全 文 ：3　讨论
元亨胰泰蜂胶苦瓜胶囊和胰复糖康黄精苦瓜胶囊均为保
健品 , 厂家却擅自在其中添加盐酸苯乙双胍 、格列本脲成分。
消费者在不知情的情况下同时服用其他降糖药物 , 极易产生
低血糖等副作用 ,危害健康。故提醒广大消费者提高警惕 ,相
关部门应加强监督 ,净化市场 , 保障消费者权益。
中药制剂中成分复杂 ,而紫外光谱特征性不够 , 故本实验
采用两个不同色谱条件进行鉴定 ,以提高鉴定的专属性。本
实验可作为快速鉴定保健品中是否含 7 种药物的方法 , 对成
分的鉴定需采用液质联用仪进行确证。
由于这类样品处方成分不固定 , 定量的方法学验证没有
共性 , 加上送检的目的是定性 ,因此笔者未作定量的方法学验
证。
参考文献
〔1〕陈宜良 ,王早斌.关于检测中成药中非法添加化学药品的探讨〔 J〕
.药学与临床研究 , 2008 , 16(5):398-400.
〔2〕吴小红 ,李焕德.中成药与保健品中非法添加化学药物的检测方
法〔J〕.医药导报 , 2009 , 28(3):342-344.
〔3〕吴卫涛.高效液相色谱法同时鉴定保健品中非法添加的 6种降糖
药成分〔J〕.现代中西医结合杂志, 2009 , 18(22):2703-2704.
HPLC法测定水线草中齐墩果酸和熊果酸含量的不确定度评定
黄诺嘉 ,马丽莎(广东省汕头市药品检验所 汕头 515041)
摘要:目的　建立 HPLC法测定水线草中齐墩果酸和熊果酸含量的不确定度评定方法。方法　通过建立其数学模型 ,找出影响不确定度的因
素 ,并对各个不确定度因素进行评估 、计算 ,并给出测量结果的扩展不确定度和置信水平。结果　合成不确定度为 1.06×10-2;扩展不确定度
为 2.12×10-1;齐墩果酸和熊果酸素总含量的测定结果为(4.218±0.21)mg·g -1。结论　本方法可用于 HPLC法测定药物含量的不确定度的
分析 ,使测定结果更加可靠。
关键词:不确定度评定分析;HPLC法;齐墩果酸;熊果酸
中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1006-3765(2011)-11-0072-03
作者简介:黄诺嘉 ,女(1956-)。本科 ,主任药师 ,主要从事药品检验
和质量标准研究工作。联系电话:0754-88392240 , E-mail:huangn-
uojia@gdda.gov.cn
　　测量不确定度是表征合理地赋予被测量之值的分散性与
测量结果相联系的参数 , 反应测量结果的质量和可信程度。
测量不确定度的来源有很多 ,如取样量 、样品处理 、环境条件 、
质量和容量仪器 、测量仪器的不确定度 、测定方法及随机变化
等。本文根据《测量不确定度评定与表示》(JJF1059-1999)〔1〕
中有关规定 ,以齐墩果酸和熊果酸的含量测定为例 , 对高效液
相色谱法的测量不确定度进行分析 ,找出影响其不确定度的
因素并对各分量进行评定 , 最终给出测量结果的扩展不确定
度和置信水平 , 建立了适用于评估 HPLC 法测定含量的不确
定度的方法 ,以提高含量测定的数据分析和测量结果的准确
性和可靠性。
1　实验方法
1.1　仪器与试药　Agilent 1200 系列高效液相色谱仪;齐墩
果酸 、熊果酸对照品(由中国药品生物制品检定所提供 , 批号
分别为 110709-9803 、110742-200415 ,纯度为 100%);水线草:
由广东万年青制药有限公司提供;乙腈为色谱纯;其他试剂均
为分析纯。
1.2　色谱条件〔2〕 　色谱 柱:Kromasil C18(5μm , 4.6 ×
250mm);流动相:甲醇-乙腈-0.1%冰醋酸(83∶5∶12);柱温:
35℃,流速:0.9mL·min-1;检测波长 210nm。 理论板数按熊
果酸峰计算不低于 2000 , 熊果酸和齐墩果酸的分离度大于
1.6。
1.3　方法〔2〕
1.3.1　对照品溶液的制备:取经五氧化二磷干燥 12h的齐墩
果酸对照品 10mg ,精密称定 , 置 10mL 量瓶中 , 加甲醇溶解并
稀释至刻度 , 摇匀。精密吸取该溶液 5mL和精密称取熊果酸
对照品 12mg 置同一 50m L量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,
作为对照品溶液。
1.3.2　供试品溶液的制备:取本品粉末 1g(过 3 号筛), 精密
称定 , 置索氏提取器中 ,加乙醚适量 , 浸泡过夜 , 索氏提取 8h ,
提取液挥干乙醚 , 残渣加甲醇适量使之溶解 , 转移至 5mL 量
瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 , 取续滤液作为供试品溶液。
1.3.3　测定法:分别精密吸取上述溶液各 10μL , 注入液相色
谱仪 , 测定 ,按外标法计算齐墩果酸和熊果酸的总含量。
