全 文 ： 药理药化
收稿日期:2006-09-11;　修订日期:2006-12-14
基金项目:广西壮族自治区教育厅科学基金资助项目(桂教科研 [ 2004] 20号)
作者简介:杨立芳(1969-),女(汉族),吉林白山人 ,现任广西民族大学主
管药师 ,学士学位 ,主要从事天然产物化学 、仪器分析.
高效液相色谱法测定广西粉葛中葛根素的含量
杨立芳1, 3 , 李小燕 1 , 罗伟强1 , 潘洪平 2 ,邓光辉 1 , 韦冬萍1
(1.广西民族大学 ,广西 南宁　530006;
2.广西壮族自治区人民医院 ,广西 南宁　530021;
3. 广西医科大学 ,广西 南宁　530021)
摘要:目的 采用 HPLC法测定广西粉葛中葛根素的含量。方法 色谱柱 Phenom enex Gem ini C18柱(250 mm ×4. 6 mm , 5
μm);流动相:乙腈(A) -0. 4%磷酸水溶液(B), 采用梯度洗脱;流速:1. 0 m l /m in;检测波长:250 nm;柱温:30℃。结果
葛根素在 800 ～ 2400 ng范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系。回归方程为 A =7. 682 ×104C +5. 885×104 , r=
0. 999 3(n =5)。其平均回收率为 99. 49%, RSD 为 0. 75%(n=5)。结论 该方法简便易行 , 结果准确 , 可作为广西粉葛药
材质量控制的有效方法 。
关键词:广西粉葛;　葛根素;　高效液相色谱法
中图分类号:R284. 1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)03-0578-02
Determ ination of Puerar in in Content in GuangxiRad ix puerariae thomsonii by HPLC
YANG L i-fang1, 3 , L IX iao-yan1 , LUO W ei-qiang1 , PAN H ong-ping2 , DENG G uang-hui1 , WEI Dong-ping1
(1. GuangxiUniversity for Nationa lity, Nann ing 530006, China;2. P eople’ sHospital of Guangxi Autonomous
Region , Nanning 530021, Ch ina;3. GuangxiMedicalUn iversity , Nanning 530021, China)
Abstract:Objective To de term ine the content o f pue rarin from Guangxi Rad ix puerariae thom sonii byHPLC.M ethods The iso-
lation was conduc ted on a phenom enex gem ini C18 co lum n(250 rmm ×4. 6 mm , 5μm ), them obile phase consisted o f ace tonit-
n le (A) -0. 4% phosphoric and (B) in a g radien tm ode l, the flow ra tew es 1. 0 m l /m in, the detection wave leng th w as 250 nm
and the co lumn tem po ra turew as 30℃. R esu lts The con tent o f pue ra rin showed good linea rity in the range of 800 ng～ 2400 ng, the
reg ression equa tion w asA =7. 682×104C +5. 885×104 , r=0. 999 3 (n =5), and the average recove ry wa s 99. 49%, RSD was
0. 75% (n =5). C onclusion This m e thod is simp le, rapid, accura te and re liable. It can be used for quality control o f Guangx i
Radix puerariae thom sonii.
