全 文 ：三七叶提取物对大鼠脑缺血模型的影响
孙晓波　徐惠波　纪凤兰　温富春　丁涛　张伟　张殿文
(吉林省中医中药研究院　长春　130021)
　　提　要　目的:观察三七叶提取物对大鼠大脑中动脉缺血模型的影响。方法:通过栓线法造成大脑中动脉缺血 , 观察三七叶
提取物对缺血大鼠的行为状态 、脑缺血面积 、脑组织形态学的作用。结果:三七叶提取物 42.0 、21.0 、10.5mg/ kg能明显改善大鼠脑
缺血后的行为状态 ,缩小缺血范围 , 降低缺血程度 ,使病变的脑组织得到明显的改善。
　　关键词　三七叶提取物;总皂苷;总黄酮;脑缺血
　　三七其有效成分三七总皂苷的化学 、药理研究报道很多 ,
三七叶提取物主要含有总皂苷及总黄酮 , 本文用阻断大鼠脑中
动脉所致局灶性脑缺血动物模型观察了三七叶提取物对脑缺
血的作用。
1　材料
1.1　试验药物　三七叶提取物 , 深棕色粉末 , 其中总皂苷含量
74.9%, 总黄酮 3.92%, 由本院新药中心剂型室提供 , 批号
010616 , 成品规格 0.32g/粒。血塞通胶囊 , 云南白药集团文山
七花有限公司生产 ,批号 20020701。
1.2　动物　Wistar大鼠体重 240-290 g , 雄性 , 购自长春高新医
学动物实验研究中心 ,合格证号:10-5112。
1.3　仪器　CIMA-400 医学图像分析仪 ,由四川大学生产 。
1.4　方法　取直径 0.23mm 尼龙鱼线 , 长约 30mm , 一端加热
成球形 ,距球面 22mm 处作标记 , 以酒精清洗后置无菌生理盐
水中备用。大鼠 54 只 , 随机分为 6 组 , 给药或同体积的蒸馏水
每天 1 次 ,连续 5 天 , 给药第四天 ,以 10%水合氯醛于大鼠腹腔
注射 3ml/ kg 麻醉。麻醉后大鼠仰卧手术台上 ,颈正中切口 , 分
离右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、颈内动脉(ICA), 结扎
ECA 及其分支 , 于 CCA分叉处剪一小口 , 由此处轻轻插入准备
好的鱼线 ,平均深度为 22.0±2.0mm。鱼线从 CCA 插入经 ICA
分叉轻轻进入颅内至大脑前动脉(ACA), 其深度恰好阻断大脑
中动脉血流 ,固定鱼线 , 缝合颈部皮肤。 假手术组除不插入鱼
线外其余操作步骤同上。动物清醒后 , 于手术当天末次给药 ,
并观察动物行为状态 ,根据 Zea Longa方法进行评分:0 分 ,无神
经损伤症状;1 分 ,不能完全伸展对侧前爪;2 分 , 向外侧转圈;3
分 ,向对侧倾倒;4分 , 不能自发行走 ,意识丧失[ 1] 。
　　上述造模动物末次给药后 1 小时 , 即脑缺血 24 小时后处
死 ,立即取脑 ,采用红四氮唑(TTC)染色方法 , 从额极开始间隔
3mm 冠状切片 , 立即置于 1%TTC(200mmol/ K2HPO4)中 , 37℃
避光孵育 20min , 缺血部分不着色 , 不缺血部分染成红色 , 对
TTC染色的脑组织大体切片摄像后 , 用 CIMA-400 医学图像分
析系统测量缺血部分面积占整个脑组织切片的面积 , 计算缺血
部分的百分比。
　　另取大鼠 60 只 , 同法分组 、给药 、造模 ,末次药后 1 小时 , 即
脑缺血 24 小时后 , 处死 ,立即取脑 , 将标本用 10%中性甲醛固
定16 小时 ,脱水 、常规石蜡包埋 、切片 、HE 染色 , 光镜检查 , 观
察组织形态学变化。
2　结果
2.1　对阻断大脑中动脉所致局灶性脑缺血大鼠行为状态和缺
血面积的影响
　　表 1　三七叶提取物对阻断大脑中动脉所致的局灶性脑缺血大鼠
行为状态和缺血面积的影响( x ±s)
组别 剂量(mg/ kg)
鼠数
(只)
行为评分
(分)
脑缺血部分的
百分比(%)
范围
(%)
空白对照　　 9 0.00±0.00＊＊ 0.00±0.00＊＊ 0
模型对照　　 9 1.78±0.83 37.7±8.8 20.9～ 45.5
血塞通　　　 42.0 9 0.78±0.83＊＊ 3.2±1.7＊＊ 0 ～ 8.5
三七叶提取物 42.0 9 0.67±0.71＊＊ 4.8±2.8＊＊ 0 ～ 17.4
三七叶提取物 21.0 9 1.00±0.71＊ 6.3±3.4＊＊ 0 ～ 20.9
三七叶提取物 10.5 9 1.22±0.67 7.2±3.3＊＊ 0 ～ 20.7
　　与模型组比较 ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01(下同)
　　大鼠造模后 24 小时内出现不同程度的神经损伤症状 ,将大
鼠尾提起 ,瘫痪侧前肢回收屈曲腹下(正常侧前肢向地面伸展),
或行走时向一侧转圈等。由表 1 结果可见 , 给药组症状均好于
