全 文 ：ScienceandTechnologyofFoodIndustry
2007年第07期
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吴 岩,杨长志,刘 永,程 阳
(黑龙江出入境检验检疫局,黑龙江哈尔滨150001)
摘 要:建立了高效液相色谱法测定甜叶菊粗糖苷中甜菊苷含量
的方法,通过单因素实验,确定了分离甜菊苷的最佳色谱
条件。采用 Zorbax80AExtend-C184.6×150mm4μm色
谱柱,MeOH-水 (68∶32V/V)为流动相,流动相流速
1.0mL/min,利用二极管阵列检测器,确定最佳检测波长
为203nm,通过外标法计算甜菊苷的含量。
关键词:高效液相色谱法,甜菊苷,二极管阵列,外标法
中图分类号:TS207.3 文献标识码:A
文 章 编 号 :1002-0306(2007)07-0214-02
收稿日期:2006-08-28
作者简介:吴岩(1981-),男,主要从事安全食品检测工作。
甜叶菊(SteviaYebaudianaBertoni)属菊科甜菊
属多年生草本植物,有154种以上,但具有甜味的仅
甜叶菊一种。野生甜叶菊早在四百多年前巴拉圭居
民就已利用做甜茶等,但直到 1887年,他才引起人
们的注意,并开始研究,到了1955年,人们进行人工
苗圃栽培实验,1964年巴拉圭开始甜叶菊的大田移
植训化并取得了很大成功,其作为新甜源植物,被誉
为新甜源植物的一颗新星。甜菊苷(Stevioside)又称
斯替维苷,是一种双萜配糖体(其结构式见图 1),为
甜叶菊中所含有的主要甜味成分,其甜度为蔗糖的
近 300倍,食品安全性很高,是理想的高甜度、低热
量,对糖尿病和高血脂症有很好疗效的一种新型甜
味剂,此外它还可用于内服药、鱼肝油、清凉剂等医
药品的品味改良剂和矫味剂。目前,甜叶菊中甜菊苷
的提取工艺已经日趋成熟,粗糖苷中甜菊苷的提取
率也在进一步升高。但是,要得到粗糖苷中甜菊苷的
准确含量其检测方法还不够成熟,常用的检测方法
有气相色谱法、薄层色谱法和比色法,其中气相色谱
法强处理比较烦琐,样品经甲醇衍生化为甲酯,反应
转化率低;薄层色谱法操作较难,比色法干扰较大,
造成定量不够准确。而本文采用高效液相色谱法,其
方法前处理简单,分析时间短,分离度好,使甜菊苷
与其它杂质能够完全彻底地分开,保证了测定结果
定性、定量的准确性,为甜菊苷的提取工艺的优化提
供了准确的实验数据,同时对甜菊苷在医药业和食
品加工业有更加深远的指导意义。
1材料与方法
1.1材料与仪器
甜菊苷标准品 甜菊苷(SteviosideStandard),购
自日本;甜叶菊粗糖苷 实验室自制;甲醇 色谱纯试
剂;无水乙醇 分析纯试剂;水 自制,二次重蒸;标准
溶液 准确称取甜菊苷标准品200mg,加入10mL容
量瓶中,以 20%乙醇溶解,定容至刻度,作为标准储
备液,则该标准储备液浓度为2000μg/mL。
Agilent1100高效液相色谱仪 配有在线脱气机、
自动进样器、柱温箱化学工作站;DAD检测器,旋混仪。
1.2色谱条件
色 谱 柱 :Zorbax80AExtend-C18 4.6×150mm
4μm;流动相:MeOH!水(68∶32V/V);检测器:二极
管阵列检测器(DAD);检测波长:203nm;柱温:25℃;
流速1.0mL/min。
1.3分析方法
1.3.1样品前处理 准确称取实验室已制备好的甜叶
菊粗糖苷0.2000g,将其放入20mL的容量瓶中,向其
中加入 4.0mL水,在旋混仪上混匀 2min,使其溶解,
然后用无水乙醇稀释至刻度,准确定容,静止10min。
用针头过滤器吸取 2～3mL样品溶液,过 0.45μm滤
膜,滤液转移至进样小瓶中,供液相色谱进行甜菊苷
的组分分析,外标法定量。
高效液相色谱法测定甜叶菊粗糖
苷中甜菊苷的含量
图1甜菊苷的结构式
CH3
OR2
COOR1
CH3
CH3
分 析 检 测
214
Vol.28,No.07,2007
2007年第07期
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[1]吴锦涛,张昭其.果蔬保鲜与加工[M].北京:化学工业出版
社,2001.
