全 文 ：China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 39 中国药房 2011年第22卷第39期
大孔吸附树脂富集纯化三七花总皂苷工艺研究
缪 红 1＊，张海欢 2，王小萍 1（1.上海市黄浦区中西医结合医院，上海市 200010；2.上海市金山食品药品检验所，
上海市 201505）
中图分类号 R284.2；R283 文献标识码 A 文章编号 1001-0408（2011）39-3680-04
摘 要 目的：研究D101大孔吸附树脂富集纯化三七花总皂苷的工艺条件及参数。方法：采用单因素试验，优选大孔吸附树脂型
号、上样浓度、吸附平衡时间和洗脱溶剂；采用正交试验优选上样量、流速和洗脱溶剂量。以三七花总皂苷的转移率和纯度的平均
值为指标，优选树脂富集三七花总皂苷的最佳工艺。结果：优选的工艺为选择D101型大孔吸附树脂50 mL（相当于4.515 g干树
脂），树脂径高比为 1 ∶ 20，上样浓度为总皂苷含量 25.01 mg·mL-1（即 0.6 g（生药）/mL），上样药液 15 mL，静置 2 h，用 0.1 mol·L-1
NaOH溶液 200 mL（4倍柱体积）淋洗后用水洗至中性（pH＝7），再用 70％乙醇以每小时 3倍柱体积的流速洗脱，收集洗脱液 200
mL（1.5倍柱体积）。结论：所选方法可较好地富集三七花总皂苷。
关键词 三七花；总皂苷；大孔吸附树脂；富集纯化
Study on Enrichment and Purification Technology of Total Saponins from Flower Buds of Panax notogin-
seng with Macroporous Adsorptive Resin
MIAO Hong，WANG Xiao-ping（Shanghai Huangpu District Hospital of Integrated Chinese and Western Medi-
cine，Shanghai 200010，China）
ZHANG Hai-huan（Shanghai Municipal Jinshan Institute for Food and Drug Control，Shanghai 201505，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the technique condition and parameter of the enrichment and purification of total saponins
from flower buds of Panax notoginseng with D101 macroporous adsorptive resin. METHODS：Type of macroporous adsorptive res-
in，the concentration of sample，the time of the adsorption equilibrium and elution solvent were optimized by single factor test. The
sample amount，flow rate and amount of elution solvent were optimized by orthogonal test. The optimal condition for the enrich-
ment and purification of total saponins from flower buds of P. notoginseng was optimized using the mean value of transfer rate and
purity of total saponins from flower buds of P. notoginseng as index.RESULTS：The optimal condition was as follows：D101 macro-
porous adsorptive resin was 50 mL（equal to 4.515 g dry resin），ratio of diameter to length was 1 ∶ 20，the concentration of sample
solution was 25.01 mg·mL-1（0.6 g crude drug per mL），the sample volume was 15 mL，washed with 0.1 mol·L-1 NaOH solution
200 mL（4 BV）after standing 2 h，and washed with water to neutral（pH value changed into 7），then 70％ ethanol，3 BV·h-1
flow rate，collecting eluant 200 mL（1.5-folds column volume）. CONCLUSION：The method is good for the enrichment of total sa-
ponins from flower buds of P. notoginseng.
