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大白口蘑菌丝的培养优化



全 文 :Mycosystema
菌 物 学 报 15 January 2011, 30(1): 142-146

jwxt@im.ac.cn
ISSN1672-6472 CN11-5180Q
©2011 Institute of Microbiology, CAS, all rights reserved.






基金项目:教育部科学技术研究重点项目(No. 209118);云南省自然科学基金(No. 2008CD128)
*Corresponding author. E-mail: honggaoliu@126.com
收稿日期: 2010-08-24, 接受日期: 2010-10-28

大白口蘑菌丝的培养优化
刘鸿高 1* 王元忠 2 张东艳 1 刘鲁峰 1
1云南农业大学农学与生物技术学院 昆明 650201
2云南省农业科学院药用植物研究所 昆明 650223



摘 要:从大白口蘑子实体中分离得到菌种,并进行不同营养条件对大白口蘑菌丝生长的影响实验。结果表明,最佳氮
源为酵母粉;最佳碳源为果糖;能明显促进菌丝生长的矿质元素为磷酸二氢钾;最佳生长调节因子为吲哚乙酸;最适温
度为 28-32℃;最适 pH4.0-5.0。
关键词:大白口蘑,菌丝培养,营养基质,生长条件

Mycelium cultivation optimization of Tricholoma giganteum
LIU Hong-Gao1* WANG Yuan-Zhong2 ZHANG Dong-Yan1 LIU Lu-Feng1
1College of Agronomy and Biotechnology, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201, China
2Institute of Medicinal Plant, Yunnan Academy of Agricultural Sciences, Kunming 650223, China
Abstract: Different nutritions for growth of Tricholoma giganteum mycelium were studied. The results showed that fructose was the
best carbon source, and the best nitrogen source was yeast powder; the mineral element which can accelerated the growth of the
mycelium was potassium dihydrogen phosphate; the growth adjustment factor was indole-3-acetic acid; the optimum temperature
was 28-32℃; and the optimum pH was 4.0-5.0.
Key words: Tricholoma giganteum, mycelium cultivation, nutrient medium, growth condition


