全 文 ：论 　 　著
中药皂荚提取物对肝癌细胞
TGF-β1mRNA信号表达的影响
彭望君1 ,指导:陆定波 2
(1.湖北中医学院 2007级硕士研究生 ,湖北 武汉 430061;2.湖北省中医院 ,湖北 武汉 430061)
　　摘要:目的　探讨皂荚提取物对肝癌细胞 TGF-β 1mRNA信号表达的影响。方法　建立昆明种小鼠肿瘤模
型 ,随机分为皂荚提取物组高 、中 、低剂量组 ,金龙胶囊阳性对照组 , 模型组 , 分别给与高 、中 、低不同浓度的皂荚提
取物与阳性对照药金龙胶囊 , 灌胃 15天后 ,处死小白鼠 , 进行肝功能和肝癌细胞学指标检测。结果　皂荚提取物
组与金龙胶囊组小鼠 TGF-β 1表达阳性率明显高于模型组 , 且 α-L-岩藻糖苷酶(AFU)与模型组比较有统计学
意义(P<0.05)。结论　中药皂荚提取物可通过对肝脏 TGF-β 1mRNA信号高表达抑制肝癌细胞的增殖。
　　关键词:肝癌细胞;皂荚提取物;转化生长因子 -β 1;实验研究
中图分类号:R285.5　　　　　　　文献标识码:A　　　　　　文章编号:1000-0704(2010)05-0006-02
　　近年来研究发现 ,皂荚浓缩液具有抗癌的特性 ,可以有效抑
制血癌及多种人类固体肿瘤 ,包括乳腺癌 、肝癌和前列腺癌等癌
细胞生长 [ 1～ 3] 。笔者在此基础上 , 提取皂荚浓缩液进行实验 , 结
果证实皂荚提取物对人肝癌细胞的增殖有显著抑制作用 , 可调
控肝癌相关基因的表达。
1　材料与方法
1.1　肿瘤模型
取清洁级昆明小鼠 60只 ,体重为(20 ±2)g, 雌雄各半。 除
空白对照组 10只 ,余小鼠予肝癌细胞株 H22移植 , 建立昆明种
小鼠右上肢皮下移植肿瘤模型。
1.2　实验分组及给药
成瘤后小鼠随机分为 5组(每组 10只)即皂荚提取物组高
剂量组 、中剂量组 、低剂量组 , 金龙胶囊阳性对照组 , 模型组。 各
组每日 3次分别给予皂荚提取物 18.02g/次 、9.01g/次 、4.505g/
次 , 金龙胶囊 9.01g/次 , 生理盐水 9.01mL/次灌胃 , 持续给药 15
天。第 16天处死小白鼠 ,采样(肝脏组织 ,眼球取血等)待检。
1.3　观察指标和检测方法
1.3.1　肝功能测定:采用全自动生化分析仪检测。
1.3.2　TGF-β 1免疫组化检测:TGF-β石蜡切片组化法 ,使用
的是 GENETECHCOMPANYLIMITED生产的两步法抗兔 /鼠通
用型免疫组化试剂盒 。
1.4　统计学分析
应用 EXCEL2000软件进行统计学处理 , 实验中计量资料以
均数 ±标准差表示。多组样本间比较用方差分析检验 , 方差分
析两两差异比较用 LSD-t检验 , 两者间比较用均数比较。 P<
0.05为有显著统计学差异;P<0.01为有非常显著统计学差异。
2　结果
2.1　肝功能检测
见表 1。
表 1　各组 ALT、AFU检测水平
级别 n ALT(u/L) AFUnmol/(mL· h)
皂荚高剂量组 10 80.3±6.3＊ 1450±230＊■
皂荚中剂量组 10 72.3±6.4＊ 1318±156＊■
皂荚低剂量组 10 78.0±6.3＊ 1485±280＊■
金龙胶囊组 10 73.5±5.2＊ 1278±189＊■
模型组 10 87.3±2.3＊ 1899±354＊＊
空白对照组 10 50.0±1.4 878±53
　　与空白对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;与模型组比较 , ■P<
0.05。
皂荚提取物高 、中 、低剂量组 ,金龙胶囊阳性对照组 , 模型组
ALT值均明显高于空白对照组(P<0.05), 皂荚提取物高 、中 、低
