全 文 ：RP-HPLC法测定土藿香根中乌索酸和齐墩果酸的含量
孙仁爽 1 ,姜启娟2　(1.通化师范学院制药与食品科学系 ,吉林通化 134002;2.吉林省通化市食品药品检验所 ,吉林通化 134000)
摘要　[目的 ] 建立反相高效液相色谱法同时测定土藿香(Agastacherugosa)根中乌索酸和齐墩果酸含量的方法 ,为土藿香的研究开发
提供试验依据。 [方法 ]色谱柱为C18分析柱(4.6mm×250.0mm, 5μm),流动相为乙腈-甲醇 -0.3%H3PO4水溶液 (V∶V∶V=60∶30∶
10),流速为 0.8ml/min,检测波长为 210nm,柱温为常温。 [结果]在选定色谱条件下 2种成分线性关系良好 ,乌索酸和齐墩果酸的样品
加样回收率分别为 99.6%和 98.9%, RSD分别为 3.12%和 1.99%。土藿香根中乌索酸和齐墩果酸的平均含量分别为 0.138mg/g和
0.147mg/g。 [结论]该方法快捷、准确、可靠 ,可用于土藿香根中乌索酸和齐墩果酸含量的定量分析 ,为土藿香药用价值的开发提供了
试验依据。
关键词　土藿香根;乌索酸;齐墩果酸;高效液相色谱法
中图分类号　S567　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2011)02-00766-02
DeterminationofUrsolicAcidandOleanolicAcidinRootofAgastacherugosabyRP-HPLC
SUNRen-shuangetal　(DepartmentofPharmaceuticsandFoodScience, TonghuaNormalColege, Tonghua, Jilin134002)
Abstract　 [ Objective] Toestablishaquantitativemethodforsimultaneousdeterminationofursolicacidandoleanolicacidintherootsof
AgastacherugosabyRP-HPLC, soastoprovidebasisforthestudyanddevelopmentofAgastacherugosa.[ Method] HPLCwascariedouton
C18column(4.6mm×250.0mm, 5μm)atnormaltemperatureusingacetonitrile-methanol-0.3%phosphateacid(V∶V∶Vof60∶30∶10)as
mobilephasewithflowrateof0.8ml/minanddetectedwasatthewavelengthof210nm.[ Result] Thegoodlinearrelationshipwasobtained
undertheoptimumconditions.Therecoveriesofthestandardursolicacidandoleanolicacidwere99.6%and98.9%respectively, withRSD
of3.12%and1.99%respectively.TheaveragecontentofursolicacidandoleanolicacidintherootsofAgastacherugosawere0.138 mg/g
and0.147mg/grespectively.[ Conclusion] Themethodisrapidandprecise, whichcanbeusedtodeterminethecontentofursolicacidand
oleanolicacidintherootsofAgastacherugosa.ThiscaseprovidestheoreticalevidenceforthedevelopmentofmedicinalvalueofAgastache
rugosa.
Keywords　 RootsofAgastacherugosa;Ursolicacid;Oleanolicacid;RP-HPLC
基金项目　吉林省教育厅 “十一五 ”科学技术研究重点项目(2009269)。
作者简介　孙仁爽(1980-),男 ,山东烟台人 ,讲师 ,在读博士 ,从事中
药质量标准研究。
收稿日期　 2010-09-27
　　土藿香(Agastacherugosa)为唇形科植物 ,在我国广泛分
布 ,多为栽培 ,其全草可入药 ,为传统中药之一 ,对治疗夏日
感冒及腹痛吐泻等症有较好的疗效 [ 1] 。但在采收时 ,常只取
地上部分 ,根则废弃 ,而民间常用土藿香根来治疗霍乱吐泄 、
血气痛等症 ,因而其化学成分的研究已引起人们广泛关注 。
目前文献报道土藿香根中含有乌苏酸和齐墩果酸 ,如韩国学
者从根中分离出 3个三萜类化合物和 1个二萜类化合物;邹
忠梅从根中分离出齐墩果酸 [ 2] ;汤鲁宏从其三萜类物质中发
现齐墩果酸和乌苏酸 [ 3] 。但在土藿香根中测定二者含量的
研究尚未见报道。鉴于此 ,笔者利用反相高效液相色谱法同
时对土藿香根中乌苏酸和齐墩果酸的含量进行测定 ,并对该
方法进行考察 ,以期为土藿香这一药用资源的研究开发提供
试验依据 [ 4-5] 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　研究对象。土藿香 ,采自通化师范学院后山 ,经通化
师范学院于俊林教授鉴定为藿香属藿香(Agastacherugosa)
的干燥根。
1.1.2　主要试剂。乌索酸和齐墩果酸对照品(批号:110742-
200516、110709-200304,供含量测定用),由中国药品生物制
