全 文 ：李 红，向增旭． HPLC法测定不同产地甜叶菊中糖苷含量［J］． 江苏农业科学，2012，40(8) :306 － 307．
HPLC法测定不同产地甜叶菊中糖苷含量
李 红，向增旭
(南京农业大学中药材研究所，江苏南京 210095)
摘要:采用 HPLC法测定 14 份不同产地的甜叶菊样品中甜菊糖苷含量。利用大孔树脂吸附法提取甜叶菊中甜菊
糖苷，HPLC采用 Zorbax － NH2(250． 0 mm × 4． 6 mm，5 μm)色谱柱，流动相为乙腈 －水(78 ∶ 22，体积比) ，梯度洗脱，流
速 0． 8 mL /min，柱温 30 ℃，测定波长 210 nm;进样量 15 μL。结果表明，HPLC法操作简便、高效快速、稳定性好;14 份
样品中甜菊糖苷总含量为 4． 78% ～ 15． 52%，其中瑞鲍迪苷 A含量为 0． 84% ～ 11． 21%，瑞鲍迪苷 C含量为 0． 26% ～
1． 55%，斯替维苷含量为 0． 80% ～ 6． 66%，甜菊双糖苷含量为 0． 01% ～ 1． 22%，杜尔可苷含量为 0 ～ 0． 28%。
关键词:甜叶菊;甜菊糖苷;高效液相色谱法;质量评价
中图分类号:S566． 9 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2012)08 － 0306 － 02
收稿日期:2012 － 01 － 11
作者简介:李 红(1987—) ，，山东临沂人，硕士研究生，研究方向为
药用植物生物技术育种。E － mail:lihongshannong@ 126． com。
通信作者:向增旭，副教授。E － mail:zxxiang@ njau． edu． cn。
甜叶菊(Stevia rebaudiana Bertoni)为多年生草本植物，属
菊科甜菊属植物，原产于南美洲巴拉圭的阿曼拜和巴兰卡尤
山脉。甜叶菊在我国北方多有种植，常用来泡茶或作为提取
甜菊糖苷的原料［1 － 4］。甜菊糖苷具有高甜度、低热量、无毒等
特性，长期食用不会使人发胖，特别适宜肥胖病、糖尿病、高血
压、动脉硬化、龋齿病患者使用，而且物理、化学性质稳定、无
发酵性，可延长甜菊糖苷制品的保质期。因而，被广泛应用在
食品和药物行业中，被誉称为继蔗糖、甜菜糖之后的第三种天
然糖源 。甜菊糖苷代替蔗糖符合现代人对健康理念的要求，
因此开发甜菊糖苷具有极广阔的前景。从甜叶菊叶子中提取
的是 10 种甜菊糖苷的混合物，不同甜菊糖苷的口感和甜度都
各不相同，其中斯替维苷(ST)和瑞鲍迪苷 A(A3)所占比例
最大(一般在 90% 以上) ，瑞鲍迪苷 C(RC)、杜尔克苷 A
(DA)、甜菊双糖苷(SB)的含量较少，由于 A3 甜度高于 ST且
口味优于 ST，因此将 A3 的含量及 A3 所占比例作为甜叶菊品
种和甜菊糖苷质量评价的主要指标［2，5 － 7］。
目前关于甜叶菊中甜菊糖苷的测定方法有质量法、碱量
法、分管光度法、薄层色谱法等［8 － 15］。本试验拟采用高效液
相色谱法对 14 份甜叶菊样品进行检测，并分析甜叶菊中甜菊
糖苷混合物中不同甜菊糖苷的含量，以期为甜叶菊质量评价
提供科学依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
14 份甜叶菊样品采于东台、明光、济宁、南京等地的农业
企业和种植基地，并由南京农业大学中药材研究所向增旭副
教授鉴定确定。甜菊糖苷成分瑞鲍迪苷 A、瑞鲍迪苷 C、斯替
维苷、甜菊双糖苷、杜尔可苷 A标准品(Stevioside，日本生产)
由安徽省绿源甜叶菊有限公司提供，质量分数大于 98%。甲
醇为分析纯，乙腈为色谱纯，水为哇哈哈纯净水。大孔吸附树
脂(AB －8)为西安蓝晓科技有限公司生产。
1． 2 仪器
