全 文 ：葛根中所含有效成分葛根总黄酮，具有改善心脑血
管循环、降低心肌耗氧量、降低血糖、防止高血压及动
脉硬化、抗炎、祛痰、解热、提高机体免疫力、抗菌、
抗病毒等多种药理及保健作用。目前葛根被国家卫生部
列入“既是食品又是药品”名录[1]。葛根素(puerarin)化
学名为8-βD葡萄吡喃糖4，7二羟基异黄酮，分子量为
416.38[2]。近年来有不少厂家制作成食用葛粉投放到市
场上作为保健食品出售，我们也陆续收到客户委托检测
的样品。因此，能够准确测定葛粉中的葛根素含量成为
满足客户需求的工作任务之一。通过多次试验，探索出
直接用纯水震荡提取、高效液相色谱二极管阵列检测器
测定葛粉中葛根素含量的方法。
1 材料与方法
1.1 仪器设备及色谱条件
戴安公司Summit LC P680型高效液相色谱仪；PDA
–100光电二极管阵列检测器；Chromeleon工作站； Agilent-
TC-C18色谱柱250mm×4.6mm，5µm；流动相CH3OH:0.5％
HAc水溶液=30:70，流速0.5mL/min；检测波长250nm和
305nm；柱温30℃。
1.2 主要试剂及器材
（1）葛根素标准溶液：准确称取0.0100g葛根素标准
品（中国药品生物制品检定所，编号110752-200511），用
纯水溶解后，转移到50mL容量瓶中，定容后得到浓度为
200ug/mL的标准储备液；取标准储备液25mL到100mL容
量瓶中，用纯水定容后得到浓度为50.0ug/mL的标准应用
液，临用前将标准应用液配制成标准曲线系列即可。
（2）甲醇：色谱纯。
（3）乙酸：分析纯。
（4）调速振荡器，离心机。
（5）15mL或25mL具塞塑料离心管。
（6）全玻抽滤装置。
（7）0.45μm针筒式水系滤膜。
1.3 样品提取方法
准确称取样品2.00g（准确至0.01g）到15mL或
25mL具塞塑料离心管中，加6mL纯水充分溶浸样品后，
将离心管置于调速振荡器上振荡提取30min，取下后再
用纯水定容到10mL，混匀，以3 000r/min的速度离心
10min，然后取上清液，经0.45μm针筒式水系滤膜过
滤，待测。
1.4 实际样品检测
应用前述色谱参数对待测样品进行双波长检测和光
谱图分析定性定量[3,4]，以下是部分客户送检的葛粉样品
及自购的葛粉样品的检测数据及结果，见表1。
表1 部分实际样品的测定数据
样品编号 取样量
（g）
测定均值
（峰面积）
测定结果
（mg/Kg）
535 2.0027 5.952 18.5
自购样 2.0082 —— <最低检出浓度
2 结果与分析
有资料显示，对葛根素的提取方法，目前主要是以
乙醇或甲醇为提取剂，浸泡后用超声振荡或100℃水浴回
流提取[5-7]。特别是客户提供的企业检测标准为用60％甲
醇浸提样品，毒性较大。而且超声振荡时会产生刺耳的
高频噪声污染。而我们在前期预实验中发现，仅用纯水
和普通调速振荡器处理样品也有很好的效果，因此我们
探索是否可能采用无毒低噪声的样品前处理方法。
2.1 样品提取溶剂的选择
摘 要：提出直接用纯水震荡提取、高效液相色谱测定葛粉中葛根素含量的方法，以二极管阵列检测器选定
250nm和305nm进行双波长检测定性定量，流动相采用甲醇与0.5%乙酸水溶液,其配比为30:70，流速0.5mL/m i n，
柱温30℃。实际样品的测定表明，该方法样品前处理无毒环保，操作简便可靠，实用性较强。
关键词：高效液相色谱（HPLC)；葛粉；葛根素含量
HPLC谱法测定葛粉中葛根素含量
冯 慧，周 青，谢继安
( 安徽省疾病预防控制中心，合肥 230601)
作者简介：冯慧（1961— ），女，浙江平湖人，主任技师，主要从事理化分析与技术研究。
中国食物与营养 2011,17(3):57-59
Food and Nutrition in China
综合资料及预试验结果，拟定用30％甲醇水溶液
和纯水，作为样品提取溶剂的对比选择。准确称取4份
样品2.00g左右到15 mL具塞塑料试管中，2份样品加入
30％甲醇10mL，2份样品加入纯水10mL，将其置于超
声振荡器中超声提取10min。然后测定提取液中葛根素
的含量，以试验两种溶剂对样品中待测物的提取效果的
影响。试验结果（表2）表明，仅用纯水提取即能获得
良好的效果。可避免使用有毒的甲醇试剂，降低对实验
人员身体健康的危害。
2.2 样品提取方式及时间的选择
准确称取4份样品加入纯水10mL，将其置于调速
振荡器上，2份振荡30min、2份振荡120min，并与用纯
水超声提取的样品，同时测定提取液中葛根素的含量，
以实验不同提取方式及不同振荡提取时间对样品中待测
物的提取效果的影响。实验结果见表2。
小无显著性差异，当甲醇与0.5％乙酸水溶液配比达到
30:70时，待测物的峰面积值显著增大，使测定灵敏度
大为提高。因此，选择流动相甲醇与0.5％乙酸水溶液
的配比为30:70。
2.3.3 流动相流速的选择
同样用20ug/mL的标准应用液进样10uL，当流
动相流速为0.5mL/min时，待测物保留时间长，测定
峰面积值大，流速为1.0mL/min时，待测物保留时间
短，测定峰面积值相对减小，实际应用时可以根据样
品数量和样品中待测物含量的高低，以确定最佳流速。
本实验中由于样品的葛根素含量较低，故采用流速
0.5mL/min进行测定，以提高测定灵敏度。
2.4 标准曲线线性范围及最低检出浓度