KEY WORDS Flower buds of Panax notoginseng；Total Saponin；Macroporous adsorptive resin；Enrichment and purification
三七花又名田七花、参三七花，为五加科多年生草本植物
生长2年以上的三七尚未开放花序的干燥品，盛产于我国西部
的云南、广西、西藏等地。三七花中含有皂苷、多糖、黄酮、氨
基酸、挥发油[1]等多种化学成分，其抗高血压的有效成分为总
皂苷[2]，是三七全株中人参皂苷含量最高的部位，可达 13％以
上[3]。目前，关于三七的研究大都集中在其药用部位块根，块
根也是现阶段三七产业的基本原料药物。三七花作为民间治
疗高血压、咽痛音哑、津伤口渴等症的药材，由于使用区域受
限，使其药材资源的经济价值未被充分利用，因此研究也较
少。本研究旨在通过对树脂富集纯化三七花总皂苷工艺条件
与参数的考察，确立从三七花中富集纯化三七花总皂苷的可
行方法，为三七花制剂的产业化研究奠定基础。
1 仪器与试药
UV 8453型紫外-可见分光光度计（美国Agilent公司）；FA
2104 N型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）。
人参皂苷Rg1、槲皮素、葡萄糖对照品（中国药品生物制品
检定所，批号分别为 0703-9813、0081-9304、0833-9501）；D101
型大孔吸附树脂（上海洋禾科贸发展有限公司，批号：
040310）；NKA9、AB-8大孔吸附树脂（南开大学化工厂，批号
分别为 031211、030606）；三七花药材（产地：云南文山，批号：
20030411，经上海中医药大学药学院沈岚副教授鉴定为真
品）；无水乙醇、氯仿、石油醚（30～60℃）、甲醇、冰醋酸、香草
醛、高氯酸等试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 三七花总皂苷[4，5]含量测定
2.1.1 供试品溶液的制备 取三七花总皂苷大孔吸附树脂富
集物约 15 mg，精密称定，加甲醇溶解并定量转移至 10 mL量
瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品适
量，用甲醇配制成浓度为 0.994 mg·mL-1的人参皂苷Rg1对照
品溶液；精密称取葡萄糖对照品适量，用水配制成 1.003 mg·
mL-1的葡萄糖对照品溶液；精密称取槲皮素适量，用甲醇配制
＊主管中药师。研究方向：医院药学。电话：021-63774871。E-
mail：hzxyjkmh@126.com
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成0.998 mg·mL-1的槲皮素对照品溶液。
2.1.3 最大吸收波长的确定 分别精密吸取人参皂苷Rg1、槲
皮素、葡萄糖对照品溶液及供试品溶液适量，置具塞磨口试管
中，挥干溶剂后，加5％香草醛-冰醋酸溶液（新配制）0.2 mL，高
氯酸 0.8 mL，于 60℃恒温水浴 15 min，立即取出，置冰水浴内
冷却，加冰醋酸 5 mL，摇匀，以相应试剂为空白，于 560 nm波
长处测定吸光度。结果，人参皂苷Rg1对照品溶液和供试品溶
液均在560 nm波长处有一明显吸收峰，且槲皮素对照品溶液、
葡萄糖对照品溶液在此波长下无干扰。因此，选择 560 nm为
三七花总皂苷的吸收波长。
2.1.4 标准曲线的制备 精密吸取人参皂苷Rg1对照品溶液
20、40、60、80、100 μL，置于具塞磨口试管中，按“2.1.3”项下方
法操作。以吸光度（A）为横坐标，检测浓度（c）为纵坐标，制备
标准曲线，得回归方程为 c＝29.444 7A－2.426 8（r＝0.999 9）。
结果表明，人参皂苷线Rg1的检测浓度在 3.31～16.56 μg·mL-1
范围内与吸光度呈良好线性关系。
2.1.5 样品含量测定 精密吸取供试品溶液至磨口具塞试管
中，热水浴挥干溶剂，按“2.1.3”项下方法操作，于 560 nm波长
处测定吸光度，计算总皂苷含量。
2.1.6 精密度试验 精密吸取同一浓度的人参皂苷Rg1对照
品溶液适量，于 560 nm波长处连续测定 5次。结果，RSD＝
1.31％（n＝5），表明仪器精密度良好。
2.1.7 加样回收率试验 取纯度为 66.5％的三七花总皂苷富
集物样品9份，按80％、100％、120％的比例加入一定量的人参
皂苷Rg1对照品各3份，按供试品溶液制备方法制备供试品溶
液，于 560 nm波长处测定吸光度，计算加样回收率。结果，平
均回收率为101.1％，RSD＝1.49％（n＝9）。