大白口蘑 Tricholoma giganteum Massee 的同物
异名为洛巴伊口蘑 Tricholoma lobayense R. Heim 和
巨大口蘑 Tricholoma spectabile Peerally & Sutra;商
品名为仁王占地、长柄口蘑、白色松茸、洛巴口蘑、
五月鸡 等,隶属于担子菌门、伞菌纲、伞菌目、
口蘑科、口蘑属(Chang & Mao 1995),分布于我
DOI:10.13346/j.mycosystema.2011.01.019
Vol.30 No.1 143
菌物学报
国云南、福建、香港、台湾、湖南、广州等地。云
南普洱相继发现巨型大白口蘑,最大丛重为 45kg
(张振富等 2005),在自然界中实属罕见。印度
(Ganeshan 1991)、非洲(Chang & Mao 1995)、日
本(Kazunari et al. 1995)、韩国(Kim et al. 1998)
等国也有分布。该菌子实体丛生,个体肥大,外形美
观,质地致密,细胞分生缓慢,不易开伞,口感细腻,
脆而鲜甜,清香浓郁,盖柄口感一致,又不易生虫或
腐烂,耐贮运性好,适宜鲜销和加工。在 5-8℃条件
下,保存期可达 30d 不变色、不变味,表现出优良的
产品性状(王元忠等 2004)。
大白口蘑是腐生菌,在生长与代谢过程中需从
外界环境吸取营养物质,并经生理生化反应形成新
的细胞物质和代谢产物,同时排放出副产物及其
他废物。培养基是按一定比例配制的多种营养物
质的混合物,提供微生物细胞生长、繁殖、代谢
和生物合成各种代谢产物等。不同培养基对菌丝体
的生长繁殖、产物的生物合成等都有重要影响。本
文对大白口蘑菌丝体最适碳源、氮源、生长调节因
子、矿质元素、温度和 pH 值进行研究,为今后降
低生产成本、提高制种和栽培的经济效益提供理论
依据。
1 材料与方法
1.1 供试菌株
供试菌株从云南普洱南屏镇整碗村慈竹丛中
地上采集到的丛重 45kg 野生大白口蘑子实体中分
离得到。
1.2 碳源选择实验
选取菌丝长势基本一致的斜面母种,分别接种
于添加果糖、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、玉米粉、
可溶性淀粉等 6 种 PDA 培养基斜面上(添加的质
量分数各为 1%),同时接种于普通 PDA 培养基上
作对照,30℃下培养,各处理重复 12 次。观测菌
丝生长量(菌落半径增长度)和菌丝生长势,计
算菌丝日均生长速度[菌丝生长速度=菌落半径增
长度(mm)÷培养天数(d)],并进行差异显著性
分析。
1.3 氮源选择实验
选取菌丝长势基本一致的斜面母种,分别接种
于添加酵母粉、氯化铵、硫酸铵、硝酸钾、蛋白胨、
尿素等 6 种 PDA 培养基斜面上(添加的质量分数
各为 0.5%),并配以普通 PDA 培养基作对照,30℃
下培养,各处理重复 12 次。观测菌丝生长量(菌
落半径增长度)和菌丝生长势,计算菌丝日均生长
速度[菌丝生长速度=菌落半径增长度(mm)÷培
养天数(d)],并进行差异显著性分析。
1.4 生长调节因子选择实验
选取菌丝长势基本一致的斜面母种,分别接种
于添加赤霉素、奈乙酸、吲哚乙酸、三十烷醇、合
维生素、复维生素 B1 等 6 种 PDA 培养基斜面上(添
加的质量浓度分别为 5mg/L),同时以普通 PDA 培
养基作对照,30℃下培养,各处理重复 12 次。观
测菌丝生长量(菌落半径增长度)和菌丝生长势,
计算菌丝日均生长速度,并进行差异显著性分析。
1.5 矿质元素影响实验
选取菌丝长势基本一致的斜面母种,分别接种
于添加硝酸钠、硫酸铵、硫酸镁、磷酸二氢钾、硫
酸铜等 5 种 PDA 培养基斜面上(添加的质量分数
各为 0.05%),同时以普通 PDA 培养基作对照,30℃
下培养,各处理重复 12 次。观测菌丝生长量(菌
落半径增长度)和菌丝生长势,计算菌丝日均生长
速度,并进行差异显著性分析。
1.6 温度选择实验
选取菌丝长势基本一致的斜面母种,接种于
PDA 培养基斜面上,分别在 16℃、20℃、24℃、
28℃、32℃、36℃、40℃下培养,各处理重复 12
次。观测菌丝生长量(菌落半径增长度)和菌丝生
长势,计算菌丝日均生长速度,并进行差异显著性
分析。
1.7 pH 值选择实验
选取菌丝长势基本一致的斜面母种,接种于
PDA 培养基斜面上,在 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0
6 个培养基 pH 值梯度下培养,各处理重复 12 次。
观测菌丝生长量(菌落半径增长度)和菌丝生长势,
计算菌丝日均生长速度,并进行差异显著性分析。
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2 结果与分析
2.1 不同碳源对菌丝生长的影响
菌丝在添加糖与对照培养基中均能生长,菌丝
生长势以果糖和葡萄糖培养基最佳,麦芽糖、玉米
粉和可溶性淀粉培养基较好,蔗糖和对照培养基最
差(表 1)。不同碳源培养基的菌丝生长速度顺序依
次为果糖>葡萄糖>麦芽糖>蔗糖>玉米粉>可
溶性淀粉>对照。麦芽糖培养基和葡萄糖培养基之
间以及玉米粉培养基与可溶性淀粉培养基之间菌
丝生长速度无显著差异,但果糖、麦芽糖和葡萄糖
