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茅莓果红色素的提取及其稳定性分析



全 文 :茅莓果红色素的提取及其稳定性分析
苏雪惠,吴雁珠,黄俊生*
(韩山师范学院 化学系,广东 潮州 521041)
摘要:以茅莓果为原料提取茅莓果红色素,并对茅莓果红色素的稳定性进行研究。结果表明,色素最佳
提取工艺为:提取剂1.5%盐酸乙醇(V/V),浸提温度为70℃,时间为6h,料液比为1∶700。稳定性研
究表明,该色素对热和还原剂的稳定性较好。日光对色素的影响较大,所以在储存过程中应避免阳光直
射。常用的食品添加剂如糖类,苯甲酸钠,柠檬酸,山梨酸钾,木糖醇,甜蜜素,糖精对色素的光泽无大的
不良影响,其中抗坏血酸对色素的影响相对较大,因此其用量不宜过多;金属离子中Fe3+,Cu2+对色素
影响较大,其他如Zn2+,K+,Ca2+,Mg2+,Na+,Al 3+对色素无不良影响。该色素耐酸碱性良好,在pH
≤8时,显示稳定的红色;在pH>8时,显示稳定的淡黄色。
关键词:茅莓果;色素;提取;稳定性
中图分类号:TS202.3   文献标识码:B   文章编号:1000-9973(2012)01-0097-07
The research of the extraction and the stability
of Rubus parvifolius red pigment
SU Xue-hui,WU Yan-zhu,HUANG Jun-sheng*
(Department of Chemistry,Hanshan Normal University,Chaozhou 521041,China)
Abstract:Rubus parvifolius red pigment is a kind of natural edible pigment extracted from Rubus parv-
ifolius berries.This article researched on the stability of the red pigment.,which shows the best ex-
traction technology is 1.5%hydrochloric acid-ethanol,70℃,6hours and the ratio of raw materials 1
∶700.Stability research shows that the red pigment has fine heat stability and reducibility stability.
Sunlight has a great impact on the pigment,so in the process of storage it should be avoided direct
sunlight.Common food additives,including sugar and sodium benzoate,citric acid,potassium sor-
bate,xylitol,cyclamate and saccharin,have little negative effect on the red pigment.However,be-
cause ascorbic acid has a slight impact on it,this food additive shouldn’t be used too much.Fe3+,
Cu2+ have greater influence on the red pigment than others including Zn2+,K+,Ca2+,Mg2+,Na+,
Al 3+etc.In the test of acid and alkali tolerance,the pigment shows strong acid resistance and alkali
resistance intolerance.When pH value is not more than 8,the pigment showed stable red;On the con-
trary,it showed stable light yelow.
Key words:Rubus parvifolius;pigment;extraction;stability
  茅莓属蔷薇科植物,其果实营养相当丰富,是一种 纯天然绿色食品。近年来,随着各种合成色素相继被
收稿日期:2011-11-20        *通讯作者
基金项目:韩山师范学院化学系学士前项目资助(2011)
作者简介:苏雪惠 (1989-),女,广东潮安人,主要从事中学化学教育研究与食品分析;
