全 文 ：ventionaldrugs, butspectinomycinandceftriaxonecanbeusedasthefirstchoiceofdrug.Weshouldstrengthen
themonitoringofdrugresistanceinNeisseriagonorrhoeae.
【Keywords】　Neisseriagonorhoeae;Resistance
　　淋病是最常见的性传播疾病之一 ,由淋病奈瑟双球菌引起
的泌尿生殖器官的一种急性或慢性炎性反应。近年来 ,发病率
逐年升高 ,如不正规治疗 , 病重者 , 可侵犯多个器官 , 导致淋菌
性关节炎 、淋菌性盆腔炎 、淋菌性脑膜炎等 , 甚至导致终身不
育。因此 ,及时诊断 、合理治疗至关重要。为探讨淋病奈瑟菌
的耐药性 ,本文对本院分离的 82株淋病奈瑟菌进行药敏试验。
1　材料与方法
1.1　标本来源　收集济南市第四人民医院皮肤门诊或妇科
门诊的患者标本 , 或其配偶有非婚性接触史。
1.2　标本采集　用无菌棉拭子插入患者生殖道取分泌物 ,
送检。
1.3　细菌分离鉴定　取分泌物接种于哥伦比亚血平板 、哥伦
比亚巧克力 、GC巧克力平板 , 封烛缸 , 37℃, 过夜培养。 用
API鉴定条 , 通过 ATBexpression细菌鉴定系统鉴定。
1.4　药敏试验　采用纸片扩散(K-B)法 ,青霉素 、环丙沙星 、
四环素 、头孢呋辛 、头孢曲松和大观霉素药敏纸片均购自 OX-
IOD公司。
1.5　β -内酰胺酶的检测　采用产色头孢硝噻吩法 ,将纸片置
于无菌干燥平皿中 , 直接将菌苔挑在纸片上 , 在室温条件下 ,
10 min后观察结果 , 若纸片由浅黄色变为粉红色即为产酶阳
性 , 不变色即为阴性。
1.6　药敏分析软件　用 WHONET5.4软件进行分析。
2　结果
2.1　82株淋病奈瑟菌对 6种常用抗菌药物的耐药性见表 1。
表 1　82株淋病奈瑟菌对 6种常用抗菌药物的耐药性
抗生素名称 菌株数 R(%) I(%) S(%)
青霉素 82 58.5 39.1 2.4
环丙沙星 82 90.2 8.5 1.3
四环素 82 41.5 19.5 39.0
头孢呋辛 82 8.5 19.5 72.0
头孢曲松 82 0.0 7.3 92.7
大观霉素 82 0.0 2.4 97.6
　　注:R为耐药 , I为中介 , S为敏感
2.2　β-内酰胺酶的检测结果　82株淋病奈瑟菌中 , β-内酰
胺酶阳性的有 25株 ,占 30.5%。
3　讨论
近年来 , 性传播疾病在我国持续流行 ,使泌尿生殖道感染
的发病率增多。淋病仍然是最常见的性传播疾病(STD),
1987年的统计资料显示淋病在我国占 STD的 77.67%[ 1] 。由
于不少患者不规范治疗 ,自行服抗生素 , 致使疾病变为慢性 ,
且导致菌株产生耐药性 , 给临床医生进一步治疗带来困难。
淋病奈瑟菌的主要耐药机制是由质粒介导的产青霉素酶
(PPNG)。本文资料 82株淋病奈瑟菌中 , 产酶菌株为 25株 ,
阳性率为 30.5%, 高于广州地区报道的 11.6%[ 2] 。表 1显
示 , 淋病奈瑟菌对青霉素 、环丙沙星的敏感率分别为 2.4%和
1.3%, 可见原先作为一线用药的青霉素 、环丙沙星 , 已不再适
合作为首选药。本组四环素的耐药率为 41.5%, 与文献相
比 [ 2] ,未见上升。 SusanA.Wang等 [ 3]在美国调查了从 1988
到 2003淋病奈瑟菌的耐药情况显示 , 治疗淋病 , 青霉素的使
用比例从 1988年的 39.5%到 1994年的 0%, 而氟喹诺酮的
使用比例从 1988年的 0%到 2003年的 42.0%;青霉素的耐
药率从 1991年的 19.6%下降到 2003年的 6.5%, 而氟喹诺
酮耐药率则逐渐上升。 可见 , 淋病奈瑟菌的耐药性与大量抗
菌药物的使用有密切联系。
82株淋病奈瑟菌对大观霉素 、头孢曲松的敏感率分别为
97.8%、91.8%,大观霉素 、头孢曲松仍可作为治疗淋病的有
效药物;未发现耐大观霉素和头孢曲松的菌株 ,这与文献相一
致 [ 4] ,只是出现了中介敏感的菌株 , 因此应加强对淋病奈瑟
菌的耐药性监测 , 及时掌握其耐药趋势。
参　考　文　献
[ 1] 　刘铁梅 ,谢风 ,朱光泽 ,等.淋球菌耐药性的研究进展.中国实验
室诊断杂志 , 2002, 6(5):346-347.
