全 文 ：RP-HPLC测定返魂草颗粒中绿原酸和咖啡酸含量
刘艳清 , 　汪洪武 , 　鲁湘鄂
(肇庆学院轻工化学系 ,广东 肇庆 526061)
收稿日期:2006-09-20
基金项目:肇庆市科技创新项目(2006G21);肇庆学院科研基金资助项目(0643)
作者简介:刘艳清(1973～ ),女 ,博士 ,讲师 ,研究方向:天然产物化学 、色谱分析 ,电话:0758-2716357, E-m ail:yq lin@ zqu. edu. cn
关键词:反相高效液相色谱法;返魂草颗粒;绿原酸;咖啡酸
摘要:目的:建立返魂草颗粒(返魂草)绿原酸和咖啡酸的反相高效液相色谱分析方法。方法:Ec lipse XDB-C18柱 , 乙腈-
0. 4 磷酸(12∶88, V /V)为流动相 , 柱温:室温 , 于 327 nm 测定返魂草颗粒中的绿原酸和咖啡酸。 结果:绿原酸在
0. 005 6 ～ 0. 896μg /L,咖啡酸在 0. 012 5 ～ 0. 1 μg /L内线性关系良好 , 平均回收率分别为 100. 1 、 99. 8 。结论:该法
简便 、准确 、无干扰 , 可用于测定返魂草颗粒中绿原酸和咖啡酸含量。
中图分类号:R927. 2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2007)10-1451-03
Determ ination of chlorogenic ac id and caffeic ac id in Fanhuncao Granule byRP-
HPLC
LIU Yan-qiang, 　WANG Hong-wu, 　LU X iang-e
(D epartm ent o fLight Industry＆Chem istry, Z haoqing College, Z haoqing 526061 , Ch ina)
KEYWORDS:RP-HPLC;Fanhuncao G ranu le;ch lorogenic acid;caffeic acid
ABSTRACT:AIM:To deve lope a reve rsed-phase h igh performance liquid chroma tograph icme thod for de term ing
ch lo rogenic acid and ca ffe ic acid in Fanhuncao G ranu le (Senecio cannabifoliusLess). METHODS:The operation
w as carried ou t on Ec lipse XDB-C18 column w ith the mob ile phase consisting of a m ix tu re o f aceton itrile-0. 4
phosphoric acid (12∶88, V /V). The flow rate of 1. 0mL /m in andUV de tec tion w avelength at 327 nm were set to
dete rm ine the con tents of chlorogenic ac id and caffieic acid. RESULTS:There w as good linear relationsh ip be-
tw een the concen trations and the peak-areas o f ch lo rogenic acid and ca ffe ic acid. The two kinds o f standa rd so lu-
tionsw ere bo th stable in 16 h (RSD =1. 55 fo r ch lo rogenic acid, 1. 11 fo r caffeic acid) The ave rage recovery
w as 100. 1 and 99. 8 fo r ch lo rogenic acid and caffeic acid, repective ly. CONCLUSION:Themethod is sim-
ple, sensitive, rapid and accura te, and can be used fo r the quality control of Fanhuncao G ranule.
　　返魂草颗粒是以返魂草 (Senecio cannabifolius
Less)为原料经精制而成的纯中药制剂 ,具有清热祛
痰 、镇咳平喘等功效 [ 1] ,其主要活性成分为绿原酸
(ch lo rogenic acid)和咖啡酸 (caffe ic acid)[ 2] 。王继
彦等人 [ 3]利用 HPLC对返魂草及其注射剂中绿原酸
的含量进行了测定 ,但尚未见同时测定返魂草颗粒
中绿原酸和咖啡酸。为了有效地控制返魂草颗粒的
质量 ,本实验采用反相高效液相色谱法同时测定了
绿原酸和咖啡酸的含量 ,样品不需要特殊处理 ,具有
简洁 、准确 、无干扰的特点 。
1　实验部分
1. 1　仪器与试剂
　　美国安捷伦 LC-1200高效液相色谱系统:安捷
伦 Chem Sta tion色谱工作站;SK 8200H台式超声波
清洗器(上海科导超声仪器有限公司 );绿原酸 、咖
啡酸 (供含量测定用 ,中国药品生物制品检定所 );
