全 文 ： 2010, Vol. 31, No. 02 食品科学 ※分析检测224
反相高效液相色谱法测定雪莲果叶中的绿原酸
陈红惠 1,2，彭光华 3
(1.华中农业大学食品科学技术学院，湖北 武汉 430070；2.文山学院生化系，云南 文山 663000；
3.西藏自治区质量技术监督局，西藏 拉萨 540000)
摘 要：采用反相高效液相色谱法对雪莲果叶中的有效成分绿原酸进行分离，并对其含量进行测定，建立反相高
效液相色谱法测定雪莲果叶中绿原酸含量的方法。色谱柱为Hypersil ODS-2 C18柱(4.6mm× 300mm，5μm)，流
动相为乙腈 -体积分数 0.5%磷酸溶液(8:92，V/V)，流速为 1.0mL/min，检测波长为 325nm，柱温为 25℃。绿原酸
在 10～100μg/mL范围内呈良好线性关系，相关系数为 0.9999，加标回收率为 97.0%，RSD为 1.10%。本法快速、
简单、准确、分离度好，可用于实际样品的检测。
关键词：雪莲果叶；绿原酸；反相高效液相色谱法
Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatographic Determination of Chlorogenic Acid in Yacon Leaves
CHEN Hong-hui1,2，PENG Guang-hua3
(1. College of Food Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China；
2. Department of Bio-chemistry, Wenshan University, Wenshan 663000, China；
3. Tibet Bureau of Quality and Technical Supervision, Lhasa 540000, China)
Abstract ：A method using reversed-phase high performance liquid chromatography was developed for the determination of
chlorogenic acid in yacon leaves, an active substance. The chromatographic separation was achieved on a Hypersil ODS column
(4.6 mm × 300 mm, 5 μm) using a mobile phase composed of acetonitrile and 0.5% phosphoric acid (8:92, V/V) at a flow rate
of 1.0 mL/min. The detection wavelength and the column temperature were set at 325 nm and 25 ℃, respectively. There was a
good linear relationship between peak area and chlorogenic acid concentration over the range of 10－100 μg/mL (r = 0.9999),
and the average spike recovery for chlorogenic acid was 97.0% with a relative standard deviation (RSD) of 1.10%. The developed
method presents the benefits of rapidity, simplicity, high accuracy and good separation.
Key words： yacon leaves；chlorogenic acid；reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC)
中图分类号：O657.72 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2010)02-0224-04
收稿日期：2009-02-22
作者简介：陈红惠(1979—)，女，讲师，硕士研究生，主要从事食品分析与开发研究。E-mail：suplgrl@163.com
雪莲果(Smallanthus sonchifolius，俗名 yacon)又称
雪莲薯、亚龙果、亚贡，为菊科多年生草本植物，原
产于南美的安第斯地区[1]。近年研究发现，雪莲果中含
有低聚果糖、酚酸、类黄酮、萜类、挥发油等成分，
可清肝解毒、清理肠胃、排毒通便，并有降血糖、血
脂，抑菌等药理作用[ 2 -4 ]，其保健功能和药用价值受到
社会普遍关注，对于雪莲果及其叶的研究已成为热点。
绿原酸是雪莲果叶中酚酸的主要成分之一，研究表明绿
原酸具有广泛的生物活性，可以有效清除体内自由基，
具有较强的抑制突变能力，被认为是癌症的有效防护
剂。此外绿原酸具有较强的抑菌作用、利胆、降压、
