全 文 ：·中药及天然药物 ·
HPLC法测定山绿茶药材及其制剂中冬青素A的含量
魏香兰 , 陈筱清 , 杨　杰 , 王　强＊(中国药科大学 , 江苏 南京 211198)
摘要:目的　建立山绿茶药材及其制剂中冬青素 A 的含量测定的方法。方法　采用反相高效液相色谱法。色谱柱为 C18柱(150
mm ×6 mm , 5 μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸水(63∶37);检测波长为210 nm;流速为 1.0 mL·min-1 ;柱温 25 ℃;进样量 20 μL。
结果　冬青素A在 0.059 ～ 1.18 g· L-1范围内与峰面积呈良好线性关系(r =0.999 6),平均回收率为100.4%(RSD为 1.3%, n =6)。
结论　该方法可用于山绿茶药材及其制剂的质量控制 , 该法简便 、准确 、可靠。
关键词:山绿茶;冬青素A;H PLC
doi:10.3969/ j.issn.1004-2407.2010.03.009
中图分类号:R927.2　　　文献标志码:A　　　文章编号:1004-2407(2010)03-0175-02
Determination of the content of ilexgenin A in Shanlǜcha crude drug and its prepara-
tions
WEI Xiang lan , CH EN Xaoqing , YANG Jie , WANG Qiang(China Pharmaceutical University , Nan jing 211198 , China)
Abstract:Objec tive To establish an H PLC method fo r quantitative determination o f ilex genin A in the crude drug o f shanlǜ cha and
its prepara tions.M ethod RP-H PLC method w ith C18 co lumn(150 mm ×6 mm , 5μm)was used and the mobile phase consisted of
ace tonitrile-0.1% fo rmic acid solution(63∶37).The detection wave length was 210 nm.The flow rate was 1.0 mL·min-1 and the
co lumn temperature was maintained at 25 ℃.The injection volume was 20μL .Results The linear r ange o f ilex genin A was 0.059
～ 1.18 g· L-1(r =0.9996)and the mean recovery of ilexg enin A w as 100.4%(RSD=1.3%, n =6).Conclusion The proposed
me thod w as valida ted to be sample , accurate and re liable.
Key words:Shanlǜ cha;Ile xg enin A;HPLC
作者简介:魏香兰 ,女 ,硕士研究生
＊通信作者:王 强 ,男 , 教授 ,博士生导师
　　山绿茶为冬青科冬青属植物海南冬青(Ilex
hainanensis Merr.)的干燥叶 ,主要分布于海南 、广
西 、广东等地 ,已收载于《广西中草药标准》(1990 年
版)[ 1] , 具有清热解毒 、平肝潜阳 、活血化瘀的功
效[ 1-2] 。现有的山绿茶制剂主要有山绿茶片剂及山绿
茶胶囊 ,均为单味药制剂 ,主要用于防治高血压症 、降
血脂 、降胆固醇 、冠心病 、脑血管意外所致的偏瘫 、风
热感冒 、口腔炎 、慢性喉炎 、妇科附件炎等症[ 2-3] 。
山绿茶主要含有黄酮类 、三萜苷类 、三萜酸类及
香豆素类等成分[ 1] 。文东旭等[ 4 ] 从山绿茶中分离得
到乌苏酸 、冬青素A 、冬青皂苷A 1 和胡萝卜苷。黎霜
等[ 5]采用 HPLC 法测定山绿茶中芦丁的含量 ,赵登
飞[ 6] 采用 HPLC法测定山绿茶胶囊中芦丁的含量。
尚未见关于山绿茶及其制剂中三萜类成分含量测定
的报道。文献报道冬青素A 是海南冬青等植物的主
要特征成分[ 7] 。笔者采用 HPLC 法测定山绿茶及其
制剂中的冬青素A 的含量 ,为完善山绿茶及其制剂的
质量标准提供依据。
1　仪器与试药
1.1　仪器　Shimadzu LC-10ATVP 高效液相色谱
仪 , Shimadzu SPD-10AV P 紫外检测器;Shimpack
ODS C18柱(150 mm ×6 mm , 5 μm),预柱为 Zo rbax
ODS C18柱(12.5 mm ×4.6 mm , 5 μm);H66025T
型超声波仪(无锡超声电子仪器设备厂);BS110S 型
电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)。
1.2　试药　本实验 2批药材购自广西 ,经王强教授
鉴定为冬青科植物山绿茶 Ilex hainanensis Merr.的
干燥叶 ,标本存放于中国药科大学中药分析教研室 ,
标本号为 2008-1 , 2008-2。1批山绿茶降压胶囊(广
