全 文 ：第３４卷　第１期　　　　　　　　　　　　　　　陕西科技大学学报　　　　　　　　　　　Ｖｏｌ．３４Ｎｏ．１
　２０１６年２月 　　　　　　　　　　　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｈａａｎｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　　　　　　　Ｆｅｂ．２０１６
＊　文章编号：１０００－５８１１（２０１６）０１－０１３４－０４
新疆核桃分心木总皂苷和总黄酮
的体外抗氧化活性
令狐晨，谢姆西努尔·阿卜来提，阿依吐伦·斯马义＊
（新疆医科大学 药学院，新疆 乌鲁木齐　８３００１１）
摘　要：为了研究新疆核桃分心木中总皂苷和总黄酮的抗氧化活性，以ＶＣ作为阳性对照，检
测了核桃分心木中总皂苷和总黄酮对超氧阴离子（－Ｏ２）、羟基自由基（－ＯＨ）、ＤＰＰＨ等的清
除作用，并对总皂苷和总黄酮的还原能力进行了测定．结果表明：总皂苷和总黄酮均具有较好
的对ＤＰＰＨ自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基等的清除能力和铁还原能力，并在一定的
质量浓度范围内成量效关系．核桃分心木总皂苷和总黄酮均具有较强的抗氧化活性．
关键词：核桃分心木；总皂苷；总黄酮；抗氧化
中图分类号：Ｒ２８５　　　　文献标志码：Ａ
Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ａｎｄ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｆｒｏｍ　ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｄｉａｐｈｒａｇｍａ　Ｊｕｇｌａｎｄｉｓ　Ｆｒｕｃｔｕｓ
ＬＩＮＧＨＵ　Ｃｈｅｎ，Ｘｍｎｕｅｒ·Ａｂｕｌａｉｔｉ，Ａｙｔｕｌｕｎ·Ｓｉｍａｙｉｌ＊
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３００１１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ａｎｄ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｆｒｏｍ
Ｄｉａｐｈｒａｇｍａ　Ｊｕｇｌａｎｄｉｓ　Ｆｒｕｃｔｕｓ，Ｕｓｉｎｇ　ＶＣ　ａｓ　ａ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ，ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ
ｖｉｔｒｏ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ａｎｄ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｆｒｏｍＤｉａｐｈｒａｇｍａ　Ｊｕｇｌａｎｄｉｓ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａ－
ｔｅｄ　ｂｙ　ｓｃａｖｅｎｉｎｇ　ｒａｔｅｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ＤＰＰＨ，ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ａｎｉｏｎ，ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｒａｄｉｃａｌｓ　ａｎｄ　ｆｅｒｒｉｃ　ｒｅｄｕｉｎｇ
ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｏｗｅｒ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｂｏｔｈ　ｔｏｔａｌ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ａｎｄ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｈａｄ
ｓａｖｅｎｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ＤＰＰＨ，ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ａｎｉｏｎ，ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｒａｄｉｃａｌｓ　ａｎｄ　ｆｅｒｒｉｃ　ｒｅｄｕｉｎｇ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ
ｐｏｗｅｒ．Ｏｖｅｒ　ｔｈｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｒａｎｇｅ，ｔｈｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｈａｄ　ａ　ｄｏｓｅ－ｅｆｆｅｃｔ
ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ．Ｔｏｔａｌ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ａｎｄ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｆｒｏｍ　Ｄｉａｐｈｒａｇｍａ　Ｊｕｇｌａｎｄｉｓ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　ｈａｖｅ
ｓｔｒｏｎｇ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｄｉａｐｈｒａｇｍａ　Ｊｕｇｌａｎｄｉｓ　Ｆｒｕｃｔｕｓ；ｔｏｔａｌ　ｓａｐｏｎｉｎｓ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃ－
ｔｉｖｉｔｙ
＊ 收稿日期：２０１５－１１－２３
基金项目：乌鲁木齐市科学技术计划项目（Ｙ１２１３１０００９）
作者简介：令狐晨（１９９２－），女，山西运城人，在读硕士研究生，研究方向：新疆地方药用植物
通讯作者：阿依吐伦·斯马义（１９５９－），女，乌孜别克族，新疆乌鲁木齐人，教授，硕士生导师，研究方向：药物分析和天然药物化学，
ａｙｔｕｌｕｎｓｓ＠１２６．ｃｏｍ
第１期 令狐晨等：新疆核桃分心木总皂苷和总黄酮的体外抗氧化活性
０　引言
新疆核桃分心木 （Ｄｉａｐｈｒａｇｍａ　Ｊｕｇｌａｎｄｉｓ
Ｆｒｕｃｔｕｓ）是胡桃科核桃属植物———核桃的果核内
的木质隔膜，其多弯曲、破碎而不整齐；表面呈淡棕
色至棕褐色，或棕黑色，略有光泽；质脆，易折断，气
微，味微苦．核桃分心木主要用于治疗肾虚、遗精、
滑精、遗尿、尿血、带下、泻痢等症［１－３］．
抗氧化剂主要是通过终止自由基链反应从而
清除自由基，起到保护机体的作用．因此，寻找适当
的外源性抗氧化剂清除体内自由基，对治疗疾病和
保护人体健康很有益处．
植物中存在众多消除活性氧自由基的抗氧化
剂．已有文献报道，植物中的黄酮［４］、皂苷［５］等活性
物质具有一定的抗氧化活性，但有关核桃分心木总
