全 文 ：HPLC 法测定陆英中乌索酸和齐墩果酸含量
邹盛勤 , 邓庭亭 , 杨利萍
(宜春学院 生物工程研究所 , 江西　宜春　336000)
摘　要:用 Symmetry C18 色谱柱 ,流动相甲醇-水(88∶12),检测波长 220 nm ,流速 0.6 mL/ min , 柱温
25 ℃,测定陆英药材中乌索酸和齐墩果酸含量。试验结果表明:峰面积 RSD(相对标准差值)均小
于 2.5%, 乌索酸和齐墩果酸平均回收率分别为 98.32%(RSD 为 2.12%)和 97.92%(RSD 为
1.69%)。本法可同时测定乌索酸和齐墩果酸含量 , 具有准确 、灵敏 、数据可靠的优点 , 可用于陆英
药材质量控制。
关键词:陆英;乌索酸;齐墩果酸
中图分类号:O657.7;S789.9　　　文献标识码:A　　　文章编号:1005-3433(2003)06-0012-03
　　陆英(Sambucus chinensis Lindl)为忍冬
科接骨木属植物 ,又名八棱麻 、接骨木 、八里
麻 ,多年生草本 ,产于我国南北各地 ,以根 、
茎 、叶入药 ,是我国民间常用草药 ,有活血 、散
淤 、止痛 、利尿 、消肿等作用[ 1] 。江西宜春应
用陆英及其制剂治疗肝炎取得了显著效果。
随后深入进行了药化 、药理的研究 ,证实陆英
中乌索酸的含量远远高于齐墩果酸的含量 ,
乌索酸是陆英抗肝炎的主要活性成分[ 2～ 3] ,
其含量测定方法未见报道 。为了控制陆英药
材质量 ,我们研究用 HPLC 法同时测定陆英
药材中乌索酸与齐墩果酸的含量。
1　仪器与试剂
1.1　仪器
Waters高效液相色谱仪:600 泵 , 2478
紫外可见光检测器 , 7725I 进样阀 , Millenni-
um32色谱管理系统 ,0.45 μm 微孔滤膜 。
1.2　试剂
甲醇为色谱纯 ,乙醇 、盐酸 、氢氧化钠为
分析纯 ,水为重蒸馏水 。乌索酸和齐墩果酸
对照品由中国药品生物制品检定所提供 ,陆
英药材于 2002年采自江西奉新 ,并经江西省
药物研究所张海道研究员鉴定为陆英。
2　方法与结果
2.1　对照品溶液的配制
精确称取乌索酸对照品 19.6 mg ,齐墩
果酸对照品 19.8 mg ,分别置于 10 mL 容量
瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,制成
含乌索酸 1.96 mg/mL 和齐墩果酸 1.98
mg/mL 的对照品混合溶液 ,备用 。
2.2　色谱条件
色谱柱为 Symmetry C18柱(3.9 mm×
150 mm ,美国Waters公司),流动相为甲醇-
水(88∶12),流速0.6 mL/min ,检测波长为 220
nm ,柱温 25 ℃。数据处理为外标法峰面积
定量[ 4] 。对照品 HPLC谱图见图 1 。
图 1　对照品的 HPLC谱图
1.齐墩果酸;2.乌索酸
2.3　线性关系试验
分别吸取乌索酸和齐墩果酸对照品混合
溶液 25 、50 、100 、200 、300 、400 、500 、600 μL
·12· 林产化工通讯　　2003年第 37卷第 6期
基金项目:国家“ 863”计划重点资助项目(2002AA2Z3217)
作者简介:邹盛勤(1970-),男 ,江西奉新人 ,大学本科 ,工程师 ,从事有机化工和生物医药研究。
至 10 mL 容量瓶中 ,用甲醇定容。各取溶液
20 μL 进样 ,按上述色谱条件测定峰面积。
以峰面积对样品浓度进行线性回归 ,得乌索
酸回归方程为:
Y =862756.9X -33841.7 , r=0.9991
齐墩果酸回归方程为:
Y =509468.6X -1499.2 , r=0.9996
表明当乌索酸进样量在 0.098 ～ 2.35
μg ,齐墩果酸进样量在 0.099 ～ 2.38 μg 之间
时 ,线性关系良好。
2.4　精密度试验
以同一对照品混合溶液进样 ,每次 20
μL ,重复进样 5次 ,分别测定峰面积数值 ,计
算得乌索酸峰面积 RSD(相对标准差值)为
1.3%,齐墩果酸峰面积 RSD为 0.9%。
2.5　样品测定
采用酸解乙醇回流法提取 。分别称取干
燥至恒重的陆英药材 2.0 g ,置于圆底烧瓶
中 ,加入 60 mL 95%乙醇及 2 mL 20%盐酸 ,
水浴加热回流提取2 h。过滤 ,滤液用饱和氢
氧化钠溶液调 pH 值为 5 ,定量转移至 100
mL 容量瓶中 ,乙醇定容。摇匀后取滤液 1
mL 于离心机(3 000 r/min)中离心 5 min ,取
上清液(用 0.45 μm 微孔滤膜过滤)测定 ,进
样量为 20 μL 。按上述色谱条件测定峰面
积 ,用外标法计算乌索酸和齐墩果酸含量。
HPLC谱图见图 2 ,不同采收期陆英药材中
乌索酸和齐墩果酸含量测定结果见表 1。
图 2　陆英样品的HPLC 谱图
1.齐墩果酸;2.乌索酸
表 1　不同采收期陆英中乌索酸
与齐墩果酸含量1)
药品采收
月份
乌索酸
含量(%)
RSD
(%)
齐墩果酸
含量(%)
RSD
(%)
1 0.276 0.35 0.029 1.32
3 0.297 0.82 0.034 0.92
5 0.345 1.76 0.041 2.30
7 0.326 2.10 0.038 1.76
9 0.246 1.39 0.026 2.13
11 0.262 0.68 0.031 1.42
　　1)n=3
2.6　重现性试验
精密称取干燥至恒重的同一批陆英样品
5份(每份 2.0 g),样品用酸解乙醇回流法提
取 ,提取液经处理后进样 , 进样量为 20 μL ,
测定峰面积 , 计算得乌索酸峰面积 RSD 为
1.8%,齐墩果酸峰面积 RSD为 2.1%。
2.7　回收率测定
采用加样回收法测定 。精密称取已知乌
索酸与齐墩果酸含量的陆英 6 份 , 每份
2.0 g ,其中 3份加入乌索酸 、齐墩果酸对照