本法标准曲线线性范围为0.00—40.0μg/mL，测定
数据见表3。线性回归方程为Y=1.795X－0.6327，线性
相关系数r＝０.9998，最低检出浓度为0.355μg/mL。表2 样品提取溶剂、提取方式及时间的选择
提取溶剂及提取方式 测定均值（峰面积）
测定结果
（mg/kg）
纯水超声10min 6.2224 17
30％甲醇超声10min 6.2123 16
纯水振荡30min 5.8096 16
纯水振荡120min 6.0798 16
综上所述，试验了加入30％甲醇、加入纯水超声提
取10min和加入纯水在振荡器上提取30min、120min4种
提取方式，检测结果表明，样品中的葛根素含量无显著
性差异，鉴于采用加纯水机械振荡提取30min的方式，
操作简单易行，无高频噪声污染，因此选定以此法对样
品进行前处理。
2.3 色谱条件的选择
2.3.1 检测波长的选择
开启3D通道，在190—400nm波长范围内对葛根
素标准进行扫描，发现葛根素的最大特征吸收峰在
250nm处，次灵敏特征吸收峰在305nm处，所以选定
250nm为第一检测波长，305nm为第二检测波长，与
文献[5,6]所用波长一致。同时为避免流动相甲醇在紫外
段的吸收影响3D图谱的完整性，将3D扫描的起始波
长设定为225nm。
2.3.2 流动相配比的选择
分别试验比较了甲醇与0.5％乙酸水溶液在几种
不同配比情况下的出峰情况和峰面积值大小，结果表
明，甲醇：0.5％乙酸水溶液配比为10:90或20:80时，
用20ug/mL的标准应用液进样10uL，待测物滞留色谱
柱中不出峰，改为25:75再进样时，滞留色谱柱中的待
测物全部从柱中被依次洗脱出峰，并且峰面积值的大
表3 标准曲线测定数据
标准浓度
(μg/mL) 0 5.0 10.0 15.0 20.0 40.0
峰面积测定
均值 0 8.488 17.121 25.881 34.548 71.705
2.5 精密度及准确度
2.5.1 精密度
对含葛根素低、高两种浓度的加标样品各6份
（均以葛根粉制品为基质），进行平行测定，结果显示
精密度良好，测定数据见表4。
表4 精密度测定数据
样品编号 测定值（峰面积） 测定均值 RSD％
1 12.274 11.949 12.380 12.310 1.54
12.348 12.444 12.464
2 29.516 29.312 29.389 29.672 1.22
30.306 29.808 29.703
2.5.2 准确度
采用加标回收法检验测定的准确度，取535号样品
（葛根粉制品）作为基质，分别加入葛根素40μg和140μg
（各平行6份），同时测定其基质本底含量及加标量，计算
回收率，数据显示回收率良好，测定结果见表5。
表5 回收率测定数据
样品编号 加标量(μg) 　测定回收值(μg)
回收率范
围（％）
平均回收
率（％）
535（11-16） 40 38.5 37.6 37.4 93.0 - 96.3 94.2
37.2 37.6 37.8
535（17-22） 140 141.8 139.8 135.4 96.7- 101 99.4
140.7 139.0 138.53
58 中 国 食 物 与 营 养 第17卷
3 结论
上述结果表明,本方法样品前处理过程无毒、低噪
声，实验操作简便可靠，实用性较强。◇
参考文献
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Puerarin Content Determination in Kudzu Powder by HPLC
FENG Hui, ZHOU Qing, XIE Ji-an
(Anhui Center for Disease Control and Prevention, HeFei 230601, China )
Abstract: Puerarin in kudzu powder was shocked and extracted with pure water and determination by HPLC. The extract was
detected qualitatively and quantitatively using a Diode array detector by dualwavelength at 250nm and 305nm. The mobile phase was
methanol-0.5％Acetic acid(30:70), the flow speed was 0.5mL/min,and the column temperature was 30℃.The methodology and the
sample analysis proved that this method was practical , convenient,reliable, nontoxic and environment-friendly.
Keywords: High Performance Liquid Chromatography(HPLC); kudzu powder; puerarin content
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59冯慧等：HPLC谱法测定葛粉中葛根素含量第3期