皂苷和总黄酮的体外抗氧化活性研究在国内外却
尚未见相关报道，导致人们对分心木的药用价值没
有充分地认识，严重浪费了该药用资源．
为合理利用该植物资源并确定其主要的抗氧
化活性成分，本实验通过提取核桃分心木总皂苷及
总黄酮成分，研究了其体外抗氧化活性，从而为探
索核桃分心木这种维药的药理作用机制提供了基
础，并为核桃分心木的综合开发提供了理论依据．
１　实验部分
１．１　材料与试剂
齐墩果酸对照品（上海源叶生物科技有限公
司，批号ＹＹ２０１１０４２８）；芦丁标准品（上海源叶生
物科技有限公司，批号 ＹＡ０７０９ＳＡ１４）；核桃分心
木（购于新疆和田地区，由新疆医科大学药学院帕
丽达·阿布利孜教授鉴定为胡桃科植物胡桃果核
的干燥木质隔膜）；高氯酸、冰醋酸、甲醇、浓硫酸、
乙醇、石油醚、正丁醇、ＤＰＰＨ溶液、水杨酸、硫酸亚
铁溶液、双氧水、磷酸盐缓冲溶液（ｐＨ＝８．２）、邻苯
三酚、乙酸乙酯、盐酸、铁氰化钾、三氯乙酸等均为
分析纯试剂，均购于天津富宇精细化工有限公司．
１．２　仪器与设备
ＵＶ２２５０型紫外可见分光光度计（日本岛津）；
ＥＹＥＬＡＮ－１００１型旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限
公司）；ＤＫ－Ｓ２４型电热恒温水浴锅（上海精宏实验
设备有限公司）；ＳＫ３２００Ｈ 型超声清洗仪（上海汉
克科学仪器有限公司）；ＡＢｌ０４－Ｎ型多功能电子天
平（上海梅特勒－托利多仪器有限公司）；ＤＨＧ－
９０５３Ａ型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备
有限公司）；ＦＷ１３５型粉碎机（北京永光明医疗仪
器厂）．
１．３　实验方法
１．３．１　核桃分心木总黄酮的提取
称取核桃分心木５０ｇ，加入４００ｍＬ　５０％的乙
醇溶液，同时放入到超声清洗机中进行超声２０
ｍｉｎ，对溶液进行过滤，弃滤渣，浓缩滤液得浸膏，
浸膏加入２００ｍＬ水溶解，用２００ｍＬ的石油醚萃
取３次，石油醚层弃去，再用乙酸乙酯２００ｍＬ萃
取，萃取３次，将乙酸乙酯萃取液合并浓缩，得总黄
酮样品，加５０％乙醇定容至１００ｍＬ［６］．
采用 ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ 显色体系吸
光光度法测定总黄酮的含量［７］．以芦丁为对照
品，标准曲线为Ａ＝１２．３６９Ｃ－０．０１５　８（ｒ＝０．
９９９　９），其中，吸光度（Ａ）为纵坐标，质量浓度（Ｃ）
为横坐标，检测波长为５０６ｎｍ，测定其提取率及
质量浓度．
１．３．２　核桃分心木总皂苷的提取
称取核桃分心木２５ｇ，加入８０％乙醇６２５
ｍＬ，８０℃水浴回流提取２ｈ，回流２次，过滤，水浴
挥干，加蒸馏水适量超声使其溶解，用等体积的正
丁醇萃取３次，将正丁醇萃取液合并并浓缩，得总
皂苷的样品，加８０％乙醇定容至１００ｍＬ．
采用５％香草醛－冰醋酸－高氯酸显色体系吸光
光度法测定总皂苷的含量［８］．以齐墩果酸为对照
品，标准曲线为 Ａ＝３９．２２１Ｃ－０．０２６　４（ｒ＝
０．９９９　２），其中，吸光度（Ａ）为纵坐标，质量浓度
（Ｃ）为横坐标，检测波长为５６３ｎｍ，测定其提取率
及质量浓度．
１．３．３　ＤＰＰＨ自由基清除能力测定［９］
用制备的总黄酮和总皂苷分别配成浓度合适
的样品溶液１ｍＬ，加入４ｍＬ浓度为０．００４％的
ＤＰＰＨ溶液，摇匀，室温下避光反应３０ｍｉｎ，在５１７
ｎｍ处测其吸光度Ａｉ；取４ｍＬ不同浓度的样品液，
加入１ｍＬ甲醇测定吸光度值为Ａｊ；取４ｍＬ　０．
００４％ ＤＰＰＨ溶液，加入１ｍＬ甲醇测定吸光度值
为Ａ０．重复三次，分别计算样品对ＤＰＰＨ 的清除