2.2 大孔吸附树脂富集纯化工艺研究
2.2.1 树脂的预处理 取大孔吸附树脂，用 95％乙醇浸泡 24
h，装柱，用 95％乙醇洗至流出液经全波长扫描，吸光度为零。
使用前用蒸馏水洗至流出液无醇味，湿法装柱（径高比 1 ∶ 20，
50 mL树脂）。
2.2.2 上柱供试液的制备 取三七花 100 g，分别用 6、8倍量
的 70％乙醇回流提取 2次，分别提取 2.0、2.5 h，提取液浓缩至
0.6 g（生药）·mL-1，水沉除去叶绿素，将药液离心（2 000 r·
min-1，15℃）10 min后定容至一定浓度，作为上柱供试液。
2.2.3 大孔吸附树脂型号的选择 分别取不同型号的大孔吸
附树脂 1.0 g（干树脂），加无水乙醇充分溶胀，用蒸馏水洗净，
置三角瓶中，加三七花提取液（0.902 2 g（生药）·mL-1）20 mL，
20℃恒温振摇 24 h，比较三七花提取物加入树脂前后的总皂
苷的含量变化，计算不同型号树脂的比吸附量（N）：N＝（M上－
M 残－M 水洗）/M（M为总皂苷量）。吸附后的树脂用水洗至
Molish反应阴性，再分别用 70％、85％乙醇洗脱，按“2.1.5”项
下方法操作，按下式计算不同树脂的比洗脱量（E）及洗脱率
（P）：E＝M 洗/M、P＝E/N。不同型号大孔吸附树脂对三七花总
皂苷的吸附及解吸情况见表1。
由表1可知，D101型大孔吸附树脂的各指标均较优，故选
择D101型大孔吸附树脂。
2.2.4 上样浓度考察 取4个不同浓度的药液各15 mL上柱，
用水洗至Molish反应阴性，再用 70％乙醇洗脱，测定吸光度，
计算转移率及纯度（转移率＝洗脱液中三七花总皂苷含量/上
柱前溶液中三七花总皂苷含量（％）；纯度＝洗脱液中三七花
总皂苷的量/洗脱液固体量（％）），结果见表2。
表2 上样浓度考察结果（x±s，n＝3）
Tab 2 Concentrations of samples（x±s，n＝3）
上样浓度/
（g生药/mL）
0.3
0.6
0.9
1.2
总皂苷含量/
mg·mL-1
12.19±2.35
25.01±3.10
50.81±5.21
76.22±2.01
转移率
/％
75.01±3.32
74.16±6.60
67.77±1.56
64.95±0.84
纯度
/％
64.11±2.98
66.32±6.87
65.25±9.21
60.04±0.56
由表 2可知，上样浓度以三七花总皂苷含量 25.01 mg·
mL-1较合适（即0.6 g（生药）/mL）。
2.2.5 吸附等温曲线考察 取药液 3份，每份 6 mL，分别上
柱，于0、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 h时收集过柱洗脱液及水洗脱液，
合并，按“2.1.5”项下方法操作，测定三七花总皂苷吸附量，以
确定树脂吸附平衡时间，结果见表3。
表3 树脂吸附平衡时间考察结果（x±s）
Tab 3 Results of Time of resin adsorption equilibrium（x±s）
吸附时间/h
0
0.5
1.0
2.0
4.0
6.0
吸附量/（mg/g干树脂）
73.29±16.48
143.73±11.59
161.63±11.24
206.09±13.91
205.21±9.35
210.44±10.37
由表 3可知，上柱药液在树脂中吸附 2 h后基本达到吸附
平衡，故树脂吸附平衡时间确定为2 h。
2.2.6 洗脱溶剂考察 （1）洗脱曲线的绘制：精密吸取三七花
提取液 15 mL（含 0.6（生药）g/mL）上柱，以不同溶剂（水 50、
100 mL，30％乙醇 50、50、100、100 mL，50％乙醇 50、50、100、
100 mL，70％乙醇 50、50、100L、100 mL）梯度洗脱，洗脱流速
1.0 mL·min-1，测定不同馏分总皂苷含量，按“2.2.4”项下公式计
算转移率及纯度，绘制洗脱曲线，详见图1。
由图 1可知，三七花总皂苷主要集中在洗脱剂为浓度
30％、50％和 70％乙醇处，但从各洗脱部分的纯度来看，30％
表 1 不同型号大孔吸附树脂对三七花总皂苷的吸附及解吸
情况
Tab 1 Absorption and desorption of different types of mac-
roporous adsorptive resin on total saponins from flower buds
of Panax notoginseng
树脂型号
D101
AB-8
NKA9
N/
（mg/g树脂）
68.77
63.43
67.52
70％乙醇的E/
（mg/g树脂）
55.89
34.06