品各 1.0 mg 。样品用酸解乙醇回流法提取 ,
提取液经处理后进样 ,进样量为 20 μL ,测定
峰面积 ,用外标法计算乌索酸与齐墩果酸含
量 ,得乌索酸的平均回收率为 98.32%, RSD
为 2.12%;齐墩 果酸的 平均 回收 率为
97.92%, RSD为 1.69%。
3　讨论
3.1　由于乌索酸和齐墩果酸均属三萜酸 ,且
为同分异构体 ,两者极性几乎无差别 ,因此在
薄层板上很难将两种成分分离开 ,从而难于
用薄层扫描法对其进行准确测定。而这两种
成分在天然植物中往往同时共存 ,因此用
HPLC 法对其进行含量测定具有重要意义 。
但由于波长在 220 nm 处溶剂甲醇也有强吸
收 ,故测定前必须消除背景[ 5] 。
3.2　从表 1可知 , 5 、7月份采收的陆英药材
中乌索酸和齐墩果酸含量较高 ,与其它月份
采收的样品有较大差别。因此 ,陆英药材在
5 ～ 7月份采收为好。测定结果表明 ,陆英中
·13·林产化工通讯　　2003年第 37卷第 6期
乌索酸含量远远高于齐墩果酸含量 ,从而也证
实乌索酸是陆英中抗肝炎的主要活性成分。
3.3　采用 HPLC 法测定陆英药材中乌索酸
与齐墩果酸的含量 ,方法简便 ,准确灵敏 ,为
控制陆英药材质量提供了参考依据 。
参考文献:
[ 1] 江苏新医学院.中药大词典[ M ] .上海:上海人民出版
社 , 1977.
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2001 , 13(1):1-3.
[ 3] 陈 武,李开泉 ,熊筱娟 ,等.陆英抗肝炎活性成分的研
究[ J] .南昌大学学报 , 2001 , 25(2):165-167.
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酸的含量[ J] .中国实验方剂学杂志 , 1998, 4(6):1-2.
[ 5] 袁 珂 ,李根林 ,李俊芝 ,等.车前草中熊果酸 、齐墩果酸
的 HPLC测定[ J] .中草药 , 1999 , 30(12):901-903.
HPLC DETERMINATION OF URSOLIC ACID AND OLEANOLIC
ACID IN SAMBUCUS CHINENS IS LINDL
ZOU Sheng-qin , DENG Ting-ting , YANG Li-ping
(The Inst itute of Biology , Y ichun Universi ty , Y ichun　336000 ,China)
Abstract:To develop a new method for determination of urso lic acid and oleanolic acid in Sambucus chinensis Lindl ,
HPLC w as car ried out on a Symmetry C18 column using MeOH-H2O(88∶12), with detection at 220 nm , flow rate 0.
6 mL/ min and column temperature 25 ℃.RSD were all less than 2.5%.The average recoveries of ursolic acid and
oleanolic acid were 98.32%±2.12% and 97.92%±1.69%, respectively.The contents of urso lic acid and oleanolic
acid w ere simultaneously determined by HPLC.The me thod is accurate , sensitive and reliable to be used for quality
control to medicinal materials of Sambucus chinensis Lindl.
Key words:Sambucus chinensis Lindl;ursolic acid;oleanolic acid
(收稿日期:2003-09-22)
○市场信息○
我国糠醛 、糠醇进出口统计
表 1　近年我国糠醛 、糠醇出口平均价格
年份 糠醛(美元/ t) 糠醇(美元/ t)
1995 1241 1661
1996 1236 1636
1997 803 1156
1998 750 1079
1999 590 873
2000 513 772
2001 634 838
2002 489 663
2003.1～ 5 448 618
表 2　近年美国进口我国糠醛 、糠醇情况　t
年份 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002
糖醛 120 6358 10453 19822 13257 24232 2898 1456
糠醇 211 364 348 783 131 293
表 3　近年欧盟 5国进口我国糠醛 、糠醇情况
t
年份 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002
糠醛 464 4591 3794 12316 6363 4370 3159 7010
糠醇 2816 1826 2262 4301 7198 5738 9640 7008
表 4　近年泰国进口我国糠醛 、糠醇情况
t
年份 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002
糠醛 1346 5788 7116 8657 6064 7974 5852 8100
糠醇 1798 18 211 19 38 314
(马莎摘自《中国化工信息》2003.No33)
·14· 林产化工通讯　　2003年第 37卷第 6期