率．计算公式为：
清除率（％）＝［１－（Ａｉ－Ａｊ）／Ａ０］＊１００％ ．
１．３．４　羟基自由基清除能力测定［１０］
取１ｍＬ浓度为４．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１的硫酸亚铁，
加入１ｍＬ浓度为４．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１的水杨酸－乙醇
溶液，再加不同浓度的样品液１ｍＬ，最后加１ｍＬ
４．４ｍｍｏｌ·Ｌ－１的 Ｈ２Ｏ２ 反应，于３７℃水浴中反
应３０ｍｉｎ，在５１０ｎｍ处测吸光值．用１ｍＬ蒸馏水
代替１ｍＬ不同浓度的样品液所测得样品的吸光
值为Ａ０；用１ｍＬ样品液代替１ｍＬ蒸馏水所测得
样品的吸光值为Ａｘ；用１ｍＬ蒸馏水代替１ｍＬ双
氧水所测得的吸光值为Ａｘｏ．重复三次，清除率按
·５３１·
陕西科技大学学报 第３４卷
下式计算：
　清除率（％）＝［１－（Ａｘ－Ａｘｏ）／Ａ０］＊１００％．
１．３．５　超氧阴离子自由基清除能力测定［１１］
采用邻苯三酚自氧化法［１２，１３］，取５ｍＬ　０．１５
ｍｏｌ·Ｌ－１的磷酸缓冲液（ｐＨ＝８．２）与１ｍＬ样品
液混合，于２５℃恒温水浴１５ｍｉｎ，加入０．２ｍＬ浓
度为４５ｍｍｏｌ·Ｌ－１的邻苯三酚，摇匀，在第四分钟
时加入１０ｍｏｌ·Ｌ－１盐酸１滴终止反应，于３２５ｎｍ
处测定样品吸光值为Ａ１；用０．２ｍＬ蒸馏水代替
０．２ｍＬ的４５ｍｍｏＬ·Ｌ－１邻苯三酚所测定的吸光
值为Ａ２；用１ｍＬ溶剂代替１ｍＬ样品液所测定的
吸光值为Ａ３．重复三次，清除率按下式计算：
　　清除率（％）＝［１－（Ａ１－Ａ２）／Ａ３］＊１００％．
１．３．６　Ｆｅ３＋还原能力测定
将０．２５ｍＬ不同浓度的样品液、０．２５ｍＬ　ｐＨ
６．６的磷酸缓冲溶液和０．２５ｍＬ１％的铁氰化钾混
合，于５０℃水浴２０ｍｉｎ后加入１０％三氯乙酸溶液
０．２５ｍＬ，５００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，取上清液０．５
ｍＬ加蒸馏水２．５ｍＬ和０．２％三氯化铁溶液０．１
ｍＬ，摇匀，室温下静置１０ｍｉｎ，在７００ｎｍ 处测吸
光值．
１．３．７　统计学方法
采用ＳＰＳＳ　１７．０统计学软件计算ＩＣ５０．
２　结果与讨论
２．１　总皂苷和总黄酮的含量
经计算，核桃分心木总皂苷的提取率为２．７％，
在实验中定容至１００ｍＬ的总皂苷提取液中，总皂
苷的质量浓度为６．７８ｍｇ·ｍＬ－１．
核桃分心木总黄酮的提取率为４．２％，在实验
中定容至１００ｍＬ的总黄酮提取液中，总黄酮的质
量浓度为２１．０２ｍｇ·ｍＬ－１．
２．２　对ＤＰＰＨ自由基的清除能力
如图１所示，核桃分心木总皂苷和总黄酮对
ＤＰＰＨ自由基具有较强的清除能力．总皂苷和总黄
酮在实验浓度范围内，对ＤＰＰＨ 自由基的清除能
力呈现量效关系．当总皂苷的浓度为５ｕｇ·ｍＬ－１
时，其清除率为３２．７４％．随着总皂苷质量浓度的
增大，其清除能力增加；当总黄酮浓度为１６ｕｇ·
ｍＬ－１时，其清除率为２８％．随着总黄酮质量浓度
的增大，其清除能力增加．当总黄酮的质量浓度为
６４ｕｇ·ｍＬ－１时，清除率基本达到最大值７０．３％，
此后再增加总黄酮的质量浓度，清除率基本无明显
变化．
ＶＣ、总皂苷、总黄酮的ＩＣ５０分别为９．４２８ｕｇ
·ｍＬ－１、８．２９６ｕｇ·ｍＬ－１、４４．２９１ｕｇ·ｍＬ－１．从
ＩＣ５０数据可知，总皂苷在清除ＤＰＰＨ自由基的能
力方面基本和ＶＣ相当，而总黄酮的效果不如ＶＣ．
图１　ＶＣ、分心木总皂苷和总黄酮对
ＤＰＰＨ自由基的清除能力
２．３　对羟基自由基的清除能力