培养基与蔗糖、玉米粉、可溶性淀粉和对照培养基
之间差异显著。果糖培养基的菌丝生长速度最快
(3.82mm/d),生长势最佳,对照培养基的菌丝生
长速度最慢(2.63mm/d)。
表 1 不同碳源对菌丝生长的影响
Table 1 Effect of different carbon source on mycelium growth
碳源
Carbon source
菌丝生长势
Mycelial growth
vigor
菌丝生长速度
Mycelial growth
rate (mm/d)
LSD0.05 LSD0.01
果糖 Fructose + + + 3.82 a A
葡萄糖 Glucose + + + 3.66 b B
麦芽糖 Maltose + + 3.62 b B
玉米粉 Corn
powder
+ + 3.11 d D
可溶性淀粉
Soluble starch
+ + 3.04 d D
蔗糖 Sucrose + 3.41 c C
对照 Control + 2.63 c C
注:+表示生长稀疏,+ +表示生长较致密,+ + +表示生长致密. 同列中
不同小写字母表示在 5%水平差异显著,不同大写字母表示在 1%水平差
异显著. 下同.
Note: + mean the mycelia grew weakly, + + mean the mycelia grew
ordinarily, + + + mean the mycelia grew vigorously. Different small letters
in the same column mean significant at 5% level, the capital letters mean
significant at 1% level. The same below.
2.2 不同氮源对菌丝生长的影响
不同氮源均对菌丝生长有影响,菌丝生长势以
酵母粉和蛋白胨培养基最佳,氯化铵和硫酸铵培养
基较好,硝酸钾和对照培养基最差,含尿素的培养
基中菌丝没有生长。不同氮源培养基的菌丝生长速
度顺序依次为酵母粉>硫酸铵>硝酸钾>氯化铵
>蛋白胨>对照。硫酸铵、硝酸钾、氯化铵 3 种培
养基之间菌丝生长速度无显著差异,其余培养基之
间菌丝生长速度差异显著或极显著。以酵母粉为氮
源的培养基上菌丝生长速度最快(5.57mm/d),生
长势最佳(表 2)。
表 2 不同氮源对菌丝生长的影响
Table 2 Effect of different nitrogen source on mycelium growth
氮源
Nitrogen source
菌丝生长势
Mycelial
growth vigor
菌丝生长速度
Mycelial
growth rate
(mm/d)
LSD0.05 LSD0.01
酵母粉 Yeast powder + + + 5.57 a A
蛋白胨 Peptone + + + 4.76 c C
氯化铵 NH4Cl + + 5.32 b BC
硫酸铵(NH4)2SO4 + + 5.01 b B
硝酸钾 KNO3 + 4.94 b B
尿素 Carbamide - 0.00 d D
对照 Control + 3.80 c C
注:-表示无生长. 下同.
Note: -, mycelia did not grow (the same below).
2.3 不同生长调节因子对菌丝生长的影响
不同生长调节因子的培养基和对照培养基中
菌丝均能生长,菌丝生长势以吲哚乙酸和复合维生
素培养基为最佳,赤霉素和奈乙酸培养基次之,三
十烷醇、维生素 B1 及对照培养基最差。不同生长
调节因子的培养基中菌丝生长速度顺序依次为吲
哚乙酸>复合维生素>赤霉素>奈乙酸>三十烷
醇>维生素>对照。赤霉素、奈乙酸和复合维生素
3 种培养基之间菌丝生长速度无显著差异,其余培
养基之间菌丝生长速度差异显著或极显著。以吲哚
乙酸为生长调节因子的培养基上菌丝生长速度最
快(2.19mm/d),生长势最佳(表 3)。
2.4 不同矿质元素对菌丝生长的影响
添加不同矿质元素和对照培养基中菌丝均能
生长,生长势不明显,相互之间菌丝生长速度无显
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菌物学报
著差异。以磷酸二氢钾为矿质元素的培养基上菌丝
表 3 不同生长调节因子对菌丝生长的影响
Table 3 Effect of different growth adjustment factor on mycelium growth
生长调节因子
Growth factor
菌丝生长势
Mycelial growth vigor
菌丝生长速度
Mycelial growth rate (mm/d)
LSD0.05 LSD0.01
吲哚乙酸 Indoleacetic acid + + + 2.19 a A
复合维生素 Multivitamin + + + 1.76 b B
赤霉素 Gibberellin + + 1.51 b B
奈乙酸 1-naphthaleneacetic acid + + 1.31 b B
三十烷醇 Triacontanol + 1.24 c C
维生素 B1 Vitamin B1 + 0.91 d D
对照 Control + 0.83 d D