2　分析与结果
2.1　建立数学模型　根据《中国药典》格式〔3〕 , 含量计算公式
如下:X=f齐×AS齐/(Ws/Vs)+f熊×AS熊/(Ws/ Vs)
式中 , X为齐墩果酸 、熊果酸的总含量(mg·g-1);As齐、
As熊 分别为供试品溶液中齐墩果酸 、熊果酸的色谱峰峰面积;
Ws为供试品取样量(g);Vs 为供试品溶液最后定容体积
(mL);f为 HPLC 法校正因子(mg·mL-1):
f齐= 1n ∑
n
i=1
1
Ai
= 1
n
∑n
i=1
1
Ai
× m
VR1
×VR2
VR3
, 其中 C= m
VR1
×
VR2
VR3
,
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海峡药学　2011年　第 23卷 第 11期
f熊= 1n ∑
n
i=1
C
Ai
= 1
n
∑n
i=1
1
Ai
×m
VR
, 其中 C= m
VR
式中 ,m 为对照品称样量(mg);Ai为对照品溶液中待测成分
的色谱峰峰面积;VR1 、VR2、VR3分别为齐墩果酸对照品初次
定容体积 、稀释时移液管取样体积 、最后定容体积(mL);VR
为熊果酸对照品定容体积(m L)。
2.2　不确定度各分量的量化
2.2.1　HPLC 法校正因子的标准不确定度 U(f)的评定:来
源于对照品溶液浓度和色谱峰的不确定度等。
2.2.1.1　齐墩果酸对照品溶液浓度的不确定度 U(C)来源
于其质量的不确定度和稀释定容体积的不确定度。而质量不
确定度是由称样量和纯度的不确定度组成。
(1)齐墩果酸对照品质量的不确定度
①齐墩果酸对照品称样量分别为 10.05mg 、10.12mg 。
根据检定证书可知天平精度为 0.00001g , 按矩形分布 , 取包
含因子 K= 3 ,其称样的相对不确定度 U 1(m1)=0.00001g/
(0.01005× 3)=5.744 ×10-4 , U1(m2)=5.705 ×10-4 , 故
U1(m)= (0.00057442+0.00057052)/2=5.725×10-4
②齐墩果酸对照品纯度为 100%, 由于没有不确定度的
其他说明 , 故假设为均匀分布 , 其区间的半宽度 a=0.0001 ,
计算得 U 2(m)=0.0001/ 3=5.774×10-5
综合①②,故齐墩果酸对照品质量相对不确定度 U(m)
= (0.00057252+0.000057742)/ 2=5.754×10-4
(2)稀释定容体积的不确定度
根据常用玻璃量器计量检定规程〔4〕可知:A 级 10m L、
50m L量瓶的允许误差分别为±0.020m L、±0.05mL , A 级
5mL 移液管为±0.015mL , 由于配制 2 份溶液 ,按三角分布计
算稀释定容体积的相对不确定度 ,故
U(VR)= [ 2/ 2×0.020/(10× 6] 2+[ 2/2×0.05/(50× 6] 2+[ 2/2×0.015/(5× 6] 2
=1.528×10-3
故齐墩果酸对照品溶液浓度的不确定度
U(C)= U 2(m)+U 2(VR)=1.633×10-3
2.2.1.2　齐墩果酸对照品色谱峰峰面积的不确定度 U(AR)
2 份 齐墩 果酸 对照品 色谱 峰分 别为 545.98737 、
539.98376 、552.92328、540.65173 , 采用极差法计算 , 取 n=2
时的极差系数 C =1.13;S1=(545.98737+539.98376)/ 2=
542.98556 , R1 =6.00361;S2=546.78750 , R2=12.27155;U
(AR1)=R1/(C×S1)=9.785×10-3;U(AR2)=1.986×10-2
由上可得 ,齐墩果酸对照品色谱峰峰面积的不确定度 U
(AR)= [ U 2(AR1)+U 2(AR2)] /2=1.566×10-2
综上 , U齐(f)= U 2(C)+U 2(AR)=1.583×10-2;f齐=
1.8508×10-4(mg·mL-1)
2.2.1.3　熊果酸对照品溶液浓度的不确定度 U(C)
(1)熊果酸对照品质量的不确定度
①熊果酸对照品称样量分别为 12.00mg、11.94mg。同
理 U 1(m1)=4.811×10-4 , U1(m2)=4.835×10-4 ,故 U1(m)
=4.823×10-4。
②熊果酸对照品纯度为 100%, 同理 U2(m)=5.774×
10-5
综合①②, 故熊果酸对照品质量的相对不确定度 U(m)
=4.858×10-4
(2)定容体积的不确定度:
因 A 级 50mL量瓶的允许误差为±0.05m L ,故 U(VR)=
[ 2/2×0.05/(50× 6)] 2=4.082×10-4
由上可得 , 熊果酸对照品溶液浓度的不确定度 U(C)=
6.345×10-4