[2]马俊莲,等.我国果蔬贮藏保鲜业的现状与发展对策[J].保
鲜与加工,2001(1):28～30.
[3]吕绍杰.活性钙的新用途[J].精细与专用化工品,2001,16:
13～14.
[4]一色贤司,水内健二.カルシウム製剤による微生物制御の
可能性について[J].日本食品工业学会誌,1994,41(2):135～140
[5]王叔淳.食品卫生检验技术[ M].北京:化学工业出版社,
1988.144～193.
[6]赵丽芹.园艺产品贮藏加工学[M].北京:中国轻工业出版社,
2001.25～4.
(上接第191页)
1.3.2标准曲线的绘制 精确吸取一定体积的标准储
备液,配制成不同浓度的标准溶液,进样分析,进样量
10μL,以甜菊苷含量Y(μg)对峰面积X作图,得标准
曲线,回归方程为Y=3.0987X-12.8436,线性范围:
50～3000μg。甜菊苷的标准样品的液相色谱图见图2。
2结果与讨论
2.1单因素实验
对上述前处理所得到的样品,用液相色谱仪进行
分析(见图3),本实验采用Zorbax80AExtend-C184.6×
150mm4μm高柱效的色谱柱。在色谱分离上起关键作
用的流动相的选取上,我们分别选用了以乙腈和水为
体系的流动相和以甲醇和水为体系的流动相进行色谱
分离,通过大量对比实验表明,乙腈和水为体系的流动
相在洗脱时间和分离度上都明显不如以甲醇和水为体
系的流动相。由于甜菊苷水溶性较好,故在保证分离度
的前提下,我们选择保留时间最短的色谱条件,确定了
以甲醇和水为体系的流动相以及最佳的体积比。
2.2最佳检测波长的确定
本方法利用二极管阵列检测器能够采集化合物的紫
外吸收光谱曲线的特点,通过从化学工作站软件得到的
甜菊苷的紫外吸收光谱曲线整合出甜菊苷的等吸收曲
线,得出了甜菊苷在紫外区的最大吸收波长为203nm,从
而大大提高了甜菊苷的响应值和方法的检出限。
2.3回收率实验
准确吸取一定量的对照品标准储备液加入样品
中,与样品一同前处理后,定容至 20mL,进行色谱分
析,测定结果见表1。
2.4精密度实验
精密称取 8份同批甜菊苷粗糖苷样品进行前处
理,测定后其含量分别为 0.358%、0.356%、0.362%、
0.358%、0.355%、0.360%、0.354%、0.359%,平均值为
0.358%,精密度(RSD)为0.56%。
3结论
本文建立了用高效液相色谱法准确测定甜叶菊粗
糖苷中甜菊苷的含量的方法,确定了流动相的体系和
流动相的最佳配比,利用二极管阵列检测器优化出了
甜菊苷的最大吸收波长,从而使该方法灵敏度高,分析
速度快,定性、定量准确,弥补了以往检测方法的不足,
为甜菊苷提取工艺的优化奠定了坚实的技术基础。
参考文献:
[1]刘莲芳,等.食品添加剂分析方法[J].北京:中国轻工业出版
社,1989,9.
[2]藏传江,等.甜菊甙的提取工艺[J].山东食品发酵,1997(3):
28～29.
[3]陈慕英,等.甜菊甙类的研究[J].中医药信息,2001(3):23～24.
添加量
(μg)
测定值
(μg)
回收率
(%)
平均回
收率(%)
变异系
数(%)
甜
菊
苷
413.5 404.5 97.82 99.5 2.85
834.9 852.4 102.10
1252.1 1234.5 98.59
表1回收率与精密度实验结果
图2甜菊苷标准样品的色谱图
800
600
400
200
0
mAU
1
0 2 4 6 8 10min
DAD1 A, Sig=203,4 Ref=360.50(L:\0717TJD\ST.D)
6
.
2
0
4
图3样品中甜菊苷的色谱图
1000
800
600
400
200
0
mAU
2
2 4 6 8 10min
DAD1 A, Sig=203,4 Ref=360.50(L:\0717TJD\06C774-2.D)
6
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1
4
6
分 析 检 测
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