黄俊生(1982-),男,广东陆丰人,硕士,实验师。
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2012年第1期
总第37卷
               中 国 调 味 品
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限制在食品中使用,人们纷纷把眼光投向色泽艳丽、柔
和、自然,特别是安全性能高,并且具有一定的营养价
值和生理保健功能的天然色素。近年大部分关于茅莓
的研究多数为关于其根茎的研究[1,2],往往忽视了茅
莓果其中所含的大量红色素,本文研究了该红色素提
取及其稳定性分析等,为投入工业化生产提供了一定
的前期工作。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
茅莓果(摘自当地野生茅莓)、无水乙醇、石油醚、
丙酮、乙酸乙醚、三氯甲烷、氢氧化钠、盐酸、硫酸锌、氯
化钾、氯化钙、氯化镁、氯化钠、氯化铁、硫酸铜、氯化
铝、30%过氧化氢、无水亚硫酸钠、葡萄糖、蔗糖、柠檬
酸、苯甲酸钠、VC、山梨酸钾、木糖醇、甜蜜素,糖精钠
等均为分析纯试剂或食品添加剂。
1.2 仪器与设备
LGJ-10冷冻干燥机 军事医学科学院实验仪器
厂研制;TU-1900型双束光紫外可见分光光度计 北
京普析通用仪器有限公司;722SP型可见分光光度计
 上海棱光技术有限公司。
1.3 方法[3,4]
1.3.1 材料预处理
茅莓果洗净,晾干,冷冻干燥后粉碎,过40目筛,
密封避光保存。
1.3.2 色素的提取工艺
1.3.2.1 色素提取工艺流程[5]
样品洗净→晾干→冷冻干燥→粉碎(过筛)→浸提
→旋转蒸发→色素膏。
1.3.2.2 最佳提取剂的选取
称取0.04g茅莓果粉末9份,分别置于10mL蒸
馏水、70%乙醇、无水乙醇(分析纯)、石油醚、丙酮、乙
酸乙酯、三氯甲烷、1%盐酸乙醇(V/V)和1%氢氧化
钠乙醇中,室温下浸提3h,过滤,定容,分别测定其在
190~800nm的吸收光谱。
1.3.2.3 最佳提取剂浓度的选择
称取0.04g茅莓果粉末4份,分别加入10mL
0.5%,1.0%,1.5%,2.0%盐酸乙醇溶液中,浸泡3h
后,过滤,定容,分别测定波长为538nm处的吸光度。
1.3.2.4 最佳提取时间的选择
称取0.04g茅莓果粉末7份,各加入10mL
1.5%盐酸乙醇溶液,在室温下分别浸提1,2,3,4,5,
6,12h后,过滤,定容,并分别测定波长538nm处的吸
光度。
1.3.2.5 最佳提取温度的选择
称取0.04g茅莓果粉末6份,各加入相同体积
1.5%盐酸乙醇溶液10mL,分别在室温,40,50,60,
70,80,90℃时浸提6h后,过滤,定容,并分别测定波
长为538nm处的吸光度。
1.3.2.6 最佳料液比的选择
称取0.03g茅莓果粉末5份,分别加入1.5%盐
酸乙醇12,15,18,21,24mL,室温下浸提6h后,过
滤,定容,并分别测定波长为538nm处的吸光度。
1.3.2.7 茅莓果红色素吸收光谱分析
准确称取0.03g茅莓果粉末,用1.5%盐酸乙醇
21mL,在70℃下恒温水浴,浸泡6h后,过滤,定容。
在波长为190~800nm范围内测定其吸收光谱图。
1.3.3 茅莓果红色素的稳定性[6-10]
采用最佳提取工艺提取色素,旋转蒸发得到红色素
膏,用无水乙醇封存,并将该上层乙醇饱和溶液当做色
素原液。红色素稀释液的制备方法为:量取1mL原液
并用1.5%盐酸乙醇稀释至1000mL作为稀释液。
1.3.3.1 光照对色素稳定性的影响
可见光对色素稳定性的影响:取相同体积,相同浓
度的茅莓果红色素稀释液,置于太阳光下0,10,20,
30min,1,2,3,4,5h,考察日光对色素溶液的颜色及
吸收光谱的影响,同时考察在最大吸收波长538nm
处,日光、灯光和室内光对色素吸光度的影响。
紫外光对色素稳定性的影响:取相同体积,相同浓
度的茅莓果红色素稀释液,分别在紫外光254,365nm
处照射0,5,10,20,40,60min,观察各溶液的颜色变
化,并测定其在最大吸收波长538nm处的吸光度。
1.3.3.2 温度对色素稳定性的影响
取相同体积,相同浓度的茅莓果红色素稀释液,分
别置于室温,40,50,60,80,70,90℃的恒温水浴锅中
1h,观察各溶液的颜色变化,等溶液温度恢复到室温
后定容,测定其在2000~800nm范围内的吸收光谱
图,并测定其在波长538nm处的吸光度。
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1.3.3.3 pH值对色素稳定性的影响
取相同体积,相同浓度的茅莓果红色素稀释液,用
0.1mol/L NaOH和0.1mol/L HCl调色素的pH为
