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猴头人参花发酵菌质化学成分及抗胃溃疡作用研究



全 文 :dible fungi2013(6)
猴头菌为齿菌科小刺猴头菌 [Hericium erinaceus(Rull ex
F.)Pers.],含有多糖、甾醇类、萜类、酚类等活性成分 [1]。民间
以子实体入药,有利肠胃、助消化的作用,用于治疗慢性萎缩
性胃炎、浅表性胃炎、消化性胃溃疡和十二指肠球部溃疡及
其它原因引起的胃痛、胃酸过多等疾病 [2]。人参花为五加科
植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的花蕾,主要有效成分为
人参花皂苷。人参花皂苷能够抑制胃液分泌量,降低胃酸酸
度,以及胃蛋白酶的活性,可防治实验性胃溃疡 [3]。试验研究
小刺猴头菌与人参花共发酵菌质的化学成分变化以及对小
鼠胃溃疡的治疗作用。
1 材料与方法
1.1 供试动物 昆明种小鼠 80只,体重 18~22 g,雌雄各半,
由吉林大学基础医学院实验动物中心提供。
1.2 药物 人参花购于吉林省抚松县万良人参市场,长春
中医药大学王淑敏鉴定为五加科人参的花蕾。小刺猴头菌
菌种由长春中医药大学药用真菌研究所提供。盐酸雷尼替
丁(浙江康恩贝制药有限公司),批号:110402。人参皂苷Re
购于中国药品生物制品检定所,批号:0745~200217。
1.3 试验仪器 UV-2450紫外可见分光光度计,日本岛津
公司生产。AUY220精密电子天平,日本岛津公司生产。
TGL16M台式高速冷冻离心机,湖南凯大科学仪器有限公司
生产。
1.4 试验方法
1.4.1 小刺猴头人参花发酵菌质的制备 斜面培养基 马铃
薯 20%,琼脂 2.4%,葡萄糖 2%,磷酸二氢钾 0.15%,硫酸
镁 0.1%。液体菌种培养基:蛋白胨 1.5%,葡萄糖 3%,麸
皮 4%,磷酸二氢钾 0.15%,硫酸镁 0.1%。固体发酵培养
基:人参花 78%,石灰粉 1%,蔗糖 1%,麸皮 20%,用盐酸调节
pH 4.5~5.0。
将小刺猴头菌种扩大培养,接种于液体培养基中进行发
酵制种,待摇瓶中出现较多的小菌球时即可。将摇瓶中的菌
种接入已灭菌的固体发酵培养基中,置 25℃条件下暗培养,
待菌丝全部长满培养基,进行干燥,即得小刺猴头人参花发
酵菌质。
1.4.2 试验样品的制备
1.4.2.1 乙醇提取物的制备 分别取一定量的人参花、高温
灭菌后的人参花、小刺猴头人参花发酵菌质,加入 8倍量的
70%乙醇进行回流提取,提取两次,第一次 1.5 h,第二次 1 h,
合并提取液,回收乙醇,干燥备用。
1.4.2.2 水提取物的制备 分别取一定量的人参花、高温灭
菌后的人参花、小刺猴头人参花发酵菌质 70%乙醇提取后的
药渣,加 6倍量水,提取两次,每次 1 h,合并提取液,浓缩,干
燥备用。
1.4.2.3 多糖供试品溶液的制备 分别精确称取人参花、高
温灭菌后的人参花、小刺猴头人参花发酵菌质 70%乙醇提取
物和水提取物各 1.0000 g,加入 10 mL乙醚超声处理 30 min,
进行脱脂,回收乙醚。向残渣中加入 20 mL水,超声提取两
次,每次 30 min,5 000 r/min离心 10 min,取滤液,加入 25 mL
的氯仿,萃取两次,取上层液转移到 50 mL的量瓶中,定容,
摇匀,备用。
1.4.2.4 人参总皂苷供试品溶液的制备 分别精称人参花、
高温灭菌后的人参花、小刺猴头人参花发酵菌质 70%乙醇提
取物和水提取物各 1.0000 g,分别放入置具塞锥形瓶中,加入