[ 2] 　徐德兴 ,王露霞 ,熊剑辉 ,等.广州地区淋病奈瑟菌的耐药性监
测.广东医学 , 2000, 21(1):7-8.
[ 3] 　SusanA.Wang, AlesiaB, etal.AntimicrobialResistanceforNeise-
riagonorrhoeaeintheUnitedStates, 1988 to2003:TheSpreadof
FluoroquinoloneResistance.AnnalsofInternalMedicine, 2007, 147
(2):81-88.
[ 4] 　吴蓉 ,康向东 ,戴俊华 , 等.淋病奈瑟菌的耐药性及氟喹诺酮耐
药基因突变的分析.检验医学 , 2005, 20(4):306-309.
葛粉中葛根素的高效液相色谱分析
李洪玉　戴诗文　寿旦　章建民　俞忠明
【摘要】　目的 　测定葛粉中葛根素的含量 。方法 　用 HPLC法测定 , 以 MeOH-H2O-HAc
(30∶70∶0.5)为流动相 , 250 nm为检测波长 。结果　葛根素呈良好的线性关系 ,平均回收率为 98.6%,
RSD为 1.76%。结论　该法简单 、快速 、准确 。
【关键词】　葛粉;葛根素;HPLC
Studyofpuerariainpuerariapowderbyreversed-phasehighperformanceliquidchromatography　LIHong-
yu, DAIShi-wen, SHOUDan, etal.ZhejiangAcademyofTraditionalChineseMedicine, Hangzhou310017 , China
　　作者单位:310007 杭州 ,浙江省中医药研究院
·39·中国实用医药 2009年 1月第 4卷第 1期　ChinaPracMed, Jan2009, Vol.4, No.1
DOI :10.14163/j.cnki.11-5547/r.2009.01.027
　　【Abstract】　Objective　Determinationofpuerariainpuerariapowder.Methods　Puerariaweredeter-
minedbyHPLC.ThemobilephasewasMeOH-H2 O-HAc(30:70:0.5).Detectionwavelengthwasat250 nm.
Results　Puerariashowedagoodlinearrelationship.Theaveragerecoverywas98.6% andRSDwas1.76%.
Conclusion　Thismethodwassimple, quickandaccurate.
【Keywords】　Puerariapowder;Pueraria;HPLC
　　葛根为豆科植物野葛 Puerarialobata(Wild.)Ohwi的干
燥根 , 是常用中药材 , 具有解肌退热 , 生津 , 透疹 ,升阳止泻功
效 , 用于外感发热头痛 、项背强痛 , 口渴 , 消渴 , 麻疹不透 , 热
痢 , 泄泻 , 高血压颈项强痛等 [ 1] 。现代研究证实 , 葛根中的主
要有效成分为葛根素等异黄酮类化合物 ,具有抗炎解热 、扩张
冠状动脉血管 、增加冠状动脉血流量的作用 , 同时也有降低血
压的作用。有关葛根中葛根素等异黄酮的含量测定研究已有
不少报道 [ 2-5] , 但对葛粉中葛根素含量测定报道不多。本文
对葛粉中葛根素的提取条件和测试条件等进行比较研究 , 并
采用高效液相色谱法对葛粉样品进行了定量分析 ,结果令人
满意。
1　材料
1.1　仪器与试剂　岛津 LC-10Atvp高效液相色谱仪;SPD-10
Avp紫外检测器;岛津 UV-265紫外分光光度仪 , 多功能榨汁
机 /搅拌机 SG300-I(上海科骏电器有限公司)。 甲醇(色谱
纯),水(二次蒸馏), 其余均为分析纯。葛根素对照品(中国
药品生物制品检定所);鲜葛(浙江省永嘉县潘坑乡)。
1.2　色谱条件　用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;色谱柱