2,4,6,8,10,12,静置0.5h,观察其颜色变化,并测定
各溶液在190~800nm范围内的吸收光谱图和波长
538nm处的吸光度。
1.3.3.4 氧化还原剂对色素稳定性的影响
氧化剂对色素的影响:取相同体积,相同浓度的茅
莓果红色素稀释液,分别加入5mL 不同浓度0,
0.01%,0.02%,0.03%,0.04%和0.05%的过氧化
氢,常温下静置1.5h,观察各溶液的颜色变化,并测
定其在200~800nm范围内的吸收光谱图。
还原剂对色素的影响:取相同体积,相同浓度的茅
莓果红色素稀释液,分别加入5mL 不同浓度0,
0.01%,0.02%,0.03%,0.04%和0.05%的无水亚硫
酸钠,常温下静置1.5h,观察各溶液的颜色变化,并
测定其在200~800nm范围内的吸收光谱图。
1.3.3.5 金属离子对色素稳定性的影响
取相同体积,相同浓度的茅莓果红色素稀释液,分
别加入5mL 2×10-5,10×10-5,50×10-5 mol/L的
各种金属离子,常温下静置22h,观察各溶液颜色的
变化,测定其在波长538nm处的吸光度。
1.3.3.6 食品添加剂对色素稳定性的影响
葡萄糖与蔗糖对色素的影响:取相同体积,相同浓
度的茅莓果红色素稀释液,分别加入5mL浓度为0,
1%,5%,10%,20%的葡萄糖、蔗糖溶液,常温下静置
24h,观察各溶液颜色的变化,测定各溶液在波长
538nm处的吸光度。
其他食品添加剂对色素的影响:取相同体积,相同浓
度的茅莓果红色素稀释液,分别加入5mL浓度为0,
0.01%,0.05%,0.1%的山梨酸钾、苯甲酸钠、抗坏血酸、
木糖醇、甜蜜素,糖精和柠檬酸中,常温下静置22h,观察
各溶液颜色的变化,测定其在波长538nm处的吸光度。
2 结果与分析
2.1 色素提取最佳工艺参数的确定
2.1.1 不同提取溶剂对茅莓果红色素的影响
  采用不同溶剂提取的茅莓果红色素溶液的吸收光
谱见图1,提取效果见表1。
图1 茅莓果红色素在不同溶剂中的吸收光谱
Fig.1Absorption spectra of pigment in different solvents
表1 茅莓果在不同溶剂中的提取效果
Table 1Extracted impression of solution colour in different solvents
溶剂 蒸馏水
乙酸
乙酯
无水
乙醇
石油

氯仿 丙酮
70%
乙醇
1%盐酸
乙醇
1%氢氧
化钠乙醇
溶解性 微溶 微溶 微溶 不溶 微溶 微溶 微溶 易溶 微溶
颜色 淡红色 淡红色 黄色 无色 黄色 淡黄色 淡黄色 橙红色 黄绿色
  由分析结果可知,色素易溶于1.5%盐酸乙醇,微
溶于蒸馏水、乙酸乙酯、无水乙醇、70%乙醇、三氯甲
烷、1%NaOH乙醇和丙酮,而难溶于石油醚中。该色
素的最佳提取剂是1.5%盐酸乙醇,其在可见光区的
最大吸收波长为538nm,茅莓果红色素为橙红色,色
泽鲜艳。
2.1.2 提取剂浓度对茅莓果红色素的影响
不同浓度的盐酸乙醇对色素的提取效果见图2。
图2 不同浓度提取剂的吸光度
Fig.2Absorbencies of pigment in different volume ratios
of hydrochloric acid to ethanol solution
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由图2可见,随着浓度的提高其吸光度有所上升,
但酸度太高会影响色素的溶解性,故选择1.5%盐酸
乙醇作为最佳提取剂。
2.1.3 提取时间对茅莓果红色素的影响
不同时间的提取效果见图3。
图3 不同浸取时间的吸光度
Fig.3Absorbencies of Rubus parvifolius in different extraction time
由图3可见,随着浸取时间的延长,茅莓果红色素
的吸光度呈上升趋势,但在6h后,吸光度反而下降,
故选择6h为最佳提取时间。
2.1.4 提取温度对茅莓果红色素的影响
不同温度对提取效果影响见图4。
图4 不同浸取温度的吸光度
Fig.4Absorbencies of Rubus parvifolius in diferent temperatures
由图4可见,随着浸取温度的上升,提取到的色素
溶液的吸光度逐渐上升,但80℃过后,吸光度变化下
降,而且实验中色素的颜色随着温度的上升发生明显
的变化,90℃时色素颜色已明显反常,可看出该色素
难耐高温。故选择70℃为最佳提取温度。
2.1.5 料液比对提取茅莓果红色素的影响
不同料液比提取效果见图5。
图5 不同物料比的吸光度
Fig.5Absorbencies of Rubus parvifolius in different
ratios of solid to solvent