核桃分心木对羟基自由基的清除能力结果如
图２所示．由图２可以看出，总皂苷和总黄酮对羟
基自由基都表现出了一定的清除能力，且在实验浓
度范围内呈现量效关系．总皂苷和总黄酮在质量浓
度为０．６ｍｇ·ｍＬ－１时，其清除率分别为３６％、
２３．７％．随着质量浓度的增大，两者清除能力增加．
当质量浓度增加到１．６ｍｇ·ｍＬ－１时，两者的清除
率基本达到最大值．此后，继续增加质量浓度，两者
的清除率均基本无明显变化．
ＶＣ、总皂苷、总黄酮的ＩＣ５０分别为０．０５４ｍｇ
·ｍＬ－１、０．９３４ｍｇ·ｍＬ－１、１．１９３ｍｇ·ｍＬ－１．从
ＩＣ５０数据可知，总皂苷和总黄酮对羟基自由基的
清除能力不如ＶＣ，但总黄酮和总皂苷两组在浓度
梯度之间存在差异性（ｐ＜０．０５），在相同浓度下，
总皂苷对羟基自由基的清除能力比总黄酮强．
图２　ＶＣ、分心木总皂苷和总黄酮对
羟基自由基的清除能力
２．４　对超氧阴离子自由基的清除能力
由图３可知，总皂苷和总黄酮在清除超氧阴离
子自由基方面有着较强的能力，且在实验质量浓度
范围内呈现量效关系．总皂苷质量浓度在１～８ｍｇ
·ｍＬ－１之间时，对该自由基的清除率为３８．６５％
～８５．４％；总黄酮质量浓度在１～８ｍｇ·ｍＬ－１之
·６３１·
第１期 令狐晨等：新疆核桃分心木总皂苷和总黄酮的体外抗氧化活性
间时，对该自由基的清除率为３１．９％～７５．４％．
ＶＣ、总皂苷、总黄酮的ＩＣ５０分别为０．１０３ｍｇ
·ｍＬ－１、２．２０８ｍｇ·ｍＬ－１、３．３４０ｍｇ·ｍＬ－１．从
ＩＣ５０数据可知，总皂苷和总黄酮在对超氧阴离子
自由基的清除能力方面不如ＶＣ，但总黄酮和总皂
苷两组在浓度梯度之间存在差异性（ｐ＜０．０５），在
相同浓度下，总皂苷对超氧阴离子自由基的清除能
力比总黄酮强．
图３　ＶＣ、分心木总皂苷和总黄酮对
超氧阴离子自由基的清除能力
２．５　Ｆｅ３＋还原能力测定
由图４可以看出，在实验浓度范围内，总皂苷
和总黄酮的还原能力与其质量浓度成明显的量效
关系．总皂苷和总黄酮的还原效果都不如 ＶＣ，但
是总黄酮和总皂苷具有一定的抗氧化性．
图４　ＶＣ、分心木总皂苷和总黄酮的
Ｆｅ３＋还原能力测定
３　结论
据报道，抗氧化剂能够预防各种由自由基引起
的与老化相关的疾病．例如，动脉硬化、糖尿病、心
血管病、老年性痴呆、白内障、关节炎等，这些疾病
都被认为与自由基相关［１４，１５］．传统合成的抗氧化
剂具有副作用，不易长期使用．故从植物中寻找天
然的抗氧化剂越来越受到研究者的关注．目前，有
关核桃分心木的抗氧化活性方面鲜有报道，因此，
对核桃分心木药材的认识不充分，造成了药用资源
的浪费．
本实验研究了核桃分心木总皂苷和总黄酮的
体外抗氧化活性．实验结果表明：总皂苷和总黄酮
都具有一定的体外抗氧化活性，均具有较好的ＤＰ－
ＰＨ自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基清除
能力和铁还原能力．但是，其抗氧化性方面都比
ＶＣ弱，可能原因是总黄酮和总皂苷含有一定的杂
质，并不是单一的化合物．
本实验对核桃分心木抗氧化活性进行了初步
研究，为进一步对核桃分心木分离纯化所得单体的
药理活性的研究奠定了基础，亦为开发利用核桃分
心木药用资源提供了一定的理论基础．
今后的研究将对总皂苷和总黄酮进行进一步
分离、纯化、鉴定，以得到单体成分，并探讨抗氧化
的单体成分，这可为更深入的生物活性研究及药材
开发提供理论参考．
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【责任编辑：晏如松】
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