41.33
P
/％
81.27
53.70
61.21
85％乙醇的E
（mg/g树脂）
65.57
40.31
59.43
P
/％
95.34
63.55
88.02
16
14
12
10
8
6
4
2
0
水50
mL
水10
0 mL
30％
乙醇
50 m
L
30％
乙醇
50 m
L
30％
乙醇
100 m
L
30％
乙醇
100 m
L
50％
乙醇
50 m
L
50％
乙醇
50 m
L
50％
乙醇
100 m
L
50％
乙醇
100 m
L
70％
乙醇
50 m
L
70％
乙醇
50 m
L
70％
乙醇
100 m
L
70％
乙醇
100 m
L
提取
量/m
g
馏份
图1 洗脱曲线
Fig 1 Elution curves
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乙醇洗脱物中总皂苷纯度约 18％，50％乙醇洗脱物中总皂苷
纯度约 50％，70％乙醇洗脱物中总皂苷纯度约 90％。30％乙
醇洗脱物中杂质较多，所以在下一步的洗脱溶剂考察中考虑
50％乙醇、70％乙醇洗脱。
（2）洗脱溶剂种类的选择：精密吸取三七花提取液 15 mL
（含 0.6 g（生药）/mL）上柱，以不同溶剂洗脱，测定吸光度，按
“2.2.4”项下公式计算转移率及纯度，结果见表4。
由表 4可知，用 70％乙醇洗脱的效果要好于 50％乙醇。
采用NaOH溶液洗脱样品，有利于提高总皂苷纯度。因而综合
考虑，采用洗脱方式为先用 0.1 mol·mL-1NaOH水溶液冲洗大
孔树脂柱，再用水洗至流出液呈中性，然后用70％乙醇洗脱并
收集。
（3）不同浓度NaOH水溶液考察：精密吸取三七花提取液
15 mL（含 0.6 g（生药）·mL-1）上柱，分别用不同浓度的NaOH
水溶液各 200 mL洗脱，再用水洗至流出液呈中性，然后用
70％乙醇洗脱并收集，测定吸光度，按“2.2.4”项下公式计算转
移率及纯度，结果见表5。
表5 不同浓度NaOH水溶液考察结果（x±s，n＝3）
Tab 5 Comparison of NaOH solution with different concen-
trations（x±s，n＝3）
NaOH浓度/mol·mL-1
0.1
0.5
1.0
转移率/％
75.09±1.27
29.03±0.32
27.75±0.79
纯度/％
77.55±1.18
86.03±7.26
88.79±2.55
由表5可知，0.1 mol·mL-1NaOH溶液的转移率和纯度均较
为适宜。而 0.5、1.0 mol·mL-1NaOH虽可提高纯度，但严重影
响转移率。因此综合考虑，以0.1 mol·mL-1 NaOH溶液较佳。
（4）NaOH水溶液用量考察：精密吸取三七花提取液 15
mL（含 0.6 g（生药）/mL）上柱，分别用 100、200、250 mL的 0.1
mol·mL-1的NaOH水溶液洗脱，再用水洗至流出液呈中性，用
70％乙醇洗脱并收集，测定吸光度，按“2.2.4”项下公式计算转
移率及纯度，结果见表6。
表6 NaOH水溶液用量考察结果（x±s，n＝3）
Tab 6 Amount of NaOH solution（x±s，n＝3）
NaOH用量/mL
100
200
250
转移率/％
74.47±1.05
75.09±1.27
69.01±1.68
纯度/％
46.92±1.95
77.55±1.18
75.73±3.85
由表 6可知，NaOH用量为 100 mL时，不能有效除杂。
200、250 mL NaOH用量的除杂效果相似，但随着NaOH用量增
加，会使后续操作“水洗至中性”的用量增加，耗时耗水，因此
以200 mL 0.1 mol·L-1NaOH为佳。
2.2.7 正交试验优选大孔吸附树脂富集纯化工艺 量取 9份
95％乙醇浸泡的D101型大孔吸附树脂 50 mL，装于 40 cm×2
cm的柱中，精密吸取三七花提取液（含0.6 g（生药）/mL）上柱，洗
脱剂为70％乙醇，以上样量（A）、流速（B）和洗脱溶剂量（C）为考
察因素，以转移率和纯度的平均值为评价指标，优选工艺。因素
水平见表7；正交试验结果见表8；方差分析结果见表9。
表7 因素水平
Tab 7 Factors and levels
水平
1
2
3
A/mL
20
15
10
B/BV·h-1
3
2
1
C/mL
100
200
300
表8 正交试验结果
Tab 8 Results of orthogonal test
试验号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅰ2
Ⅱ2
Ⅲ2
R
A
1
1