2.2.1.4　熊果酸对照品色谱峰峰面积的不确定度 U(AR)
2 份熊果酸对照品色谱峰峰面积分别为 1175.57898、
1174.85291 、1187.22754 、1156.90491 , 故 S1=1175.21594 , R1
=0.72607;S2=1172.06622 , R2=30.32263;U(AR1)=5.467
×10-4;U(AR2)=2.289×10-2
由上可得 , 熊果酸对照品色谱峰峰面积的不确定度 U
(AR)=1.619×10-2;
综上 , U熊(f)=1.620×10-2;f熊=2.0398 ×10-4(mg·
mL -1)。
2.2.2　供试品溶液含量测定的不确定度评定:来源于供试品
溶液浓度和色谱峰测定的不确定度等。
2.2.2.1　供试品溶液浓度的不确定度 U(CS)来源于其称样
量和稀释定容引起的不确定度。
(1)供试品的称样量分别为 1.0119g、1.0025g。 同理
(m1)=5.706 ×10-6 , U(m2)=5.759 ×10-6 , 故 U(m)=
8.107×10-6
(2)定容体积的不确定度:
因 A 级 5mL 量瓶的允许误差为±0.020m L ,故 U(VR)=
1.633×10-3;供试品溶液浓度的相对不确定度 U(CS)=
1.633×10-3
2.2.2.2　供试品溶液色谱峰峰面积的不确定度 U(As):
(1)供试品溶液中齐墩果酸成分峰面积的不确定度:2 份
供试品溶液 2次测量的齐墩果酸峰面积分别为 1255.49243、
1256.20081 、1216.70862 、 1209.38452。 AS1 = 1255.84662 ,
AS2=1213.04657 ,供试品溶液中齐墩果酸成分峰面积测定
的标准不确定度按贝赛尔公式计算得:
S1= ∑(A S-A)2/ n(n-1)=0.35412 , S2=3.66205 , U
(As1)=S1/As1=2.820×10-4 , U(As2)=3.019×10-3
U齐(As)= [ U 2(AS1)+U 2(A S2)] 2
= (0.00028202+0.0030192)/2=2.144×10-3
(2)供试品溶液中熊果酸成分峰面积的不确定度:测定中
同时获得的熊果酸峰面积分别为 2467.62891 、2521.78271、
2514.68042 、 2524.97974。 AS1 = 2494.70581 , AS2 =
2519.83008 , S1=27.07690 , S2=5.14966 , U(A s1)=1.085×
10-2 , U(A s2)=2.044×10-3
U熊(As)=1.104×10-2
2.3　供试品溶液中齐墩果酸和熊果酸的总含量　根据公式
X=f齐×AS齐/(Ws/ Vs)+f熊×As熊/(Ws/ Vs), 计算出供试品
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Strait Pharmaceutical Journal Vol 23 No.11 2011
溶液中齐墩果酸和熊果酸的总含量为 3.673mg·g-1 ,并按标
准规定以干燥品计算含齐墩果酸和熊果酸的总含量为
4.218mg·g -1
2.4　合成相对不确定度　合成相对不确定度
= U2剂(f)+U2熊(f)+U2(CS)+U2齐(AS)+U2熊(AS)
=
0.015832+0.016202+0.0016332+0.0021442+0.011042
=2.534×10-2 , U(X)=4.218×2.534×10-2≈0.107
2.5　扩展不确定度　测定结果符合正态分布 , 在置信概率为
95%时 ,选择包含因子 K=2 , 则扩展不确定度
Ur(X)=0.107×2≈0.21
2.6　测量不确定度报告　含量测定的结果可表示为(4.218
±0.21)mg·g -1。
3　讨论
3.1　本文通过实验表明 , 采用 HPLC 按外标法测定含量时 ,
若增加测定次数 、选用较大的定容体积 、增加对照品取用量等
均可减少各分析步骤的不确定度 , 从而提高药品检验结果的
准确性和可信度。
3.2　本文含量测定方法采用双标双样平行法测定的 , 配制供
试品溶液和对照品溶液所处的环境温湿度的系统影响可因供
试品和对照品同时操作而忽略。 虽然本文实验中使用的天
平 、液相色谱仪的量瓶的精度较高 ,且不确定度均参考检定证
书和实验数据 , 但因样品中的齐墩果酸和熊果酸总含量较小
(标准规定其总量不得少于 0.08%),故评估出的含量测定扩
展不确定度为 0.21 , 表明供试品测定结果的分散程度的水
平。在实验中 , 按 3.1 操作 ,则测定结果更为准确 、可靠。
参考文献
〔1〕国家质量技术监督局.《测量不确定度评定与表示》 J JF1059-1999
〔S〕.北京:中国计量出版社, 1999 , 1.