从图5可见,随着料液比浓度的下降,吸光度呈上
升趋势,但在料液比为1∶800时吸光度反而下降,因
此选择最佳料液比为1∶700。
2.1.6 茅莓果红色素的吸收光谱分析
通过上面的实验后选取最佳提取工艺提取茅莓果
红色素,并测定该色素在190~800nm范围内的吸收
光谱,见图6。
图6 茅莓果红色素的吸收光谱
Fig.6Absorption spectrogram of Rubus parvifolius
由图6可以见,该色素的可见光部分最大吸收峰
在538nm 处,故确定538nm 为该色素的特征吸
收峰。
2.2 茅莓果红色素的稳定性
2.2.1 色素对光的稳定性
2.2.1.1 可见光对色素的影响
不同日光照射时间对茅莓果红色素吸收光谱的影
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响见图7。
图7 不同日照时间对色素稳定性的影响
Fig.7Effects of different time sunlight on
stability of Rubus parvifolius
由图7可见,随着时间的延长,吸光度逐渐下降,
光照时间为20min最大吸收峰已明显移位甚至消失,
说明光照对色素的稳定性有较大影响,色素的耐光性
较差,且色素的颜色由橙红色变为淡黄色,甚至无色,
色素在不同光照下在波长538nm处的吸光度,结果
见表2。
表2 不同光种照射下吸光度的比较
Table 2Comparison among absorbencies at different time
of different sunlight sources
538nm
光种类
时间(h)
0  1/6  1/3  1/2  1  2  3  4  5
室内光 0.340 0.336 0.340 0.342 0.338 0.337 0.335 0.334 0.331
太阳光 0.340 0.325 0.318 0.292 0.259 0.233 0.151 0.112 0.062
灯光 0.340 0.334 0.338 0.339 0.333 0.329 0.325 0.315 0.308
  由表2可见,随着太阳光照射时间的延长,色素的
吸光度逐渐下降,表明日光对该色素有较大的影响;随
着室内光和灯光照射时间的延长,色素的吸光度逐渐
下降,但总体上变化不大,说明室内光和灯光对色素的
影响较小。
2.2.1.2 紫外光对色素稳定性的影响
紫外光对色素溶液吸收值的影响结果见图8。
由图8可见,随着紫外灯照射时间的延长,两种不
同波长的紫外灯照射对色素的吸光度影响呈上升趋
势,其中波长为254nm的紫外灯照射的吸光度上升
的幅度较大,而波长为365nm的紫外灯照射的吸光
度上升的幅度不大,但总体上紫外灯对色素影响较小。
图8 紫外光对色素稳定性的影响
Fig.8Effect of UV light on stability of pigment
2.2.2 耐热性
温度对茅莓果红色素吸收光谱的影响见图9。
图9 不同温度对色素稳定性的影响
Fig.9Effect of different temperatures on stability of pigment
由图9可见,与实验结合分析得到,温度上升对色
素吸收光谱影响较小,说明该色素具有较好的耐热性。
2.2.3 耐酸碱性
pH值对茅莓果红色素溶液吸收光谱和色素颜色
的影响见图10和表3。
从中可以分析得到,当pH 值为2,4,6,8时色素
的颜色无变化,且吸光度变化幅度非常小。当pH 值
等于10,12时,色素的颜色有明显的变化,最大吸收波
长发生位移,但颜色持久,说明该色素耐酸碱性良好,
在pH≤8时,显红色;在pH>8时,显示稳定的淡黄
色。
2.2.4 色素的耐氧化还原性
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图10 pH值对色素稳定性的影响
Fig.10Effect of pH value on stability of pigment
表3 不同pH值条件下色素提取液吸光度的比较
Table 3Comparison among absorbencies at different pH
pH  2  4  6  8  10  12
A(538nm) 0.225  0.176  0.183  0.186  0.161  0.166
颜色变化 淡红色 淡红色 淡红色 淡红色 淡黄色 淡黄色
2.2.4.1 耐氧化性
不同浓度过氧化氢对吸收光谱图与褪色速度的影
响结果见图11和表4。
图11 不同浓度过氧化氢对色素稳定性的影响
Fig.11Effects of different concentrations of hydrogen peroxide
on stability of Rubus parvifolius.