1
2
2
2
3
3
3
186.8
191.2
175.9
34 894.2
36 557.4
30 940.8
15.3
B
1
2
3
1
2
3
1
2
3
185.2
184.0
184.7
34 299.0
33 856.0
34 114.1
1.2
C
1
2
3
2
3
1
3
1
2
173.2
195.4
185.3
29 998.2
38 181.2
34 336.1
22.2
D
1
2
3
3
1
2
2
3
1
183.3
183.3
187.3
33 598.9
33 598.9
35 081.3
4.0
（转移率+纯度）/2
58.2
65.2
63.4
68.4
63.3
59.5
58.6
55.5
61.8
CT＝34 089.5
表9 方差分析结果
Tab 9 Results of variance analysis
方差来源
A
B
C
误差e
离差平方和
41.30
0.20
82.33
3.53
自由度
2
2
2
2
方差
20.65
0.10
41.17
1.77
F
11.670 4
0.060 0
23.262 2
P
＜0.01
注：F0.01（2，4）＝18.00
note：F0.01（2，4）＝18.00
由表8、表9可知，三七花总皂苷大孔树脂富集工艺各因素
影响大小为 C＞A＞B，其中洗脱溶剂量的影响具有显著性
（P＜0.01）。优选的工艺为A2B1C2，即树脂量为50 mL（相当于
4.515 g干树脂），上样量为15 mL（相当于375.15 mg总皂苷），
以3 BV·h-1的流速洗脱，收集200 mL洗脱液。
2.3 工艺验证试验
三七花总皂苷最佳富集纯化工艺为三七花用70％乙醇回
流提取 2次，用量分别为 6倍和 8倍，提取时间分别为 2.0、2.5
h，提取液回收乙醇后，浓缩至0.6 g（生药）/mL的药液，水沉除
叶绿素，将药液以 2 000 r·min-1（15℃）离心 10 min，离心后的
药液定容至含三七花总皂苷 25.01 mg·mL-1的浓度（0.6 g（生
药）/mL），作为上柱供试液。药液经D101大孔吸附树脂富集
纯化后即得三七花总皂苷提取物。富集纯化工艺参数为D101
树脂 50 mL（相当于 4.515 g干树脂）装于 40 cm×2 cm的小柱
中，上样药液 15 mL，静置 2 h，用 0.1 mol·L-1 NaOH溶液 200
mL淋洗后用水洗至中性（pH＝7），再用 70％乙醇以每小时 3
倍柱体积的流速洗脱，收集洗脱液 200 mL，回收乙醇（65℃）
至稠膏，60℃真空干燥，粉碎，即得。
于 40 cm×2 cm的 4根D101大孔吸附树脂柱中上样三七
表4 洗脱溶剂种类考察结果（x±s，n＝3）
Tab 4 Investigation of elution solvent（x±s，n＝3）
洗脱溶剂
50％乙醇
0.1 mol·mL-1NaOH，50％乙醇
70％乙醇
0.1 mol·mL-1NaOH，70％乙醇
转移率/％
66.51±0.52
69.89±1.65
80.65±2.79
75.09±1.27
纯度/％
62.24±2.28
68.92±2.15
70.12±2.23
77.55±1.18
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花总皂苷含量为 25.01 mg·mL-1的药液各 15 mL，按以上最佳
工艺条件洗脱。结果，转移率为（63.4± 0.60）％，纯度为
（66.5±2.32）％；于110 cm×9 cm的装有4 500 mL D101大孔吸
附树脂的柱中上样0.6 g（生药）/mL药液各1 350 mL，按上述优
选的工艺条件洗脱。结果，转移率为（61.8±0.10）％，纯度为
（68.9±0.10）％。故上述工艺基本稳定，转移率和纯度都较高，
可作为三七花总皂苷的富集纯化方法。
3 讨论
在利用大孔吸附树脂进行纯化时，必须首先进行上样液
离心澄清等预处理，试验中发现上样液经过离心分离后，能提
高总皂苷的纯度，更重要的是能提高树脂的使用寿命。从吸
附等温线来看，D101大孔吸附树脂对三七花总皂苷的吸附是
个较慢的过程，其在静态吸附条件下，2 h才能达到吸附平衡。
在上样液浓度考察试验中发现，上样液浓度越大，转移率反而
下降，这是由于在相等的三七花皂苷含量下，浓度大的溶液体
积小，在动态吸附中吸附时间短，树脂未能充分吸附。为提高
树脂的吸附速率，可考虑从控制吸附温度方面进一步考察[6]。
为了进一步提高纯度，试验中采用了NaOH溶液进行除
杂，收到一定效果，这可能是因为三七花中含有大量黄酮类成
分，单用 70％乙醇洗脱，易将其一并洗脱出柱，使总皂苷色泽