模型组。动物脑缺血后 ,脑缺血面积模型组与对照组比有非常
显著的差异。
2.2　对阻断大脑中动脉所致局灶性脑缺血大鼠组织形态学的
影响　病理结果表明 , 空白对照组动物脑组织结构正常 , 未见
异常改变。缺血模型组镜下可见缺血坏死区 , 坏死部分脑组织
结构疏松 ,神经元只留有轮廓 , 或胞体为三角形 , 胞质嗜伊红明
显增强 ,胞核固缩 、溶解或消失。血塞通胶囊组多数动物脑组织
看不到明显脑缺血区 , 皮质神经元与胶质细胞分布无异常 , 少
数散在的神经元呈变性坏死改变。 三七叶提取物高剂量脑组
织看不到明显脑缺血区 , 脑皮质神经元与胶质细胞分布无异
常 ,绝大多数神经元胞体呈椭圆形 ,胞核圆形 , 核仁清晰 ,胞浆无
明显嗜伊红改变 , 但有少数散在神经元变性坏死;三七叶提取
物中剂量大部分脑组织脑缺血区很小 , 有少数散在的神经元呈
变性坏死改变了低剂量可见脑缺血坏死区 , 坏死区神经元呈变
性坏死改变。
3　讨论
　　大脑中动脉为血栓常发部位 ,缺血性脑血管病多发生在大
脑中动脉 ,因此 , 逆转或改善脑缺血后的诸多变化是药物治疗
的主要目标。 模拟人局灶性脑缺血动物模型最好通过阻断
MCA而复制[ 2 , 3] 。 本模型保留有大脑中动脉 , 可进行血管观
察 ,较接近于临床 , 该模型的另一特点是可以利用 T TC 染色技
术直观地观察脑梗塞程度。由于大鼠脑血管的解剖与人类相
似 ,所以我们采用阻断大鼠一侧大脑中动脉来评价三七叶提取
物的作用。结果表明 ,大脑中动脉阻断可造成大鼠脑运动区 、感
觉区皮层和基底神经节等部位的缺血 、功能丧失 , 出现相应的
神经病学症状和病理组织学改变。本研究结果显示 , 三七叶提
取物可明显减轻局灶性脑缺血模型大鼠神经病学症状 , 缩小缺
血面积 ,抑制神经细胞的病理学改变 , 表明三七叶提取物对局
灶性脑缺血性脑损伤具有明显的保护作用 , 这为其临床上用于
17中药药理与临床 2004;20(2)
DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.2004.02.011
脑血栓的治疗提供了药理基础。
参考文献
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科大学学报 , 1998;27(4)∶343
2　卞慧敏 ,等.通脉益智胶囊对大脑中动脉阻断模型的保护作用.中药
药理与临床 , 2001;17(5)∶36
3　贾士奇 ,等.脑血宁口服液对大鼠局造性脑缺血的保护作用.中国药
学杂志, 1999;34(12)∶808
Effect of Panax pseudo-ginseng leaves extract(PPGLE)on the cerebral ischemia injury model of rat
Sun Xiaobo , Xu Huibo , Ji Fenglan , Wen Fuchun , Ding Tao , Zhang Wei , Zhang Dianwen
(Academy T raditional Chinese Medicines and Materia Medica of Jilin Province , 　Changchun　130021)
　　Objective:To study the protective effect of PPGLE on the cerebral ischemia injury.Method:Employ focal cerebral ischemia model via
the thread-occluding me thod to explore the protective effects of PPGLE on the sco re of neurological deficits , the rate of cerebral infarction
and histomorpholog y of cerebral ischemia rats.Results:PPGLE was perfusied to the stomach of rats by 42.0 , 21.0 and 10.5mg/ kg re-
spectively , w hich could distinctly improve the score o f neurological deficits of cerebral ischemia rats and reduce the rates of cerebral infarction
rats and the level of cerebral ischmia injury.I t is also able to improve the cerebral tex tus of patho logical change.