Key words:Rad ix puerariae thom sonii;　Puerarin;　HPLC
　　粉葛为豆科植物甘葛藤(Pueraria thom son ii Benth)的干燥
根。收载于《中国药典》各版 [ 1] 。主含异黄酮成分葛根素 (Pue ra-
rin)、葛根素木糖苷(Puerarin— xy lo side)、大豆黄酮(Daidze in)、大
豆黄酮苷(Da idze in)及多量淀粉等 [ 2] , 具有解肌退热 、生津 、透
疹 、生阳止泻之功效 [ 3] 。 葛根素是粉葛药材中的主要活性成分
之一 , 具有扩张冠状动脉 , 降低血压 , 减少心肌耗氧量;抗心率失
常;降血糖 ,降血脂;抗动脉硬化 ,改善微循环;抗肿瘤等多种药理
作用 [ 4] 。为此 ,粉葛越来越受到人们的重视。 本文采用适宜的
提取方法 , 通过 HPLC法对广西不同产地粉葛中葛根素进行含量
测定 , 可较全面地评价广西粉葛药材质量 , 为广西粉葛药材的开
发和应用提供了实验基础。
1　仪器与试药
美国 Perk inE lm er Series 200液相色谱仪;紫外检测器;葛根
素对照品(中国药品生物制品鉴定所 批号:110752 - 2004110);
乙腈为色谱纯;水为超纯水。其余试剂均为分析纯。实验所用粉
葛药材(产地:广西)经广西南宁食品药品检验所鉴定。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件 色谱柱:Phenom enexGem ini C18柱(250 mm ×4. 6
mm , 5 μm);检测波长:250 nm;柱温:30℃;进样量:20 μl;理论板
数按葛根素计算不低于 5000。流动相:乙腈(A) - 0. 4%磷酸水
溶液(B),流速:1. 0 m l /m in。采用梯度洗脱 ,程序:0 ～ 5 m in A /B
(0:100);5 ～ 25 m in A /B(11:89);25 ～ 40 m in A /B(17:83);40 ～
50 m in A /B(35:65);50 ～ 70 m in A /B(78:22)。
2. 2　对照品溶液的制备 精密称取 20 m g葛根素对照品 ,用 30%
乙醇超声 5 m in使溶解 ,定容至 50 m l容量瓶中摇匀 , 即得 (每毫
升中含葛根素 400μg)。
2. 3　供试品溶液的制备 取粉葛药材粉末约 1. 0 g(过 2号筛),
精密称定 ,精密加入 30%乙醇溶液 50 m l,称定重量 , 用超声清洗
器进行超声提取 1 h,再次称定重量 , 用 30%乙醇溶液补足减失
的重量 ,然后减压过滤 , 取出滤液 , 用 0. 45 μm 水系微孔滤膜过
滤 , 得供试品溶液。
2. 4　系统适用性实验 在 “ 2. 1”项色谱条件下 , 葛根素与相邻峰
可达到基线分离 , 分离度大于 4. 0, 理论塔板数以葛根素计算为
5000,色谱图见图 1。
2. 5　线性关系考查 精密称取 20 m g葛根素对照品 ,用 30%乙醇
溶解(需超声 5 m in), 定容至 50 m l容量瓶中制成贮备液。分别
精确量取贮备液 1. 00, 1. 50, 2. 00, 2. 50, 3. 00 m l定容至 10 m l, 制
成葛根素含量为 40. 00, 60. 00, 80. 00, 100. 0, 120. 0μg m l- 1的标
准溶液 ,各进样 20 μl, 记录峰面积积分值 , 以峰面积积分值 A对
浓度 C进行回归 ,得 A =7. 682×104C+5. 885×104 , r=0. 9993(n
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 3期 LISH IZHEN MEDIC INE AND MATERIA M ED ICA RESEARCH 2007VOL. 18 NO. 3　
=5)。表明葛根素在 800 ～ 2400 ng范围内峰面积与进样量呈良
好的线性关系。
2. 6　精密度实验 精密吸取 “ 2. 5”项下的对照品溶液(80. 00 mg
L - 1)20 μl, 连续进样 5次 , 测得色谱峰面积 , 计算 RSD 为
0. 47%(n =5)。
2. 7　稳定性实验 取 3号样品(批号:031030), 按 “ 2. 3”项下方