剂量组 ,金龙胶囊阳性对照组 , 模型组组间差异无统计学意义(P
>0.05)。皂荚提取物高 、中 、低剂量组 , 金龙胶囊阳性对照组
·6· 湖北中医杂志　　　　　　 　　　　　　　　　2010年第 32卷第 5期
AFU值明显低于模型组(P<0.05), 其中皂荚提取物中剂量组
AFU值又低于高 、低剂量组 ,与金龙胶囊阳性对照组之间差异无
显著性(P>0.05)。
2.2　TGF-β 1免疫组化检测
见下图(紫色为细胞核 ,棕黄色为细胞膜):
在各组中随机抽取样本进行 TGF-β 1免疫组化检测(细胞
膜染色),在 200倍光学显微镜显微镜下观察 , 根据阳性细胞在
全部组织细胞中所占比例以及阳性细胞染色强度判定实验结果
(由于 TGF-β 信号转导影响基因转录 、控制细胞生长 , 介导
TGF-β 对肝细胞生长的抑制作用 , 故染色强度越高 , 对癌细胞
抑制越强)。图中皂荚提取物高(+++)、中(+++++)、低
(+++)剂量组 、金龙胶囊组(+++)染色提示 TGF-β 表达
较模型组明显增强 , 其中皂荚中剂量组染色提示 TGF-β 表达最
高 , 强于其他各治疗组。空白对照组染色(++)TGF-β表达较
弱 , 模型组染色(+)TGF-β 表达最弱。
3　讨论
转化生长因子 β(transforminggrowthfactorβ)是一个多功能
的生长因子超家族 , 其至少有 5种异构体(TGFβ 1 ～ 5), 其中
TGFβ 1最为常见。近年来研究发现:TGFβ 1在肝脏及一些肝癌
细胞系能引起癌细胞的增殖抑制 , 与肝癌等多种肿瘤的发生发
展有着密切的关系 [ 4] 。 α-L-岩藻糖苷酶是一种溶酶体酸性水
解酶 , 在诊断肝细胞癌中敏感性好 ,阳性率高 , 是 AFP阳性率的
三倍以上 , 对 AFP阴性病例及小细胞肝癌的诊断价值极大 ,是早
期原发性肝癌诊断的常用指标之一。
中药皂荚(GlelitsiasinensisLam.)在治疗肿瘤方面为常选之
药 [ 5, 6] , 它具有多种生理活性和良好的药理作用 , 具有保护心脏 、
抗肿瘤 、保肝等活性功能 ,是治疗乳腺癌 、肺癌 、肝癌等癌症常用
的配伍药 , 《本草纲目》称其为治疗 “诸恶毒及疠风要药 ”, 《本草
汇言》曰其锐利可直达病所 “拔毒祛风”等作用 [ 7] 。 香港理工大
学与美国国立癌症研究所研究发现 , 皂荚浓缩液具有抗癌的特
性 ,可以有效抑制血癌及多种人类固体肿瘤 , 包括乳腺癌 、肝癌
和前列腺癌等癌细胞生长。鉴于皂荚提取物对人肝癌细胞的增
殖有显著抑制作用 ,促进细胞凋亡 , 调控肝癌相关基因的表达与
对照组相比具有显著统计学意义 ,故推测该药对肝癌细胞 TGF
-β 1信号系统有调节作用。
本实验研究显示:肝癌细胞肿瘤模型小鼠在给与不同药物
治疗后 ,小鼠的 α-L-岩藻糖苷酶水平较模型组明显下降(P<
0.05), TGF-β 1免疫组化检测阳性率明显高于对照组 , 其中皂
荚提取物中剂量组的 TGF-β 1表达最强 , 与对照组比较差异最
大 ,表明其对肝癌细胞的抑制作用最强。
因此认为 ,中药皂荚提取物对肝癌细胞 TGF-β /Smads信号
系统有调节作用 ,能够抑制人肝癌细胞增殖 ,促进细胞凋亡。其
调控肝癌相关基因的表达与对照组相比具有显著统计学意义 ,
故在治疗肝癌的研究方面具有其特殊的疗效 , 有进一步研究和
临床推广应用的价值。
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(收稿日期:2009-12-17　编辑:冀振华)
·7·2010年 5月第 32卷第 5期May.2010.Vol.32, No.5 　　　　　　　　　　　　　　 湖北中医杂志HubeiJournalofTCM