Key words　Panax Pseudo-ginseng leaves ex tract;total saponin;total flavone;focal cerebral ischemia
赤芍对实验性血管成形术后胶原纤维分布种类及含量的影响
朱慧民　祝彼得1
(浙江省台州市中心医院　台州市　318000 , 1 成都中医药大学　成都　610075)
　　提　要　目的:研究赤芍对血管成形术后管壁胶原的影响 。方法:家兔饲喂高脂饲料 , 6周末球囊损伤颈总动脉内膜建立再狭
窄(RS)模型 , 于 8 周末血管取材 ,行天狼猩红染色及血管特殊染色。结果:血管成形术后血管壁Ⅰ 型胶原纤维增生明显 , 赤芍组Ⅰ
型胶原增生显著减少。结论:赤芍对防止管壁胶原沉积具有一定作用。
　　关键词　赤芍;Ⅰ型胶原;血管成形术
　　球囊损伤术后再狭窄形成的关键是血管中层平滑肌细胞
增殖并向内膜下移行致新生内膜形成 , 同时大量的细胞外基质
(包括胶原 、纤维连接蛋白 、层粘蛋白及弹力蛋白等)沉积于动
脉壁加剧了再狭窄形成[ 1] 。因此防止 RS 的关键是抑制平滑肌
细胞增殖及胶原增生。本研究的前期工作已证实在体条件下
赤芍能抑制 VSMC 增殖 ,并抑制 RAS 系统激活 , 但是否能抑制
胶原的产生未见报道。
1　材料与方法
1.1　实验分组　选用 3 月龄新西兰大白兔 ,平均体重 2.5Kg ,
随机分为 4 组:(1)普通饲料组 8 只 ,喂给普通饲料;(2)单纯高
脂饲料组 10 只 ,喂给高脂饲料(普通饲料+2%胆固醇+5%猪
油);(3)赤芍组 30只 , 按赤芍提取物剂量分为高剂量组(相当于
生药 3g/ kg)10只 , 中剂量组(相当于生药 2g/kg)10 只 , 低剂量
组(相当于生药 1g/ kg)10 只。药物加入高脂饲料中一道给予 ,
饲养 6周 , 饮水不限。各组于 6 周末 , 麻醉 ,行颈动脉内皮剥脱
术。术后继续喂养 2 周。
1.2　检测指标
1.2.1　血脂测定　于实验第 8 周末取兔耳静脉血 , 分别测定血
清 Tch、TG、LDL 、HDL、Apo-B 水平。
1.2.2　使用 Motic image advance 3.0 图像分析系统分析病理学
改变　于第 8 周末取颈总动脉损伤段行石蜡切片 , 天狼猩红染
色 ,偏光显微镜下观察胶原类型及分布 , 胶原纤维为红色 , 细胞
核为绿色 ,其它为黄色。可以观察到四种类型的胶原纤维:Ⅰ型
胶原纤维:紧密排列 , 显示很强的双折光性 , 呈黄色或红色的纤
维。 Ⅱ型胶原纤维:显示弱的双折光 , 呈多种色彩的疏松网状分
布。 Ⅲ型胶原纤维:显示弱的双折光 , 呈绿色的细纤维。 Ⅳ型胶
原纤维:显示弱的双折光的基膜 , 呈淡黄色。用图像分析系统测
定Ⅰ型胶原占总胶原的比例。
　　另作血管特殊染色并进行形态学几何参数测量 , 测定颈动
脉腔横截面积(LA)、内弹力层围绕面积(IELA)、外弹力层围绕
面积(EELA)。每个目标血管各取 2张切片 ,每张切片选 5 个血
管环测定各层面积 ,最后计算 10 个血管环所得的数据均值作为
该标本的最终数值。
2　结果
2.1　赤芍对血脂水平的影响　与对照组比较 , 赤芍各剂量组
TCH 、TG 、LDL 均有明显降低(P<0.01),HLD 升高。
18 中药药理与临床 2004;20(2)
基金项目:四川省中医管理局重点研究计划项目　No:200255