具有重要意义。
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第４１卷 第１０期
２０１６年１０月
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