显著增加胃肠蠕动和促进胃液分泌等药理作用[5-6]。绿原
酸已广泛应用于食品、医药、保健和日用化工等领域。
目前对于绿原酸的测定国内外已有很多研究，但主要是
针对金银花、杜仲、葵花籽等中的绿原酸进行研究，
对于雪莲果叶中的绿原酸采用 H PLC 分析的报道较少
见。绿原酸测定的方法主要有分光光度法、薄层扫描
法、HPLC法等，本实验采用反相高效液相色谱对雪莲
果叶中绿原酸进行测定，建立测定雪莲果叶中绿原酸的
高效液相色谱方法，旨在确定一种简单、快速和准确
测定雪莲果叶绿原酸的分析方法，为今后雪莲果叶的进
一步研究和综合开发利用提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
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雪莲果叶 云南陆良雪莲果种植基地。
绿原酸标准品 中国药品生物制品检定所；乙腈
(色谱纯) 国药集团化学试剂有限公司；磷酸(分析纯)
天津市凯通化学试剂有限公司；双蒸水等所有试剂均通
过 0 .45μm 滤膜过滤，超声脱气后使用。
1.2 仪器与设备
高效液相色谱仪(配有 1525泵，2998光电二极管矩
阵检测器，717自动进样器，Empower软件系统) 美
国Water公司；EYELA N-1000型旋转蒸发仪 日本东
京理化公司；CS101-1C型恒温干燥箱 广东全科化玻仪
器有限公司。
1.3 方法
1.3.1 标准品溶液的制备
精密称取绿原酸标准品 10.0mg，用甲醇溶解并定容
至 10mL，制得 1.0mg/mL的绿原酸标准品贮备液，4℃
避光保存，按需稀释成不同质量浓度以待分析。
1.3.2 供试品溶液的制备
将雪莲果叶于 60℃干燥后粉碎过 80目筛，精密称
取粉末 2.0g，置 50mL锥形瓶中，加入体积分数 30%乙
醇溶液 40mL，70℃水浴提取两次，每次 1h，过滤合
并滤液，在 45℃真空减压浓缩，浓缩液加入适量无水
乙醇，除去蛋白质和多糖等杂质后，收集浓缩液，用
甲醇定容至 100mL，提取液通过 0.45μm微孔滤膜过滤，
得待测供试品溶液。
1.3.3 色谱分析的条件
色谱柱：Hypersil ODS-2 C18柱(4.6mm× 300mm，
5μm)；流动相：乙腈 -体积分数 0.5%磷酸溶液(8:92，
V/V)；流速：1.0mL/min；进样量：10μL；检测波长：
3 2 5 n m；柱温：2 5℃。
2 结果与分析
2.1 检测波长的确定
出现吸收峰，比较不同波长的色谱图，在 325nm处色
谱图响应值最大，信噪比高，基线平稳，确定 325nm
为检测波长(图 1)。
2.2 流动相的选择[7]
考察不同溶剂作为流动相进行分离的效果。使用甲
醇 - 甲酸作为流动相时样品难于取得较好的分离效果，
改用乙腈 -体积分数0.5%磷酸溶液作为流动相时可改善样
品中各成分的分离度，乙腈和磷酸溶液不同比例的样品
分离效果则不同，当乙腈 -0.5%磷酸体积比为 8:92时，雪
莲果叶中绿原酸的色谱峰达到很好的分离效果(图 2、3)。
2.3 标准曲线的绘制
图3 雪莲果叶样品色谱图
Fig.3 Chromatogram of chlorogenic acid extract of yacon leaves
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
－ 0.1
－ 0.5
18.951m
A
U
时间 /min
10 14 18 22 26 30 34
图4 绿原酸标准曲线
Fig.4 Standard curve of chlorogenic acid
35
30
25
20
15
10
5
0
y＝ 28685x－6279
R2＝ 0.9998
峰
面
积
(×
10
5 )
质量浓度 /(μg/mL)
0 20 40 60 80 100
图1 绿原酸标准品紫外扫描光谱
Fig.1 UV spectrum of chlorogenic acid standard
10
8
6
4
2
0
217.8
m
A
U
波长 /nm
220 240 260 280 300 320 340 360 380 400
325.8
图2 绿原酸标准品色谱图
Fig.2 Chromatogram of chlorogenic acid standard
12
10
8
6
4
2
0
18.417
m
A
U
时间 /min
0 5 10 15 20 25
取绿原酸标准品溶液，采用紫外分光光度计在
200～400nm波长范围内扫描，217.8nm和 325.8nm两处
分别精密吸取质量浓度为1.0mg/mL的绿原酸标准品
溶液 0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，用体积分数
50%甲醇溶液定容至 10mL，得 10、20、40、60、80、
100μg/mL的绿原酸标准品溶液。按上述色谱条件进样
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分析，测定峰面积，每个质量浓度重复进样 3 次，取