C18 diamonsil(150 mm×4.6 mm, 5 μl), MeOH-H2O-HAc(30
∶70∶0.5)为流动相 ,紫外检测波长 250 nm。
2　结果与分析
2.1　提取溶剂浓度的选择　精密称取同一样品约 0.1 g, 分
别加 30%、50%和 80%10ml, 超声提取 60 min,进样 5 μl, 比
较峰面积 , 实验结果表明 30%乙醇提取最好。
2.2　超声提取时间的选择　精密称取同一样品约 0.1 g, 加
30%乙醇 10 ml,超声提取 30 min、45 min、 60 min, 进样 5 μl,
比较峰面积 , 实验结果表明超声 60分钟为最佳提取条件。
2.3　流动相及流速的选择　试验时曾采用下述流动相进行
测定:甲醇-水(25∶75)、甲醇-水-醋酸(30∶70∶0.5)、甲醇-水
(30∶70)为流动相 , 结果采用甲醇-水-冰醋酸(30∶70∶0.5)为
流动相 , 样品分离好。流速以 1.0ml/min合适。
2.4　标样溶液的制备　称取一定量葛根素对照品 , 用 30%
乙醇溶解配制成浓度为 13 μg/ml的葛根素标准液。
2.5　葛粉制备　取鲜葛用水洗净切片 , 称取 20 g放入搅拌
机内 , 搅拌 3次 , 1次 /min, 每次加水 200, 150, 100 ml, 合并浆
汁放置 2 d, 去掉上面的水 ,下面的粉浆用定量滤纸过滤 ,低温
干燥 , 放入干燥器中备用。
2.6　供试品溶液制备　精确称取一定量葛粉于 10 ml容量
瓶中 , 加 30%乙醇 10 ml, 超声提取 1 h, 滤纸过滤 , 滤液过
0.45 μm滤膜作为供试品溶液。
2.7　线性关系考察　在上述色谱条件下 , 分别进标样溶液
0.5、 3、5、7、10 μl,测得各峰面积。以葛根素为横坐标(A), 以
峰面积(Y)为纵坐标 , 计算得回归方程:Y=3.90 ×10x+
728.14,相关系数 r=0.9999;结果紫外检测葛根素在 0.0065
～ 0.13 μg范围内呈良好线性关系。
2.8　精密度试验　取上述标样溶液 , 连续进样 5次 , 测定 ,
RSD为 1.11%。
2.9　重复性试验 　取同一样品重复测定 5 次 , RSD
为 1.61%。
2.10　稳定性试验　取上述供试品溶液 , 0、2、 5、 7、10 h进样 ,
RSD为 2.1%, 10 h内进样稳定。
2.11　回收率试验　取已知含量的样品 , 分别加入葛根素标
样 , 按上述方法测定 5次 , 平均回收率(x)为 98.6%, RSD为
1.76%。见表 1。
表 1　回收率测定结果
加入对照
品量(mg)
测定值
(mg)
回收率
(%) x(%)
RSD
(%)
0.065 0.123 96.5
0.065 0.107 97.7
0.065 0.119 95.2 97.2 1.6
0.065 0.111 99.5
0.065 0.153 97.1
2.12　样品分析　精密吸取标样溶液 5 μl与供试品溶液 5
μl,注入液相色谱仪 , 测定 , 结果:葛粉中葛根素的含量为
0.06%(n=3), 见图 1、2。
图 1　葛根素对照品HPLC色谱图
图 2　葛粉样品HPLC色谱图
3　结论
本文采用高效液相色谱法测定葛粉中葛根素的含量 , 方
法简单 、快速 、准确 , 结果满意 , 可用于葛粉中葛根素的含量
测定。
参　考　文　献
[ 1] 　中国药典委员会.中国药典一部.化学工业出版社 , 2005:
233-234.
[ 2] 　章育中 ,杨凡.高效液相色谱法测定葛根及其片剂中异黄酮的
含量.药物分析杂志 , 1984, 4(2):67.
[ 3] 　张蕾 ,潘扬 ,朱蓉贞 , 等.不同品种及产地的葛根中葛根素含量
的比较.中国中药杂志 , 1995, 20(7):399.
[ 4] 　肖学凤 ,高岚.HPLC法测定不同产地葛根中葛根素的含量.中
草药 , 2001, 32(3):220.
[ 5] 　迟霁菲 ,张国刚.高效液相色谱法测定不同产地葛根中葛根素
的含量.中南药学 2006, 114(14):307-308.
·40· 中国实用医药 2009年 1月第 4卷第 1期　ChinaPracMed, Jan2009, Vol.4, No.1