全 文 ：G u iz h o u M ed i
e a l J
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a l
,
20 0 5
,
V o l
.
29
,
N o
.
1
· 实验研究 ·
H P L C 法测定滇白珠药材中水杨酸的含量
贵阳中医学院 ( 5 5 0。。2) 麻秀萍 蒋朝晖 贾宪生
中图分类号 : R 28 4. 1 文献标识码 : B 文章编号 : 10 0 0一 7 4 4X ( 20 0 5 ) 0 1一 0 0 7 2一 0 2
!
1
.
|
we
J
一
滇 白珠 为杜鹃花科植物滇 白珠 「G au l t h er ia
y u n n a n e n s i s ( F
r a n e h ) R e hd
. 〕的干燥全株 , 又名透
骨香 ,具清热解毒 、 活血祛癖 、祛风除湿 、降气平喘的
作用川 。 滇白珠含有挥发油 、 有机酸 、 三菇类 , 黄酮
营类 、香豆精类 、 木脂素昔类等多种化合物仁2一 5〕 ,其
中水杨酸 ( S a l i e yl ie a e id , G H 6 q )具有抑菌 、镇痛 、
抗炎等作用 ,是常用治疗风湿病 、皮肤病外用制剂的
有效成分之一 。 当滇白珠用 于内服制剂时 , 由于一
定剂量的水杨酸通过消化道 吸收 , 可产生刺激性毒
副作用困 , 因此应确切掌握滇白珠药材中水杨酸的
含量 。 目前尚未见滇白珠药材中水杨酸的含量测定
方法的报道 ,为此建立高效液相色谱法测定滇白珠
药材中水杨酸的含量 。
1 仪器及试药
A g il en t 110 。 高效液相色谱仪 (在线脱气机 、二
元梯度泵 、 自动进样器 、 智能柱温箱 、 二极管阵列检
测器 、 化学工作站等 ) ; C X 一 25 。 型超声波清洗器
(功率 2 5OW , 频率 3 4 K H : ,北京市医疗设备二厂 ) ;
滇白珠药材由贵州健友制药有限公司提供 ,经贵州
省药检所林开 中副主任药师 鉴定 ;水杨酸对照 品
(0 10 6一 9 7 0 2 ,供含量测定用 , 中国药品生物制品检
定所 ) ;甲醇为色谱纯 ;其他试剂均为分析纯 ;水为纯
净水 。
图 1 滇白珠药材中水杨酸分离色谱图
(水杨酸 t R ~ 5 . 9 9 3m in )
2
.
2 对照品溶液的制备 精密称取水杨酸对照品
适量 ,用甲醇溶解 , 制成每 l m l 中含 20 拼g 水杨酸对
照品溶液 。
2
,
3 供试液的制备 精密称取滇白珠药材粉末
4g
,置具塞锥形瓶中 ,精密加人甲醇 50 m l , 密塞 , 超
声提取 1 . 5小时 ,放冷 , 用甲醇补足减失的重量 , 摇
匀 ,滤过 ,精密量取滤液 25 m l , 回收甲醇至干 ,残 留
物用适量甲醇溶解 ,转移至 5m l 量瓶中 ,加甲醇至
刻度 ,摇匀 ,用 0 . 45 拼m 微孔滤膜滤过 , 即得 。
2 实验方法
2
.
1 色谱条件 H y p e r s i l O D S ( 5拼m , 2 5 0 m m X
4
.
0
~
1
.
d
. ,
A g i le nt )色谱柱 , 甲醇一 0 . 1%磷酸溶
液 ( 5 0 , 5 0 )为流动相 , 流速 0 . 7m l · rn i n 一 , , 柱温
35 ℃ ,检测波长 30 0 n m 。 在上述色谱条件下 , 水杨
酸与其他成分分离良好 ,理论板数以水杨酸峰计算
不低于 5 0 0 ,分离度大于 1 . 5 ,结果见图 1 。
3 结 果
3
.
1 线性关系的考察 精密称取水杨酸对照品适
量 ,用甲醇溶解 , 制成每 l m l 中含 。. 4 2l m g 水杨酸
储备液 , 用储备液制成每 l m l 中含 4 . 21 、 10 . 52 、
2 1
.
0 4
、
3 1
.
5 6
、
4 2
.
0 8
、
5 2
.
6 0拌g 的对照品溶液 ,精密
吸取对照品溶液 5川依次进样 , 记录色谱图 。 以水
杨酸的浓度 (拼9 . m l一 ` )为横坐标 , 峰面积值为纵坐
标进行 线 性 回 归 , 得 回 归方 程 Y 一 7 . ZO12 X
一 4 . 1 1 6 8 , r = 0 . 9 9 9 7 ( n = 6 ) , 线性范围为 4 . 2 1一
5 2
.
60拼9 . m l一 1 。
3
.
2 检测限 调节对照品浓度 ,按 “ 色谱条件 ” 测
定 ,进样 5川 , 使信噪比为 3 , 求得最低检测限为
0
.
0 4拌g 、 m l 一 1 。
3
.
3 稳定性试验 取滇白珠粉末 4 9 ,精密称定 ,按
供试液的制备项下方法制备供试液 ,精密吸取 5川 ,
进样 5 次 ,时间间隔为 。 、 2 . 5 、 5 . 0 、 7 . 5 、 1 0 小时 ,记
贵州医药 2 0 0 4 年 l 月第 约 卷第 1期
录色谱图 ,供试品中水杨酸含量平均值为 5 () . 8 1拜.g
g 一 ` , R S D一 o . 5() % ,结果表明本试验方法稳定 ,供试
液至少在 10 小时内测定较稳定 。
3
.
4 精密度试验 精密吸取水杨酸对照 品溶液
( 2 1
.