LC － 10A高效液相色谱仪(日本岛津公司产品) ;SPD －
10A 紫外检测器(日本岛津公司产品) ;Precisa92SM － 202A
电子天平(瑞士 Precisa仪器有限公司产品) ;SatoriusBS21S 电
子天平(北京多利斯天平有限公司产品) ;JL － 720D 超声波
清洗仪(上海杰理科技有限公司产品) ;HHS11 － 4 恒温水浴
锅(创博环球生物科技有限公司产品)。
1． 3 方法
1． 3． 1 色谱条件 Zorbax － NH2 (250． 0 mm × 4． 6 mm，
5 μm)色谱柱;流动相:乙腈 －水(78 ∶ 22，体积比) ，梯度洗
脱，流速 0． 8 mL /min;柱温 30 ℃;紫外检测器波长为 210 nm，
进样量 15 μL。
1． 3． 2 标准品溶液制备 将甜菊糖苷标准品置于 105 ℃干
燥箱中烘 2 h，分别精密称取 10 mg，用乙腈 －水(78 ∶ 22，体
积比)溶液溶解并定容至 10 mL，摇匀置于棕色瓶中。即配成
了浓度为 1mg /mL的标准品溶液。依次精密吸取甜菊糖苷标
准品溶液 200、400、600、800、1 000、1 500、2 000 μL 于 10 mL
容量瓶中加乙腈 －水定容至刻度，配制成浓度为 0． 02、0． 04、
0． 06、0． 08、0． 10、0． 15、0． 20 mg /mL 的标准品溶液系列。分
别吸取 15 μL进样，记录色谱图。以峰面积为纵坐标 Y，以标
准品进样量(μg)为横坐标 X进行线性回归，绘制标准曲线，计
算得 A3的回归方程为 Y =3 587． 6X +2 314． 2，r = 0． 999 3;RC
的回归方程为 Y = 1 872． 5X + 1 870． 8，r = 0． 999 1;ST的回归
方程为 Y = 1 735． 6X + 2 041． 9，r = 0． 999 6;SB的回归方程为
Y = 2 064． 8X + 2 406． 7，r = 0． 999 0;DA 的回归方程为 Y =
1 739． 5X + 1 503． 3，r = 0． 999 5。
1． 3． 3 供试样品溶液的制备 蒸煮法获得甜菊糖苷粗液:将
14份甜叶菊样品置于 105 ℃干燥箱中烘 2 h，分别称取 5 g放入
烧杯中加入 100 mL纯净水置于 60 ℃水浴锅中蒸煮 60 min过滤
得到粗液，连续提取 4次，然后将 4次所得提取液合并。大孔树
脂吸附法纯化提取液:将提取液通过装有大孔型吸附树脂
(AB －8)的层析柱，甜菊糖苷几乎全部被树脂吸附，弃去滤液。
用 80%的甲醇洗脱树脂所吸附的甜菊糖苷直至树脂变白色，收
集洗脱液。将洗脱液过滤脱气并经 0． 45 μm微孔滤膜过滤。
—603— 江苏农业科学 2012 年第 40 卷第 8 期
DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2012.08.094
2 结果与分析
2． 1 精密度
取浓度为 0． 10 mg /mL的标准品溶液连续进样 4 次，记录
峰面积，测定的结果可评价仪器的精密度。A3、RC、ST、SB、DA
平均峰面积分别为 485 607． 3、17 600． 6、13 971． 1、12 921． 15、
8 643． 2，RSD分别为 2． 03%、2． 31%、2． 62%、1． 13%、1． 62%。
说明 HPLC法测定甜菊糖苷含量，精密度良好。
2． 2 重复性
取上述供试样品溶液连续进样 4 次，进样量为 15 μL，记
录峰面积，计算 A3、RC、ST、SB、DA的 RSD值分别为 2． 13%、
1． 04%、2． 59%、1． 49%、2． 05%。表明 HPLC 法测定甜菊糖
苷含量，重复性良好。