品检定所提供;甲醇 、乙腈 ,市售色谱纯;其他试剂均为市售
分析纯;水为娃哈哈纯净水。
1.1.3　主要仪器。高效液相色谱仪(包括四元泵 、紫外检测
器 、英文色谱工作站),由美国安捷伦公司生产。
1.2　方法
1.2.1　色谱条件 。AgilentC18柱 (250.0 mm×4.6 mm, 5.0
μm);流动相为乙腈 -甲醇 -0.3%H3PO4水溶液 (V∶V∶V=
60∶30∶10);柱温为室温;进样量为 10μl;流速为 0.8ml/min;
检测波长为 210nm。乌索酸和齐墩果酸分离度为 1.56,理论
塔板数分别为 16 523和 16 897。
1.2.2　对照品溶液的制备。分别精密称取干燥至恒重的对
照品乌苏酸 5.180mg和齐墩果酸 5.130mg,分别置于 25 ml
容量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度。精密吸取乌苏酸和齐
墩果酸对照品溶液各 1 ml置于 10 ml容量瓶中 ,加甲醇定
容 ,配制乌苏酸和齐墩果酸的混合对照品储备液 ,其中乌苏
酸的浓度为 20.72μg/ml,齐墩果酸的浓度为 20.52 μg/ml。
1.2.3　供试品溶液的制备。取土藿香根粉末 1.00g,置于具
塞锥形瓶中 ,加入 20ml甲醇 ,超声处理 60 min,滤过 ,回收溶
剂 ,残渣加甲醇溶解并转移至 10 ml容量瓶中 ,加甲醇定容 ,
即得供试品溶液 。
1.2.4　方法学考察。
1.2.4.1　检测波长的选择 。分别取乌苏酸和齐墩果酸对照
品溶液在紫外分光光度计 190 ～ 600 nm波长范围内扫描 ,确
定最大吸收波长为检测波长 。
1.2.4.2　线性关系考察。分别精密吸取乌索酸和齐墩果酸
对照品混合溶液 1、5、10、15、20 μl,按 “1.2.1”中色谱条件进
样分析 ,测定峰面积 ,以对照品进样量为横坐标(x),峰面积
为纵坐标(y),进行线性拟合 ,考察 2个标准品的线性关系。
1.2.4.3　精密度试验。精密吸取乌索酸和齐墩果酸的对照
品混合液进样分析 ,平行进样 5次 ,计算乌索酸峰面积相对
标准偏差(RSD)值。
1.2.4.4　稳定性试验 。精密吸取同一份供试品溶液 ,分别
于 0、2、4、8、12 h进样 10μl,计算峰面积 RSD值 。
责任编辑　刘群燕　责任校对　李岩安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2011, 39(2):766-767
1.2.4.5　加样回收率试验。精密称取已知乌索酸和齐墩果
酸含量的土藿香根样品 6份 ,分高 、中 、低 3种浓度分别加入
乌索酸和齐墩果酸对照品适量 ,样品同时处理 ,制备土藿香
根样品溶液 ,进样分析 ,测定样品中乌索酸和齐墩果酸的含
量 ,计算加样回收率及 RSD值。
1.2.5　样品含量的测定。精密吸取土藿香根供试品溶液 10
μl,按 “1.2.1”色谱条件测定 ,计算乌苏酸和齐墩果酸含量。
2　结果与分析
2.1　方法学考察结果
2.1.1　检测波长的确定。乌索酸和齐墩果酸的紫外光谱吸
收特征基本一致 ,最大吸收波长均约为 203 nm。为了消除流
动相在短波长处的末端干扰 ,提高信噪比 ,选择 210 nm为检
测波长 [ 6] 。
2.1.2　线性关系。乌索酸线性回归方程为:y=668.790 0x
+0.619 6, r=0.999 6;齐墩果酸线性回归方程为:y=
566.73x+3.025 1, r=0.999 3。表明齐墩果酸进样量在
0.020 52 ～ 0.410 40μg,乌索酸进样量在 0.020 72～ 0.414 40
μg浓度范围内线性关系良好 [ 7] 。
2.1.3　精密度。计算得乌索酸峰面积 RSD值为 0.39% (n
=5),齐墩果酸峰面积 RSD值为 0.71%(n=5),表明该进样
方法和仪器系统精密度良好 。
2.1.4　稳定性。计算得乌索酸和齐墩果酸峰面积 RSD值分
别为 1.60%和 1.70%,说明土藿香根溶液在 12 h内的稳定
性较好 。
2.1.5　加样回收率。乌索酸和齐墩果酸的平均加样回收率
分别为 99.6%(RSD=3.12%)和 98.9%(RSD=1.99%)。
2.2　样品含量测定结果　测得土藿香根中乌索酸的含量为
0.138 mg/g,齐墩果酸的含量为 0.147 mg/g,样品和标准品
HPLC色谱图如图 1所示。
注:1.齐墩果酸;2.乌索酸。
Note:1.Oleanolicacid;2.Ursolicacid.
图 1　混合对照品(a)、样品(b)HPLC色谱图
Fig.1　HPLCchromatogramofmixedreferencesubstance(a)andtestsample(b)
3　结论与讨论
由于乌索酸和齐墩果酸均属三萜酸 ,且结构极为相似 ,
两者极性几乎无差别 ,因此在薄层板上很难将 2种成分分离
开 ,测定的结果为乌索酸和齐墩果酸的总含量 ,从而无法建
立薄层扫描法对其进行测定 [ 8] 。所以该试验采用 HPLC法。
对样品处理分别采用了超声提取法和水浴回流法进行
比较 ,在同样的提取时间下 ,超声处理法提取乌索酸和齐墩
果酸含量均高于回流法 ,因此 ,采用超声提取法。同时 ,对超
声提取时间进行了考察 ,超过 60 min后 ,两者的含量基本不
再变化 ,故该法采用 60 min。
该方法测得土藿香根中乌索酸和齐墩果酸含量分别为
0.138、0.147 mg/g。该方法精密度良好 、稳定性好 ,适合藿香
根中乌索酸和齐墩果酸含量的测定 。
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