峰面积平均值，以峰面积为纵坐标，绿原酸质量浓度
为横坐标，绘制标准曲线。
如图 4所示，绿原酸回归方程为 y＝ 28685x－ 6279
(R2＝ 0.9998)，表明绿原酸进样量在 10～100μg/mL范围
内呈良好线性关系。
2.4 方法学考察[8-10]
2.4.1 精密度实验
精密吸取绿原酸标准品溶液，按上述色谱条件重复
进样 5 次，测定峰面积，测定结果见表 1。
精密吸取雪莲果叶供试品溶液 5份，按上述色谱条
件测定，计算绿原酸含量，考察方法的重现性，结果
见表 3 。
进行重复性实验时，RSD是检验方法重复性的重要
指标，在样品中被测成分含量较低时，RSD应小于 5%。
由表 3可知，测定样品中绿原酸平均含量为 0.478μg，
RSD为 1.16%，表明方法重现性良好，符合分析要求。
2.4.4 加标回收率实验　
分别精密称取已知绿原酸含量的雪莲果叶粉末 1g，
共 5份，置 50mL锥形瓶中，精密加入质量浓度为 276
μg/mL的绿原酸标准品 1mL，放置 24h，然后按照前述
样品处理方法进行制备供试品溶液，吸取滤液进样，进
行色谱测定，计算回收率，结果见表 4。
实验号 峰面积 平均峰面积 RSD/%
1 568395
2 564524
3 564160 563092.4 0.62
4 558926
5 559457
表1 雪莲果叶中绿原酸精密度实验结果(n＝5)
Table 1 Precision RSD of the method (n＝ 5)
时间 /h 峰面积 绿原酸含量 /(mg/g) 平均含量 /(mg/g) RSD/%
0 864602 0.456
2 852541 0.449
4 850875 0.449 0.449 0.88
6 848212 0.447
8 844225 0.444
表2 雪莲果叶中绿原酸稳定性实验结果
Table 2 Stability RSD of the method
实验号 绿原酸含量 /(mg/g) 平均含量 /(mg/g) RSD/%
1 0.494
2 0.484
3 0.493 0.487 1.16
4 0.486
5 0.479
表3 样品中绿原酸重现性实验结果(n＝5)
Table 3 Reproducibility RSD of the method (n＝ 5)
实验 样品中绿原酸 测出的绿原酸 回收率 平均回收
RSD/%
号 含量 /(mg/g) 含量 /(mg/g) /% 率 /%
1 0.476 0.742 96.4
2 0.480 0.744 95.7
3 0.475 0.743 97.1 97.0 1.10
4 0.472 0.745 98.9
5 0.479 0.746 96.7
表4 加标回收率的测定实验结果(n＝5)
Table 4 Average recovery for chlorogenic acid in spikes yacon
leaves (n＝ 5)
实验号 1 2 3
绿原酸含量 /(mg/g) 0.501 0.486 0.495
平均含量 /(mg/g) 0.494
表5 雪莲果叶中绿原酸含量的测定
Table 5 Chlorogenic acid contents in leaves of yacon grown in
Luliang area, Yunnan province determined by the method
由表 1可看出，5次重复进样后，绿原酸的RSD为
0.62%，表明使用该方法测定绿原酸，仪器精密度良好。
2.4.2 稳定性实验
精密吸取雪莲果叶供试品溶液，按上述色谱条件，
分别于 0、2、4、6、8 h 进样一次，考察样品溶液放
置后峰面积的变化情况，结果见表 2。
由表 2可看出， 供试品中绿原酸在8h内峰面积无明
显变化，RSD为 0.88%，说明供试品溶液在 8h内基本
稳定。
2.4.3 重现性实验　
由表 4可看出，测定平均回收率为 97.0%，加标回
收率在 95.0%～99.0%之间，RSD为 1.10%，测定结果
满意，表明本法具有良好的回收率。
2.5 样品含量的测定
以云南陆良产雪莲果叶为原料，按照 1.3.2节进行
样品液的制备，采用上述建立的色谱分析方法，测定
雪莲果叶中的绿原酸含量，结果见表 5。
3 结 论
本实验确定了雪莲果叶中绿原酸的 H PLC 分析条
件，以乙腈 -体积分数 0.5%磷酸溶液(8:92，V/V)为流
动相、流速为 1.0mL/min、检测波长为 325nm、柱温为
25℃。绿原酸标准品在 10～100μg/mL范围内线性关系
良好。本方法用于测定雪莲果叶中绿原酸的方法简便易
行，结果有较好的重现性和稳定性；通过HPLC对雪莲
果叶进行定性和定量分析，雪莲果叶中各组分在确定的
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色谱条件下分离效果良好。根据色谱图比较，结果表明
在雪莲果叶中有绿原酸物质存在，其含量为 0.494mg/g，
为雪莲果叶的开发利用和研究提供了技术参考。
参考文献：
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