0 4拼g / m l ) 5仁 l ,连续进样 5 次 , 记录色谱图 。 5
次进样测得水杨酸含量平均结果为 21 . 0 6拜9 . m l一 ’ ,
R S D一 0 . 10 % , 表明精密度良好 。
3
.
5 重复性试验 取滇白珠粉末 5 份 ,各 4 9 ,精密
称定 ,按供试液的制备项下方法制备供试液 ,精密吸
取 5川进样 , 记录色谱图 。 5 份样品水杨酸含量平
均值为 51 . 14拌9 . 9 一` , RDS 一 1 . 10 % , 表明重复性良
好 。
3
.
6 加样回收试验 取滇白珠粉末 5 份 , 各 2 9 , 精
密称定 , 于每份中加人适量对照品 ,按供试液的制备
项方法制备供试液 ,进样 ,记录色谱图 ,计算水杨酸
回收率 ,平均回收率为 98 . 30 % , R SD 一 1 . 83 % , 表
明回收良好 。
表 1 加样回收试验测定结果 (n 一 5)
称样量
( g )
样品中水 加人水杨 测得水杨
杨酸的量 酸的量 酸的量 回收率 平均值
(% ) ( % )
R S D
(% )
9 8
.
3 0 1
.
8 3
09862205.97108
10 4
.
3 9
10 2
.
3 2
10 3
.
1 5
10 6
.
7 9
址801457二51
1
.
0 9 1 1
1
.
0 00 1
1
.
0 00 2
1
.
0 0 0 2
1
.
0 90 1
奈黑ōé
3
.
7 样品测定结果 按上述方法和色谱条件测定
了贵州不同产地滇白珠药材水杨酸的含量 , 结果见
表 2 。
表 2 贵州不同产地滇白珠药材中水杨酸的含量 ( n一 3)
含量
(拜9 . 9 一 1 )
平均含量
(滩 . 9一 1 )
5 0
.
7 6 5 1
.
3 2
R S D
(% )
1
.
0 7
进行水杨酸含 量测定 的结果 表明 , 水 杨 酸含量为
3 4
.
4 6一 6 2 . 4 9 拌9 . 9 一 ` ( 0 . 0 0 3 4%一 0 . 0 0 6 2 % ) , 远远
低于中国药典对阿司匹林中游离水杨酸限量不高于
。 . 1%的规定 ,据此初步说明黔产滇白珠内服较为安
全 。 我们还将进一步对不同采收季节 、 不同部位 、 不
同产地的滇白珠药材中水杨酸含量进行测定 , 为滇
白珠用于内服制剂时提供安全用药的实验数据 。
4
.
2 提取条件的选择 据水杨酸易溶于甲醇 、 乙
醇 、 乙醚 , 可溶于乙酸 乙酷 , 微溶于水的特性 , 以甲
醇 、 乙醇为提取溶剂 , 比较了超声提取和回流提取法
及不同提取时 间 (l . Oh 、 1 . h5 、 2 . Oh) 的提取效果 。
结果表明滇 白珠药材 以 甲醇 为溶剂超声 (功率
2 5OW
, 频率 3 4 K H z )提取 1 . 5 小时 ,较为适宜 。
4
.
3 分离条件的选择 本文选择了 H yP er isl O D S
( 5拌m , 2 5 0m m X 4 . Om m 1. d . , A g i l e n t ) , H y p e r s i l
O D S Z ( 5拼m , Zo o m m X s m m 1. d . 大连依利特 ) , D i-
a m o n s i l侧 (钻 石 ) H P I , C C 1 8 ( 5“ m , 2 5 0m m 只
4
.
6m m i
.
d
.
, 迪 马 公 司 ) 三种 色 谱 柱 , 及 甲 醇
一 0 . 1%磷酸溶液 (3 o : 7 0) , 甲醇 一 0 . 2%冰醋酸溶
液 ( 4 5 : 5 5 ) , 乙睛一 0 . 1%磷酸溶液 ( 5 0 : 5 0 ) , 甲
醇一 0 . 1%磷酸溶液 ( 50 : 5 0) 四种流动相进行系统
适用性试 验 , 结果表 明在 H y p e r s i l O D S ( 5拜m ,
2 5 o m m 又 4 . Om m 1. d . , A g il e n t ) 为色谱柱 , 甲醇
一 0 . 1%磷酸溶液 ( 50 : 50) 为流动相 , 流速 。 . 7m l/
m in
,柱温 35 ℃ ,检测波长为 30 0 n m 的色谱条件下 ,
供试品中水杨酸得到较好分离 ,理论板数达到 6 0 0 0
以上 ,分离度为 2 . 20 ,从而建立本文检测方法 。
4
.
4 检测波长 的确定 对水杨酸 于 1 9 0 n m 一
4 o o n m 波长下扫描 , 最大吸收波长为 Z o 3 n m , 特征
吸收为 2 3 6 n m 和 3 o 6 n m 。 在 3 0 0 n m 波长处水杨酸
吸收峰灵敏度较高 ,其他色谱峰干扰较小 ,水杨酸色
谱峰的分离最为理想 , 故选用 3 0 0 n m 作为检测 波
长 。
参考文献
大方
安顺
3 4
.
4 6
6 2
.
4 9
47985103513462
4 讨 论
4
.
1 文献报道滇白珠通过消化道吸收时 ,高浓度用
药对胃粘膜 、组织 、 血管有刺激作用 ,低浓度无明显
改变 , 可能与滇白珠含水杨酸类化合物有关 sj[ 。 经
本文研究建立的方法 , 对贵州省部分地区的滇白珠
贵州省药品监督管理局 . 贵州省中药材 、 民族药材质量标
准 ( 2 0 0 3 年版 ) . 贵阳 :贵州科技出版社 , 20 0 3 . 3 0 8 .
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