加深，纯度降低，而采用NaOH溶液先淋洗，再用 70％乙醇洗
脱后，可除去大部分黄酮，从而提高有效部位总皂苷的纯度。
参考文献
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人参总皂苷的工艺研究[J].北京中医药大学学报，2006，
29（5）：344.
（收稿日期：2011-05-30 修回日期：2011-08-22）
＊硕士研究生。研究方向：中药复方制剂的研发。电话：
0991-8562317。E-mail：baobao0801@sohu.com
#通讯作者：教授，硕士研究生导师。研究方向：中药复方制剂的
研发。电话：0991-5810646
散结明目颗粒的制备及质量标准研究
张艳君 1＊，马婷玉 1，聂继红 2 #，王 萍 2，刘兆龙 2（1.新疆维吾尔自治区人民医院，乌鲁木齐市 830001；2.新疆医
科大学附属中医医院药学部，乌鲁木齐市 830000）
中图分类号 R283.624；R284.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408（2011）39-3683-03
摘 要 目的：制备散结明目颗粒，并建立其质量标准。方法：采用湿法制粒制备散结明目颗粒，薄层色谱（TLC）法对方中夏枯
草、赤芍、槐花、川芎进行定性鉴别，高效液相色谱法对制剂中丹酚酸B进行含量测定。结果：制备的颗粒干燥、均匀；TLC斑点清
晰、分离度较好，阴性对照无干扰。丹酚酸B的检测浓度在 0.062～1.054 mg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r＝
0.999 9），平均回收率为100.3％（RSD＝1.52％，n＝6）。结论：所建标准可用于散结明目颗粒的质量控制。
关键词 散结明目颗粒；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法
Study on Preparation and Quality Standards of Sanjie Mingmu Granules
ZHANG Yan-jun，MA Ting-yu（Xinjiang Uygur Autonomous Region People’s Hospital，Urumqi 830001，China）
NIE Ji-hong，WANG Ping，LIU Zhao-long（Dept. of Pharmacy，The Affiliated Hospital of TCM，Xinjiang Medi-
cal University，Urumqi 830000，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To prepare Sanjie mingmu granules，and to establish the quality standard of it. METHODS：Sanjie
mingmu granules were prepared by wet granulation，Prunella vulgaris，Paeoniae Radix Rubra，Sophora japonica and Ligusticum ch-
uanxiong in prescription were identified with the method of TLC. The contents of salvianolic acid B were determined by HPLC. RE-
SULTS：Prepared granulationes were dry and uniform.TLC spots were clear and well-separated without interference from negative
sample. The linear range of salvianolic acid B was 0.062～1.054 mg·mL-1（r＝0.999 9）with an average recovery of 100.3％
（RSD＝1.52％，n＝6）. CONCLUSIONS：Established standard is suitable for the quality control of Sanjie mingmu granules.
KEY WORDS Sanjie mingmu granules；Quality standards；TLC；HPLC
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