〔2〕广东省食品药品监督管理局编.广东省中药材标准(第一册)〔M〕
.广州:广东科技出版社 , 2004 , 60.
〔3〕国家药典委员会编.中国药典〔S〕.一部.北京:化工出版社 ,
2005 ,附录 33.
〔4〕国家质量技术监督局.JJG196-2006常用玻璃量器检定规程〔S〕.
北京:中国计量出版社.2006 , 4-11.
高效液相色谱法测定盐酸吗啉胍滴眼液的含量
吕高明(安徽阜阳市食品药品检验所 阜阳 236015)
摘要:目的　建立 HPLC测定盐酸吗啉胍滴眼液含量的方法。方法　采用 Kromasil C18色谱柱 ,庚烷磺酸钠溶液-甲醇-乙腈(90∶15∶17),检测
波长 237nm。结果　盐酸吗啉胍在 4.24μg·mL -1 ～ 29.65μg·mL-1的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系 , r =0.9999 , 平均回收率
100.8%, RSD为 0.3%(n=9)。结论　本方法准确 、重现性好 ,可作为该制剂的含量测定方法。
关键词:盐酸吗啉胍滴眼液;HPLC;含量测定
中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1006-3765(2011)-11-0074-02
作者简介:吕高明 ,男(1978.11-)。毕业于合肥工业大学制药工程
专业。职称:主管药师。联系电话:18905585665
　　盐酸吗啉胍滴眼液主要成分为盐酸吗啉胍 , 化学名称为
N , N-(2-乙胍基亚氨基)-吗啉盐酸盐 ,临床主要用于病毒性结
膜炎 ,质量标准现收载于国家药品标准化学药品地方标准上
升国家标准第七册〔1〕 , 该标准中采用 UV 吸收系数法测定盐
酸吗啉胍含量 ,规定盐酸吗啉胍(C6H13N 5O·HCl)应为标示量
的 90.0%～ 110.0%, 鉴于 UV 法测定含量专属性不强 , 为提
高该品种含量控制水平 , 作者参考相关文献〔2〕建立了 HPLC
法测定盐酸吗啉胍滴眼液含量的方法。
1　仪器 、试药和样品
UV500/Model 500 高效液相色谱仪及配套紫外检测器 ,
浙大 N2000 色谱工作站 , UV-VIS-8500 紫外-可见分光光度
计 , AB265-S 电子天平(0.01mg), 盐酸吗啉胍对照品购自中
国药品生物制品检定所 , 供 UV 含量测定用 , 批号 100483-
200402 , 流动相用甲醇 、乙腈为色谱纯 , 其余试剂为分析纯 ,盐
酸吗啉胍滴眼液为芜湖三益制药有限公司生产 , 规格为
8mL:0.32g ,批号:090501 、090803 、091001。
2　方法结果
2.1　色谱条件　Kromasil C18色谱柱 , 流动相为庚烷磺酸钠
溶液(庚烷磺酸钠 2.02g , 加水至 1000mL , 加三乙胺 0.5mL ,
用冰醋酸调 pH 值至 4.0)-甲醇-乙腈(90∶15∶17),流速 1.0m L
·min-1 ,柱温 30℃, 检测波长 237nm , 盐酸吗啉胍的理论板数
n=7131。
2.2　线性关系考察　精密称取盐酸吗啉胍对照品10.59mg ,
置 100mL 量瓶中 ,加流动相溶解并稀释至刻度 , 作为贮备液
(105.9μg·m L-1)。 精密吸取贮备液 1m L、2m L、3mL、5mL、
7mL , 分别置 25m L 量瓶中 , 配制 4.24 、8.47 、12.71 、21.18、
29.65μg·mL-1系列浓度溶液。 精密量取系列浓度溶液各
20μL 注入液相色谱仪 ,测得盐酸吗啉胍的平均峰面积依次为
2400517.9、4848786.5、7197135 、11802344.5、16317781。 以
盐酸吗啉胍色谱峰面积(Y)为纵坐标 ,对照品浓度(X)为横坐
标 , 绘制标准曲线(见图 1), 得线性回归方程:Y=546366.8X
+181218.8(r=0.9999),表明盐酸吗啉胍在 4.24μg·mL-1 ～
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海峡药学　2011年　第 23卷 第 11期