10 mL的蒸馏水,超声提取 30 min,取出,离心 10 min,过滤,
取滤液,加入水饱和正丁醇溶液 40 mL,萃取三次,合并正丁
醇萃取液,回收正丁醇,将残渣用甲醇定容至 10 mL的容量
瓶中,摇匀,备用。
1.4.2.5 多糖的含量测定 采用 DNS显色法 [4]测定人参花、
高温灭菌后的人参花、小刺猴头人参花发酵菌质中多糖的含
量。按文献方法制备葡萄糖标准曲线,以糖为横坐标,吸光
度值为纵坐标,得到多糖回归方程:y=0.7985x-0.0605,r=
0.9996,葡萄糖溶液浓度在 0.025~0.739 mg/mL范围内线性关
系良好。测得供试品提取物多糖含量。
猴头人参花发酵菌质化学成分及抗胃溃疡作用研究
丘佳玲 韩园园 李爱欣 周贤 曹菁 王淑敏*
(长春中医药大学,吉林长春 130117)
摘 要 目的:研究小刺猴头菌与人参花共发酵菌质的化学成
分变化以及对小鼠胃溃疡的治疗作用。方法:将小刺猴头菌接
种于人参花固体培养基中共发酵,获得猴头人参花菌质。利用
紫外可见分光光度法测定发酵前后人参花多糖和人参总皂苷
的含量变化。建立无水乙醇致小鼠胃溃疡模型,观察猴头人参
花共发酵前后人参花、猴头人参花发酵物 70%乙醇和水提取物
对小鼠的胃溃疡面积以及对溃疡抑制率的影响。结果:小刺猴
头人参花菌质多糖含量>人参花高压灭菌后多糖含量>人参
花多糖含量。人参花高压灭菌后总皂苷含量>人参花总皂苷
含量>小刺猴头人参花菌质总皂苷含量。人参花、高压灭菌人
参花、猴头人参花发酵菌质的 70%乙醇提取物对抑制小鼠胃溃
疡有一定疗效。结论:人参花在高压灭菌的过程中增加了多糖
和总皂苷的含量,和猴头菌共发酵会使多糖含量增加,但人参
总皂苷含量没有显著变化。猴头人参花发酵菌质比单独使用
人参花治疗胃溃疡的疗效更为显著。
关键词 猴头菌 人参花 多糖 人参总皂苷 胃溃疡
文章编号 1000-8357(2013)06-0075-02
收稿日期:2013-06-29一稿;2013-08-25修改稿。*通讯作者。
食用菌与健康
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2013(6)dible fungi
1.4.2.6 人参总皂苷的含量测定 采用紫外分光光度 [5]法测
定人参花、高温灭菌后的人参花、小刺猴头人参花发酵菌质
中人参总皂苷的含量。按文献方法制备人参皂苷Re标准曲
线,以人参皂苷 Re为横坐标,吸光度值为纵坐标,得到人参
总皂苷回归方程:y=0.0038x-0.0287,r=0.9997,人参总皂苷浓
度在 0.092~0.661 mg/mL的范围内线性关系良好。测得供试
品提取物人参总皂苷含量。
1.4.2.7 各提取物对无水乙醇型小鼠胃溃疡的研究 [6]~[8] 将
80只小鼠随机成 8组,即空白组、阳性对照组、人参花醇提
组、人参花水提组、灭菌人参花醇提组、灭菌人参花水提组、
猴头人参花菌质醇提组、猴头人参花菌质水提组,每组 10只,
雌雄各半。各组小鼠每日灌胃给药一次,其中第四组、第六
组给药量为 0.15 mL/10 g,其余各组给药量均为 0.1 mL/10 g,
连续给药 7 d。各提取物组给药浓度均为每 1 mL提取液中含
2 g生药,末次给药前 12 h禁食不禁水,各组按 0.1 mL/10 g体
重灌胃无水乙醇,30 min后脱臼处死小鼠,剖腹并结扎幽门
和贲门,向胃内注入 1%甲醛溶液 2~3 mL,将胃取下,并浸入
1%甲醛溶液中,10 min后取出,沿胃大弯剪开胃,用蒸馏水冲
去胃内容物,观察并用游标卡尺测量溃疡的长、短径,按如下