乙腈为色谱纯 (J. T. B ake r公司 ),磷酸 (分析纯 ,天
津福晨化学试剂厂);甲醇 (分析纯 ,天津市富宇精
细化工有限公司);其他试剂为分析纯 ,所用水为双
蒸水 。返魂草颗粒 (吉林华康药业股份有限公司 ,
批号 060910)。
1. 2　色谱条件
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中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
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　　色谱柱:Eclipse XDB-C18柱 (150 mm ×4. 6mm ,
5 μm),以乙腈-0. 4 磷酸 (12∶88, V /V)为流动相 ,
检测波长:327 nm ,流速:1mL /m in,柱温:室温 ,进样
量:20 μL。
1. 3　实验方法
1. 3. 1　对照品溶液制备
精密称取经减压干燥 (50 ℃)至恒重的绿原酸
对照品 5. 6mg,置 50mL量瓶中 ,加 50 甲醇稀释
至刻度 ,摇匀 ,即得浓度为 112 mg /L的绿原酸对照
品溶液 。精密称取咖啡酸对照品 2. 5 mg,置于 100
mL量瓶中 ,加 50 甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得浓
度为 25 mg /L的咖啡酸对照品溶液。
1. 3. 2　样品溶液制备
精密称取本品颗粒约 2. 5 g,加入适量 50 甲
醇溶解 ,超声处理 30 m in,取出 ,冷却到室温后再用
50 甲醇定容到 50 mL。摇匀 ,用 0. 45 μm微孔滤
膜过滤即得样品溶液。
2　结果与讨论
2. 1　系统适用性试验
　　分别吸取 11. 2 mg /L绿原酸 , 2. 5mg /L咖啡酸
对照品溶液 、样品液 20μL在 HPLC上进样分析 ,记
录色谱图见图 1。对比保留时间可知峰 a为绿原
酸 ,峰 b为咖啡酸 , 经计算其理论塔板数分别为
10 763和 16 516,二者的分离度为 4. 98,二者分离较
好 ,表明可对二者同时定量分析。
图 1　高效液相色谱图
A对照品 B样品　　 a绿原酸　 b咖啡酸
2. 2　线性关系
　　精密量取 112 mg /L绿原酸对照品溶液和 25
mg /L咖啡酸对照品溶液 ,置 10 mL量瓶中 , 50 甲
醇定容至刻度 ,摇匀。分别精密取上述对照品溶液
0. 25, 0. 50, 1. 00, 2. 00, 4. 00 mL用 50 甲醇定容到
10 mL。吸取上述对照品溶液 20 μL,在 HPLC仪上
均进样 2次 ,记录色谱图 。以平均峰面积 A对浓度
C(mg /L)回归 ,得绿原酸与咖啡酸标准曲线回归方
程分别为:A =5 036. 7C -38. 738(r=0. 999 7)、A =
3 890. 1C - 0. 807 3(r=0. 999 3)。
绿原酸和咖啡酸分别 0. 005 6 ～ 0. 089 6 mg /L、
0. 001 25 ～ 0. 01mg /L在范围内与峰面积呈良好的
线性关系。
2. 3　精密度试验
　　精密吸取 11. 2 mg /L绿原酸对照品溶液和 5. 6
mg /L咖啡酸对照品溶液各 20 μL,在 HPLC上连续
进样 5次 ,记录色谱图 , 结果峰面积 RSD 分别为
0. 52 和 1. 63 ,表明进样精密度合格 。
2. 4　稳定性试验
　　分别在 0, 2, 4, 6, 8, 16 h内测定 11. 2 mg /L绿
原酸对照品溶液 ,结果峰面积 RSD为 1. 55 ,表明
绿原酸对照品溶液在 16 h内稳定 。在 0 ～ 24 h内测
定 5. 6 mg /L咖啡酸对照品溶液 ,其峰面积 RSD为
1. 11 ,表明咖啡酸对照品溶液在 24 h内稳定。
2. 5　重复性试验
　　取批号 060910样品 ,按 1. 3. 2项制备 5份供试
液 ,吸取 20 μL进样分析 2次 ,记录色谱图 ,以平均
峰面积按标准曲线法计算 ,测得绿原酸和咖啡酸含
量分别为 89. 99 μg /g(RSD =0. 62 , n =5), 24. 76
μg /g(RSD =1. 45 , n=5),表明进样精密度合格。
2. 6　回收率试验
　　精密量取本品 1. 0 mL,置 50 mL量瓶中 ,分别
精密加入表 1所示绿原酸和咖啡酸对照品溶液量 ,
加 50 甲醇定容至刻度 ,摇匀 ,作供试液 。吸取 20
μL进样分析 2次 ,记录色谱图 ,以平均峰面积按标
表 1　 绿原酸和咖啡酸的回收率
Tab le 1　　R ecover ies of ch lorogen ic ac id and caffeic
ac id (n=9)
加入绿原
酸 /μg
测得绿原酸
总量 /μg
回收率
/
加入咖啡
酸 /μg
测得咖啡酸
总量 /μg
回收率
/
100 197. 6 100. 0 10. 0 34. 5 101. 0
99. 1 196. 8 100. 1 9. 9 34. 4 99. 0
101 198. 6 100. 0 11. 0 35. 5 99. 1
198 295. 6 100. 5 20. 6 45. 1 99. 5
201 298. 6 100. 5 21. 1 45. 6 99. 6
