全 文 ：第 25卷 第 7期
2 0 0 7年 7月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 25 No. 7
Ju.l 2 0 0 7
中华中医药
1504
学刊
HPLC法测定葶苈降血脂片中熊果酸含量的探讨
庄永峰
(莆田市药品检验所, 福建 莆田 351100)
摘 要:目的:建立葶苈降血脂片中熊果酸的含量的测定方法。方法: 采用高效液相色谱法, 色谱柱为 ZORB-
AX SB - C
18
色谱柱 ( 4. 6mm @ 150mm, 5Lm ), 检测波长为 215nm, 流动相为甲醇 -水 -醋酸铵 -乙腈
( 9B25B0. 8B65), 柱温为室温,流速为 1. 0mL# m in- 1。结果: 熊果酸的含量在 72 ~ 360Lg范围内与峰面积呈良好
的线性关系, r = 0. 9995, 平均回收率为 100. 3% ( n = 5)。结论: 方法操作简便,快速, 结果准确可靠。
关键词: HPLC法; 葶苈降血脂片;熊果酸; 含量测定
中图分类号: R285. 5 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2007) 07 -1504 - 02
HPLC Determ inat ion of U rso lic Ac id in T ing liz i J iangxuezh i Tab le ts sD iscution
ZHUANG Yong-feng
( Put ian Institute for D rug Contro,l Pu tian 351100, Fu jian, Ch in a)
Abstrac:t Ob jective: To e stablish i am e thod fo r de te rm ina tion o f u rso lic ac id in T ing li jiangxuezhi tab le ts. M e thods:
To determ ine urso lic acid in T ing li jiangxuezhi tab le ts byH PLC. The liquid ch rom a tog raphy w as carried ou t by a ZORBAX
SB -C18 ( 4. 6mm @ 150mm, 5Lm ) w ith dectection w ave lenth a t 215nm. Them obile phasew as m ethano l -wa ter - ace tic -
acetonitrile( 9B25B0. 8B65). The flow ra tew as 1. 0mL# m in- 1. Results: The car lib ra tion cu rve was linear in the range of
72~ 360Lg for urso lic ac id( r = 0. 9995). The ave rage recovery ( n = 5) w as 100. 3% . Conc lus ion: Theme thod is rapid,
accu ra te and re liab le.
Keywords: HPLC; T ingli Jingxuezhi tab le ts; u rso lic ac id; dete rm ina tion
收稿日期: 2007 - 02 - 25
作者简介:庄永峰 ( 1964 - ) ,男, 福建莆田人,副主任中药师,主要
从事中药材及饮片、中成药分析和检验。
葶苈降血脂片,由葶苈子、山楂、茵陈、黄芩、泽泻、大黄、
木香 7味药物提取精制而成。具有宣通导滞、通络散结、消
痰渗湿的功能,可用于高脂血症 [1]。其中山楂为药食两用的
药材, 为蔷薇科植物山里红 Cra taegus p innatifida Bge. var.
majo rN. E. B r. 或山楂 Cra taegus p innatifida Bge的干燥成熟
果实, 具有消食健胃、行气散瘀的功效 [2]。据文献报道, 山楂
中含有熊果酸等三萜类成分 [3 -4 ]。研究发现其具有较显著
的免疫作用和抗促癌, 抗致癌,诱导 F9畸胎瘤细胞分化和抗
血管生成作用 [5 - 6]。原质量标准为薄层扫描法测定样品中
熊果酸的含量 [1], 操作复杂,且受诸多不易控制因素影响, 如
薄层板的均匀性, 点样的准确度, 层析时的蒸汽饱和度, 温
度,喷显色剂的量和均匀度, 显色时温度差异,相对湿度等,
直接导致定量分析结果重现性, 精密度, 稳定性欠佳。为了
更加有效﹑方便控制其内在质量, 确保其疗效, 在参考文献
资料 [7- 9 ]及实验研究的基础上建立了样品前处理简单, 操作
方便,快速, 结果准确可靠的高效液相色谱法测定本制剂中
熊果酸的含量,并参考文献 [10 -12]中的流动相, 选择并优
化色谱条件等,现介绍如下。
1 仪器和试剂
Ag lent 1100 series型高效液相色谱仪 (美国 )。Ag ilen t
se rial泵及 VWD检测器。 SB2200 -T型超声波清洗器。 BS
- 210S型电子天平 (德国 )。熊果酸对照品 (供含量测定
用 )由中国药品生物制品检定所提供; 葶苈降血脂片 (规格
每片 0. 3g, 批号: 20041006, 20020301, 20020303)由福建某
药业有限公司提供。甲醇﹑乙腈均为色谱纯,水为超纯水,
其它试剂均为分析纯。
2 色谱条件
色谱柱: ZORBAX SB -C18 ( 4. 6mm @ 150mm, 5Lm ) ;