表4 不同浓度过氧化氢提取液吸光度
Table 4Comparison among absorbencies at different
concentrations of hydrogen peroxide
过氧化氢浓度(%) 0.00  0.01  0.02  0.03  0.04  0.05
A(538nm) 0.196 0.160  0.12  0.09  0.079 0.066
颜色变化 红色 淡红色 淡红色 淡红色 淡红色 淡红色
  分析可得到,随着过氧化氢浓度的增加,最大吸收
峰的吸光度变化较大,提取液的颜色由橙红色变为淡
红色,表明该色素的耐氧化性较差。
2.2.4.2 耐还原性
不同浓度的亚硫酸钠对吸收光谱图与溶液的颜色
的影响见图12和表5。
图12 不同浓度亚硫酸钠对色素稳定性的影响
Fig.12Effects of different concentrations of sodium sulfite
on stability of Rubus parvifolius
表5 不同浓度亚硫酸钠提取液吸光度
Table 5Comparison among absorbencies at different
concentrations of sodium sulfite
亚硫酸钠浓度(%) 0.00  0.01  0.02  0.03  0.04  0.05
A(538nm) 0.196 0.196 0.194 0.194 0.189 0.190
颜色变化 红色 红色 红色 红色 红色 红色
  分析可得到,随着亚硫酸钠浓度的逐渐升高,最大
吸收峰处的吸光度变化幅度很小,同时色素液的颜色
也基本保持不变,表明该色素的耐还原性好。
2.2.5 金属离子对色素稳定性的影响
不同浓度的金属离子对色素溶液在波长538nm
的吸光度影响见表6。
表6 不同浓度的金属离子提取液吸光度
Table 6Comparison among absorbencies at
different concentrations of metal ions
金属离子/浓度
(×10-5 mol/L)
吸光度
Zn2+ K+ Ca2+ Mg2+ Na+ Fe3+ Cu2+ Al3+ 对照
2  0.137  0.137  0.138  0.138  0.137  0.131  0.134  0.138
10  0.136  0.143  0.139  0.134  0.137  0.125  0.127  0.133  0.138
50  0.135  0.137  0.137  0.137  0.136  0.071  0.118  0.135
  由表6可见,Zn2+,K+,Ca2+,Mg2+,Na+,Al 3+溶
液颜色都比较接近原液的颜色,为橙红色。但该色素
对Fe3+,Cu2+很不稳定,随着离子浓度的上升,其溶液
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的吸光度逐渐下降且溶液颜色变浅,为淡红色,因此,
该色素在储存过程中应该避免与铁,铜器皿接触。
2.2.6 食品添加剂对色素的影响
2.2.6.1 葡萄糖与蔗糖对色素稳定性的影响
不同浓度的葡萄糖与蔗糖对色素在波长538nm
处的吸光度见图13。
图13 不同浓度的葡萄糖和蔗糖对色素吸光度的影响
Fig.13Effects of different concentrations of glucose and sucrose
on absorbencies of Rubus parvifolius
由图13可见,该色素具有一定的耐糖性。
2.2.6.2 柠檬酸、苯甲酸钠、抗坏血酸和山梨酸钾对
茅莓果红色素的影响
不同浓度的柠檬酸,苯甲酸钠,抗坏血酸,甜蜜素,
木糖醇,糖精钠和山梨酸钾对色素溶液吸光度的影响
见图14。
图14 不同浓度食品添加剂对色素吸光度的影响
Fig.14Effects of different concentrations of Food additives
on stability of Rubus parvifolius.
由图14可见,柠檬酸,苯甲酸钠,甜蜜素,木糖醇,糖
精钠和山梨酸钾对色素的稳定性影响不大,而抗坏血酸
对色素稳定性的影响较大,色素溶液的吸光度明显下降。
所以,在使用抗坏血酸食品添加剂时用量不宜过高。
3 结论
研究结果表明,1.5%盐酸乙醇为提取茅莓果红色
素的最佳试剂。
经实验结果表明,盐酸乙醇提取茅莓果红色素的
最佳工艺条件为温度70℃,时间为6h,盐酸乙醇浓度
为1.5%,料液比为1∶700。其中盐酸乙醇浓度是影
响茅莓果红色素提取的显著因素。
稳定性研究表明,该色素对热和还原剂的稳定性较
好。日光对色素的影响很大,所以在储存过程中应避免
阳光直射。常用的食品添加剂如糖类,柠檬酸,苯甲酸
钠,甜蜜素,木糖醇,糖精钠和山梨酸钾对色素的光泽无
大的不良影响,其中抗坏血酸对色素的影响相对较大,因
此其用量不宜过高;金属离子中只有Fe3+,Cu2+对色素影
响较大,其他如Zn2+,K+,Ca2+,Mg2+,Na+,Al3+对色素
无不良影响。该色素耐酸碱性良好,在pH≤8时,显示稳
定的红色;在pH>8时,显示稳定的淡黄色。
茅莓果红色素为橙红色,色泽鲜艳,稳定性较好,
而且茅莓果作为一种蔷薇科植物,其果实营养相当丰
富。富含花青素和黄酮物质,有较高的保健价值且营
养丰富,因此茅莓果红色素作为一种纯天然食品色素
可进一步进行研究与开发。
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