公式计算溃疡面积、溃疡抑制率。
溃疡面积=3.14×1/4×长径×短径;
溃疡抑制率=(生理盐水组溃疡面积平均值-给药组溃疡
面积平均值)/生理盐水组溃疡面积平均值×100%。
统计学处理:所有数据通过 SPSS10.0软件用 t检验进行
分析,用(±s)表示结果。
2 试验结果
多糖含量测定结果见表 1,人参总皂苷含量测定结果见
表 2,抗胃溃疡作用结果见表 3。
表1 各组提取物总多糖含量
总多糖含量
人参花醇提组
人参花水提组
灭菌人参花醇提组
灭菌人参花水提组
小刺猴头人参花醇提组
小刺猴头人参花水提组
占生药含量/g
0.07863
0.06217
0.12340
0.03570
0.19790
0.01809
占生药百分含量/%
7.86
6.22
12.34
3.57
19.79
1.81
表2 各组提取物人参总皂苷含量
人参总皂苷含量
人参花醇提组
人参花水提组
灭菌人参花醇提组
灭菌人参花水提组
小刺猴头人参花醇提组
小刺猴头人参花水提组
占生药含量/g
0.03629
0.00763
0.06025
0.00235
0.0345
0.00398
占生药百分含量/%
3.629
0.763
6.025
0.235
3.45
0.398
由表 3可见,猴头人参花醇提组小鼠溃疡面积明显小于
空白组小鼠,相比较有显著差异(P<0.01),猴头人参花醇提
组与灭菌人参花醇提组相比较,小鼠溃疡面积有减小趋势,
溃疡抑制率有增大趋势。
3 小结与讨论
人参花经高温高压处理样品中多糖含量升高,说明人参
花在高温高压条件下,大分子的多糖会发生降解或转化,使
可测多糖的含量升高。与猴头菌共发酵后含量升高,说明人
参花和猴头菌形成共发酵多糖使多糖含量增高。
人参花经高温高压处理样品中人参皂苷含量升高,说明
人参花在高温高压条件下,人参皂苷成分间发生转化,或使
人参细胞破碎更完全,释放出人参皂苷成分,使人参皂苷的
含量升高。与猴头菌共发酵后含量降低,可能是在真菌发酵
过程中,人参皂苷作为真菌的营养成分被消化掉,具体机理
还有待于进一步研究。
对小鼠胃溃疡抑制作用,猴头人参花醇提组>人参花醇
提组>灭菌人参花醇提组,提示猴头人参花共发酵菌质治疗
胃溃疡作用成分来自人参和猴头菌双方面,通过高温高压单
纯提高人参花的多糖含量和人参皂苷含量对胃溃疡治疗效
果没有提高,其治疗作用主要是通过真菌共发酵获得的。说
明猴头人参花菌质可能具有改善胃壁血液循环,促进受损胃
黏膜愈合的作用,对急性胃溃疡具有较好的预防作用。至于
其深层的作用机制还有待进一步研究。
参考文献
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表3 各组提取物对小鼠胃溃疡面积及抑制率的影响
组别
空白组
雷尼替丁组
人参花水提组
人参花醇提组
灭菌人参花水提组
灭菌人参花醇提组
猴头人参花水提组
猴头人参花醇提组
给药剂量/(mL·10 g-1)
0.1
0.1
0.1
0.15
0.1
0.15
0.1
0.15
溃疡面积/mm2
23.82±6.13
7.8±5.82***
19.57±10.26
15.5±8.77**
21.79±8.18
18.30±9.71*
19.44±8.58
13.8±7.88**
溃疡
抑制率/%
67.21
17.84
34.84
8.52
23.17
18.39
42.02
例数
10
8
9
8
8
8
8
9
注:与空白组比较,* P<0.05;**P<0.01;***P<0.001。
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