流动相:甲醇 -水 -醋酸铵 -乙腈 ( 9B25B0. 8B65 );检测波
长: 215nm。柱温为室温 ; 流速为 1. 0mL# m in- 1; 样量为
10LL; 熊果酸色谱峰与相邻峰之间的分离度大于 1. 5; 理论
塔板数按熊果酸的峰计不低于 5000。
3 溶液的制备
3. 1 对照品溶液 取熊果酸对照品适量, 精密称定, 加甲
醇制成每 1mL含 0. 072mg的溶液。
3. 2 供试品溶液 取本品 36片, 除去包衣,精密称定, 研
粉,精密称定约 10g, 置碘量瓶中, 加乙醚 120mL, 超声提取
约 3h,过滤, 滤液蒸干,残渣加甲醇溶解, 转移至 10mL容量
瓶中,并稀释至刻度, 摇匀。即得。
4 方法考察
4. 1 线性关系 精密量取 3. 1项下对照品溶液 1. 0、2. 0、
3. 0、4. 0、5. 0mL于 10mL量瓶中, 用甲醇稀释至刻度。按
上述色谱条件, 进样 10LL, 进行测定。回归方程为 A =
1625. 8C - 6. 138, r = 0. 9995结果表明熊果酸含量在为 72
~ 360Lg范围内,与峰面积呈良好的线性关系。
4. 2 重复性试验 取 20041006批样品 5份, 每份约 11g,
精密称定,均按 / 3. 20项下方法制成供试品, 并在上述的色
谱条件下测定,测得熊果酸峰面积积分值的 RSD为 2. 2%
( n = 5) ,表明重复性良好。
4. 3 精密度试验 同一供试品溶液, 连续进样 5次, 测得
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DOI：10.13193/j.archtcm.2007.07.194.zhuangyf.087
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峰面积 RSD= 1. 6% ( n = 5) ,表明精密度良好。
4. 4 回收率试验 取已知含量的葶苈降血脂片 (批号:
20041006) 5份,各取 18片, 去包衣, 研粉, 精密称定约 5g,
于每份中分别精密加入 1m L熊果酸对照品溶液 (精密称取
8. 53m g对照品, 置 10m L容量瓶中, 甲醇定容 ), 挥去甲醇,
按 / 3. 20项下方法提取,制备供试液, 并在上述的色谱条件
下测定含量,记录色谱图, 计算熊果酸回收率, 见表 1。结
果表明回收率高。
表 1 回收率试验结果
序号 称样量
( g)
样品含量
( Lg)
加入对照
品量 ( mL)
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
1 5. 0291 823. 1 1 99. 7
2 5. 1081 836. 0 1 100. 3
3 5. 2716 862. 8 1 98. 8 100. 3 1. 4
4 5. 3161 870. 1 1 102. 3
5 5. 4218 887. 4 1 99. 6
4. 5 稳定性试验 同一供试品溶液, 按上述色谱条件,定
时进样测定,分别在 0、2、4、8、24h进行测定,测得供试品中
熊果酸峰面积积分值的 RSD= 2. 6% ( n = 5)。结果表明
在 24h内供试品溶液是稳定性良好。
4. 6 阴性试验 按上述色谱条件, 吸取对照品溶液﹑供
试品溶液及缺山楂 / 3. 20项下方法制备的的阴性溶液各
10LL进样检测。在供试品色谱中,与对照品色谱谱相应的
位置上有着相同保留时间的色谱峰, 而阴性溶液在此保留
时间无峰干扰 (见图 1)。
图 1 对照品 ( A ) 供试品 ( B) 阴性对照 ( C)色谱图
表 2 样品测定结果 ( n = 3)
批号 厂家 含量
20041006 福建明华药业有限公司 0. 046m g /片或 163. 67Lg /g
20020301 福建明华药业有限公司 0. 047m g /片或 165. 60Lg /g
20020303 福建明华药业有限公司 0. 045m g /片或 162. 70Lg /g
4. 7 样品测定 取本品 3批,按 / 3. 20项下方法制备供试
品溶液并按上述色谱条件, 对照品溶液与供试品溶液各进
样 10LL, 分别测定熊果酸含量, 见表 2。
5 讨 论
先后用甲醇 -水 -冰醋酸 -三乙胺 ( 83B17B0. 04B0. 01)、
甲醇 -水 -冰醋酸 -三乙胺 ( 85B15B0. 04B0. 01)﹑甲醇 -
水 -冰醋酸 -三乙胺 ( 75B25B0. 04B0. 01)﹑甲醇 -水 -醋
酸铵 -乙腈 ( 9B25B0. 8B67 )为流动相, 但主峰分离效果均
不理想。最后采用甲醇 -水 -醋酸铵 -乙腈 ( 9B25B0. 8B
65)为流动相实验, 所得熊果酸峰形良好, 分离度较高, 基
线较平稳,并且柱效高, 阴性对照无干扰峰。
实验过程中曾参考文献 [ 13 -14 ]选用 210、220nm 作
为检测波长,但其稳定性及灵敏度均不及 215nm,故最终采
用 215nm作为检测波长。
熊果酸为非极性的五环三萜酸, 可溶于氯仿、甲醇、乙
醇、丙酮, 不溶于水和石油醚。而齐墩果酸也为三萜酸, 且
极性与熊果酸极为接近, 山楂中含有熊果酸与齐墩果
酸 [15 - 17], 这样必然导致在薄层板上很难将两者分离开来。
本实验采用高效液相法可将葶苈降血脂片中山楂的熊果酸
峰与齐墩果酸峰完全分离且操作简单﹑快速﹑精密度高﹑
重复性好﹑结果准确可靠, 优于原质量标准熊果酸含量测
定,可做为该制剂的质量控制。
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