2． 3 加样回收率
取甜叶菊粉末约 0． 5 g，分别加入浓度为 0． 10 mg /mL 的
甜菊糖苷标准品溶液 2 mL，按照方法 1． 3． 3 制备供试样品溶
液，按选定的色谱条件连续进样 4 次，记录峰面积并计算 A3、
RC、ST、SB、DA的加样回收率和 RSD。结果表明，A3 的平均
回收率为 97． 2%，RSD 为 2． 68%;RC 的平均回收率为
102． 4%，RSD为 2． 61%;ST的平均回收率为 99． 6%，RSD 为
2． 49%;SB的平均回收率为 95． 6%，RSD 为 2． 57%;DA 的平
均回收率为 99． 8%，RSD为 2． 63%。
2． 4 甜叶菊中甜菊糖苷含量
甜叶菊中甜菊糖苷含量和 A3 占甜菊糖苷总量的比例是
评价甜叶菊质量好坏的重要指标。表 1 结果显示，14 份样品
中糖苷总量在 4． 78% ～ 15． 52%，其中样品 4、2、7、6、3 的糖
苷总量较高。在糖苷中，瑞鲍迪苷 A 含量为 0． 84% ～
11． 21%，瑞鲍迪苷 C的含量为 0． 26% ～ 1． 55%，斯替维苷含
量为 0． 80% ～ 6． 66%，甜菊双糖苷含量为 0． 01% ～ 1． 22%，
杜尔可苷含量为 0 ～ 0． 28%。14 份样品中 A3 占甜菊糖苷总
量的 12． 15% ～ 78． 85%，其中样品 3 的 A3 占甜菊糖苷总量
比例最高。同时试验结果表明，甜菊糖苷含量在同品种产地
间的差异远低于品种间的差异，所以通过品质育种能选育出
甜菊糖苷含量高和 A3 占甜菊糖苷总量比例高的品种。
表 1 不同产地的甜叶菊中所含 5 中糖苷的量、总糖苷量及 A3 所占比例
样品编号 产地
糖苷含量(%)
A3 RC ST SB DA
糖苷总量
(%)
A3 占总糖苷比例
(%)
1 东台 9． 32 1． 35 1． 11 0． 85 0． 28 12． 91 72． 19
2 东台 10． 61 1． 29 0． 83 1． 01 0． 28 14． 02 75． 68
3 东台 9． 06 1． 31 0． 80 0． 17 0． 15 11． 49 78． 85
4 东台 11． 21 1． 55 1． 26 1． 22 0． 28 15． 52 72． 23
5 明光 0． 88 0． 57 5． 74 0． 05 0． 00 7． 24 12． 15
6 明光 5． 99 1． 06 3． 94 0． 35 0． 18 11． 52 52． 00
7 明光 4． 65 1． 30 6． 66 0． 19 0． 07 12． 87 36． 13
8 明光 0． 84 0． 33 3． 56 0． 03 0． 02 4． 78 17． 57
9 济宁 2． 03 0． 50 4． 33 0． 01 0 6． 87 29． 55
10 济宁 0． 94 0． 44 4． 84 0． 10 0 6． 32 14． 87
11 济宁 7． 13 0． 75 1． 41 0． 15 0． 01 9． 45 75． 45
12 南京 1． 56 0． 46 3． 41 0． 01 0 5． 44 28． 68
13 南京 1． 06 0． 53 6． 24 0． 18 0 8． 01 13． 23
14 南京 1． 06 0． 26 3． 91 0． 03 0 5． 26 20． 15
3 结论
HPLC 法测定甜叶菊中甜菊糖苷含量精密度高，重复性
好，回收率为 95． 6% ～ 102． 4%。能同时测定甜叶菊中甜菊
糖苷总量及其成分瑞鲍迪苷 A、瑞鲍迪苷 C、斯替维苷、甜菊
双糖苷、杜尔可苷 A的含量，为甜叶菊质量评价提供了方法。
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