西桂西制药有限公司 ,批号 20090402),3批山绿茶降
压片(桂林中族中药股份有限公司 ,批号 20080401 ,
20080901 , 20071201);冬青素 A 对照品为本实验室
自制[ 7] ,根据 HPLC-UV 归一化法 ,纯度大于 99%;
乙腈(色谱纯 ,美国 Merck 公司);水为双蒸水;乙醇
分析纯 。
2　方法与结果
2.1　对照品溶液的制备　精密称取冬青素 A 对照
品 5.9 mg ,置于 5 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至
刻度 ,摇匀备用。
2.2　供试品溶液的制备　取药材粉末(过 60目筛)
0.5 g ,精密称定 ,精密加入乙醇 10 mL ,超声处理 30
min ,用乙醇补足减失的质量;精密吸取续滤液 2 mL
置于10 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,经 0.45
μm微孔滤膜滤过 ,即得。取山绿茶降压胶囊内容物
按上述方法处理;山绿茶降压片 ,去糖衣后研细 ,按上
述方法处理 。
2.3　色谱条件　色谱柱:Shimpack ODS C18柱(150
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mm ×6 mm , 5 μm) ,预柱为 Zorbax ODS C18柱
(12.5 mm×4.6 mm , 5 μm);流动相:乙腈-0.1%甲
酸水(63∶37);流速:1.0 mL ·min-1 ;柱温:25 ℃;
检测波长:210 nm 。
2.4　线性关系考察　分别精密量取上述对照品溶液
50 ,250 ,500 ,750和 1 000 μL ,置于 1 mL 量瓶中 ,加甲
醇至刻度 ,摇匀 。分别精密吸取上述溶液各 20 μL ,注
入液相色谱仪中 ,记录色谱图在上述色谱条件下测定冬
青素 A峰面积 ,以冬青素 A的质量浓度 C为(g ·L-1)
横坐标 ,冬青素 A峰面积 A为纵坐标 ,经线性回归 ,回
归方程为:A =2×107C-638 261 , r =0.999 6。结果
表明 ,冬青素 A在 0.059 ～ 1.18 g ·L-1范围内与峰面
积呈良好线性关系。见图 1 。
图 1　HPLC图
A-冬青素 A 对照品;B-山绿茶药材;C-山绿茶降压片;
D-山绿茶降压胶囊;1-冬青素 A
2.5　精密度实验　精密吸取同一对照品溶液 20 μL ,
连续进样 5次 ,测定冬青素 A峰面积 ,RSD为0.93%。
2.6　稳定性实验　取同一供试品溶液 ,在 0 ,2 ,4 , 8 ,
12 ,24 ,48和 72 h ,在上述色谱条件下 ,进样分析 ,每
次 20 μL ,测定冬青素 A 峰面积 ,其 RSD为 2.38%,
表明冬青素 A在 72 h 内稳定性良好 。
2.7　重现性实验　取同批山绿茶粉末(过 60目筛)5
份 ,每份 0.5 g ,按 2.2项下的制备方法平行配制 ,分
别进样测定冬青素 A 的含量 ,结果 RSD为 1.82%。
2.8　加样回收率实验　取已知含量的山绿茶药材粉
末(过 60目筛)6份 ,分别精密加入 6 mL 含冬青素 A
对照品的甲醇溶液(每 1 mL 含冬青素 A 对照品 0.51
mg),按 2.2 项下制备 ,测得平均回收率为 100.4%,
RSD为 1.3%。
2.9　样品的测定　2批山绿茶药材 , 3批山绿茶降压
片 ,1 批山绿茶降压胶囊 ,按 2.2 项下方法制备供试
液 ,精密吸取对照品溶液 20 μL ,注入高效液相色谱
仪 ,按色谱条件测定峰面积 ,计算含量。结果见表 1 。
表 1　山绿茶药材及其制剂中冬青素 A含量测定结果
　　　样品 含量/ %
山绿茶药材 1 4.15
山绿茶药材 2 1.26
山绿茶降压片 1 4.20
山绿茶降压片 2 1.26
山绿茶降压片 3 8.26
山绿茶降压胶囊 3.78
3　讨论
①波长的选择　HPLC-UV 法测定冬青素 A 的
含量 ,冬青素 A 为五环三萜类化合物 ,具有末端吸
收 ,以 210 nm 作为检测波长测定效果最佳[ 8] 。
②提取条件的选择　山绿茶药材及其制剂的提
取主要考察以下几个方面:提取溶剂(乙醇 、90%乙
醇 、70%乙醇 、甲醇 、90%甲醇 、70%甲醇),提取方式
(热回流 、超声),提取时间(30 , 60 , 90和 120 m in)。
最终采用本文提取条件 ,其操作简单快速 ,提取完全 。
③流动相的选择　冬青素A为五环三萜类 ,具有
末端吸收 ,故有机相采用乙腈 ,冬青素A 的结构中有
羧基 ,在流动相添加甲酸能明显改善峰形 。经过对流
动相的组成 、比例和洗脱方式的考察 ,笔者所采用的
洗脱条件能实现冬青素A 良好分离 ,方法简单 、快速。
④从不同批次的药材及制剂中冬青素A 含量测
定的结果来看 ,冬青素 A在药材和制剂中均可视为 1
个主要成分 ,因此选其作为质量控制的指标是比较合
理的。另外 , 2批药材中冬青素A 的含量差别较大 ,
可能与其采收期及加工工艺有关 ,制剂中的差别也比
较大 ,这可能跟药材含量差异以及制剂工艺有关 ,还
有待进一步研究 。
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(收稿日期:2010-01-06)
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