生长速度最快(1.23mm/d),其次为硫酸铵,硝酸
钠、硫酸镁及硫酸铜培养基均比对照培养基中的菌
丝生长缓慢,表现出不同程度的抑制作用(表 4)。
表 4 不同矿质元素对菌丝生长的影响
Table 4 Effect of different mineral elements on mycelium growth
矿质元素
Mineral
element
菌丝生长势
Mycelial
growth vigor
菌丝生长速度
Mycelial growth
rate (mm/d)
LSD0.05 LSD0.01
磷酸二氢钾
KH2PO4
+ 1.23 b B
硫酸铵
(NH4)2SO4
+ 1.20 b B
硫酸镁 MgSO4 + 1.11 b B
硝酸钠 NaNO3 + 1.03 b B
硫酸铜 CuSO4 + 1.07 b B
对照 Control + 1.18 b B
2.5 不同温度对菌丝生长的影响
菌丝生长速度在 28 - 32℃最快( 3.33 -
3.84mm/d),生长势最佳;在 28℃与 32℃、24℃与
36℃、16℃与 40℃之间,菌丝生长速度差异不显
著;其余温度之间菌丝生长速度显著或极显著差异
(表 5)。
2.6 不同 pH 对菌丝生长的影响
不同 pH 对菌丝的生长影响较大。菌丝在
pH2.0-7.0 范围内均能生长,各处理间菌丝生长速
度差异极显著,最适 pH 为 4.0-5.0,菌丝生长速
度为 3.31-3.64mm/d,且生长势较好(表 6)。
表 5 不同温度对菌丝生长的影响
Table 5 Effect of different temperature on mycelium growth
温度
Temperature
(℃)
菌丝生长势
Mycelial
growth vigor
菌丝生长速度
Mycelial growth
rate (mm/d)
LSD0.05 LSD0.01
28 + + + 3.84 a A
32 + + + 3.33 a A
24 + + 2.97 b B
36 + 2.56 b B
20 + 1.24 c C
16 + 0.61 d D
40 + 0.28 d D
表 6 不同 pH 值对菌丝生长的影响
Table 6 Effect of different pH value on mycelium growth
pH
菌丝生长势
Mycelial growth
vigor
菌丝生长速度
Mycelial growth rate
(mm/d)
LSD0.05 LSD0.01
5.0 + + + 3.64 a A
4.0 + + + 3.31 b B
6.0 + + 3.15 c C
3.0 + 2.92 d D
7.0 + 2.40 e E
2.0 + 1.43 f F
3 讨论
试验结果表明,果糖和酵母粉分别是大白口蘑
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菌丝生长最佳的碳源和氮源,在配制母种培养基或
液体培养基时,使用这两种营养源可获得较多的菌
丝量,从而有效地缩短制种周期。能明显促进菌丝
生长的矿质元素为磷酸二氢钾;最佳生长调节因子
为吲哚乙酸;最适温度为 28-32℃;最适 pH4.0-
5.0,最适培养基含水量为 60%-65%。在这种条件
下菌丝生长速度快,生长势强,可有效地缩短菌种
或菌包的培养周期,从而降低生产成本,提高制种
或栽培的经济效益。
由此可见,大白口蘑菌丝的适宜培养基配方(质
量分数)为:果糖 1%,酵母粉 0.5%,土豆 20%,
磷酸二氢钾 0.05%以及 5mg/L 的吲哚乙酸等,培养温
度为 28-32℃,培养基的初始 pH 值为 pH4.0-5.0。
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[附中文参考文献]
王元忠,张振富,陈兴全,何永宏,袁赛华,2004. 云南珍稀野生菌长
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张振富,王元忠,张锐,陈兴全,何永宏,2005. 云南野生菌坛中发现
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