法制备供试品溶液 ,按上述色谱条件进样 20 μl, 于 0, 2, 5, 17, 24,
42 h进样测定 ,测得色谱峰面积 , 计算 RSD为 1. 59%(n =5)。结
果表明 , 供试品溶液在 42 h内稳定。
图 1　粉葛药材 HPLC色谱图
2. 8　重复性实验 取同一批粉葛药材样品 (批号:031030)5份 ,
分别精密称定 , 按 “ 2. 3”项下方法配制供试品溶液 , 分别进样 20
μl,测得色谱峰面积 , 计算葛根素的 RSD为 1. 88%(n=5)。
2. 9　回收率实验 取已知含量的同一批供试品 (批号 20051001)
5份 ,每份 0. 5 g,置 50 m l容量瓶 ,精密称定 , 分别精密加入葛根
素对照品溶液(葛根素:400μg m l- 1) 5 m l,加入 30%乙醇溶液
适量 , 用超声清洗器进行超声提取 1 h, 放冷至室温 , 用 30%乙醇
溶液定容 , 然后减压过滤 , 取出滤液 , 用 0. 45 μm 水系微孔滤膜
过滤 , 得供试品溶液。按 “ 2. 1”项方法进行测定 ,计算回收率 ,结
果平均回收率为 99. 49% , RSD为 0. 75%(n =5)。见表 l。
表 l　粉葛中葛根素的加样回收试验结果
编
号
样品量
m /g
样品中葛根
素的含量m /mg
加入对照品
的量m /mg
测出葛根素
总量m /mg
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1 0. 501 2 2. 042 9 2. 000 4. 009 1 98. 31
2 0. 502 9 2. 049 8 2. 000 4. 050 2 100. 02
3 0. 501 8 2. 045 3 2. 000 4. 044 1 99. 94 99. 49 0. 75
4 0. 500 5 2. 040 0 2. 000 4. 040 2 100. 01
5 0. 501 0 2. 042 1 2. 000 4. 025 7 99. 18
2. 10　样品测定 分别对 6个不同产地的广西粉葛样品按 “ 2. 3”
项下方法进行提取 ,按 “ 2. 1”项方法进行含量测定 , 结果见表 2。
表 2　葛根素含量测定结果
编号 来源 批号 含量 C /mg g -1
1 桂林 A医药有限公司　　　 040928 2. 589
2 南宁 B医药有限公司　　　 2005051503 3. 603
3 南宁 C中药饮片有限公司　 031030 3. 629
4 柳州 D药材批发站中药饮厂 040927 2. 667
5 南宁 E中药饮片限公司　　 20050924 2. 835
6 广西 F药业股份有限公司　 20051001 4. 076
3　讨论
3. 1　流动相的选择 《中国药典》2005年版Ⅰ 部 , 关于粉葛药材
中葛根素的含量测定方法是以甲醇-水(25∶75)为流动相 , 其葛
根素的吸收峰与随后的小峰的分离度为 1. 2左右 , 本实验采用乙
腈(A)-0. 4%磷酸水溶液 (B)梯度洗脱可使葛根素与相邻组分得
到更好的分离 ,葛根素保留时间适中。流动相中加入适量的磷酸
溶液 , 可使色谱峰对称 , 不拖尾。
3. 2　检测波长的选择 取葛根素适量 , 加 30% 乙醇制成对照品
溶液 , 置紫外分光光度计记录其紫外吸收光谱 , 结果显示 ,葛根素
在 250 nm波长处有最大吸收 , 故选择 250nm 为测定波长。供试
品与葛根素对照品在相应位置上有相似的吸收峰且分离度良好。
3. 3　样品提取条件的比较 实验比较甲醇和乙醇两种提取溶剂 ,
结果表明用 30%乙醇做提取溶剂 , 提取较为完全且毒性较小。
对超声处理时间进行了考察 , 结果表明超声处理时间 60 m in
为佳。
3. 4　 本法样品处理方法便捷 ,测定方法简单 , 测定结果准确可
靠 , 实践结果表明 , 可用于广西粉葛的制备 、制剂生产过程的质量
控制。
3. 5　 从样品的 HPLC图谱显示 , 本方法各组分分离效果良好 ,
故本方法也可用于粉葛中其它成分的含量测定分析 ,此工作有待
今后进一步开展。
参考文献:
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LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 3 时珍国医国药 2007年第 18卷第 3期