204 301. 6 100. 0 19. 9 44. 4 100. 5
295 392. 6 99. 5 30. 6 55. 1 100. 3
301 398. 6 99. 7 30. 8 55. 3 99. 4
298 395. 6 100. 3 31. 2 55. 7 99. 7
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中 成 药
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准曲线法计算 ,测得绿原酸和咖啡酸平均回收率分
别为 100. 1 (RSD =0. 10 ), 99. 8 (RSD =
0. 40 ),见表 1。
2. 7　样品含量测定
　　精密称取返魂草颗粒 5份 ,加 50 甲醇定容至
刻度 ,混匀。精密量取 1. 0mL,置 50 mL量瓶中 ,加
50 甲醇定容至刻度 ,摇匀作供试液。精密吸取 20
μL进样分析 3次 ,记录色谱图 ,以平均峰面积按标
准曲线法计算样品中绿原酸与咖啡酸含量 。重复试
验 3次 ,样品测定结果见表 2。
表 2　 绿原酸和咖啡酸含量
Tab le 2　The con ten ts of ch lorogen ic ac id and caffeic ac id
序号 绿原酸 /μg /g 咖啡酸 /μg /g
1 98. 70 24. 45
2 87. 89 26. 76
3 90. 20 24. 13
4 96. 26 23. 18
5 89. 37 25. 17
平均 92. 48 24. 74
3　讨论
　　由于绿原酸和咖啡酸有抗病毒和广泛的抗菌消
炎作用 ,它们同时存在于返魂草中 。返魂草具有清
热解毒 、宣肺化痰等功效与含此二组分有密切关系 ,
因此控制返魂草颗粒中绿原酸和咖啡酸含量具有重
要意义。本实验考察了使用另外 2种流动相系统进
行实验 ,结果绿原酸和咖啡酸峰不产生变形 ,证明是
单峰 。在本实验条件下测得色谱图基线平直 ,方法
学研究表明此法简便 、准确 ,可用于控制返魂草颗粒
质量 。
参考文献:
[ 1] 　崔静莲 ,付艳敏 ,王丹玉 ,等.乙醚质量影响返魂草冲剂 TLC的
鉴别 [ J] .中国药品标准 , 2004, 5(2):28, 39.
[ 2] 　李丽静 ,王继彦 ,王　岩 ,等.返魂草提取物及其有效成分抗病
毒作用的研究 [ J] .中国中医基础医学杂志 , 2005, 11(8):585-
587.
[ 3] 　王继彦 ,李丽静 ,张莲珠. H PLC法测定返魂草及其注射剂中绿
原酸 [ J] .中草药 , 2005, 36(8):1166-1167.
RP-HPLC同时测定复方沙棘籽油栓中蛇床子素和欧前胡素的含量
李小安 , 　张军科 , 　史美佳 , 　侯亚兰
(陕西海天制药有限公司 ,陕西 咸阳 712000)
收稿日期:2006-09-20
作者简介:李小安(1979～ ),男 ,助理工程师 ,从事中药制剂质量标准研究 ,电话:029-33810048, E-m ail:lax810728@56. com.
关键词:RP-H PLC;复方沙棘籽油栓;蛇床子素;欧前胡素
摘要:目的:建立 RP-HPLC法同时测定复方沙棘籽油栓(沙棘籽油 , 蛇床子 , 苦参等 )中蛇床子素和欧前胡素的含量的方
法。方法:色谱柱为 Phenom nex( luna)C
18
(4. 6 mm ×250 mm , 5 μm), 柱温:25 °C;流动相为甲醇-水(65∶35), 流速:1. 0
mL /m in;检测波长:310 nm。结果:蛇床子素和欧前胡素分别在 0. 051 ～ 0. 816 μg(r=0. 999 6)和 0. 026 ～ 0. 416 μg( r=
0. 999 8)范围内线性关系良好 , 平均回收率分别为98. 4 和 97. 6 , RSD分别为 1. 4 (n =6)和 2. 0 (n =6)。结论:本
法简便 、结果准确 、重现性好 , 可用于复方沙棘籽油栓中蛇床子素和欧前胡素的含量测定。
中图分类号:R927. 2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2007)10-1453-03
Determ ination of osthole and mi perator in in Compound Shajiziyou Suppository
by RP-HPLC
LIX iao-an, 　ZHANG Jun-ke, 　SH IM e i-jia, 　HOU Ya-lan
(Ha itian Pharm aceutica l Com pany Ltd. , X ianyang 712000 , Shangxi, Ch ina)
KEYWORDS:RP-HPLC;Compound Sha jiziyou Suppo sito ry;ostho le;imperatorin
ABSTRACT:AIM:To develop aHPLC me thod o f de term in ing osthole and impera to rin in Compound Shajiziyou
1453
2007年 10月
第 29卷　第 10期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
Octobe r 2007
Vo.l 29　No. 10