全 文 ：文章编号:1001 － 5949(2012)12 － 1221 － 02 ·论 著·
HPLC法测定金叶接骨木中芦丁和槲皮素的含量
马学琴，赵淑红，徐力生
［摘要］ 目的 建立金叶接骨木中芦丁和槲皮素的含量测定方法，考察宁夏引种金叶接骨木叶和茎中芦丁和
槲皮素的含量。方法 色谱柱 Thermo ODS － HYPERSIL (4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ;DAD 检测器，检测波长 360
nm;流动相:甲醇 － 0． 2%醋酸水溶液(45:55) ;流速 1 ml /min，柱温 30 ℃。结果 芦丁和槲皮素的线性范围分别为
0． 01 ～ 1 mg /ml(n = 6)和 0． 005 6 ～ 0． 560 mg /ml (n = 6) ;平均回收率分别为 101． 69% (RSD = 2． 75%，n = 6)和
98． 41% (RSD = 2． 82%，n = 6) ;宁夏引种金叶接骨木叶中芦丁和槲皮素的含量分别为(5． 30 ± 0． 12)mg /g 和
(0． 48 ± 0． 01)μg /g，茎中芦丁的含量为(0． 66 ± 0． 02)mg /g。结论 所建立方法简便、准确，可作为金叶接骨木中
芦丁和槲皮素的含量测定方法。
［关键词］ 反相高效液相色谱;金叶接骨木;芦丁;槲皮素
［中图分类号］ R284． 1 ［文献标识码］ A
Simultaneous determination of rutin and quercetin in Sambucus Canadensis Aurea by HPLC
MA Xue － qin，ZHAO Shu － hong，XU Li － sheng． Department of Pharmacy，Ningxia Medical University，Yinchuan 750004，China
［Abstract］ Objective To establish a method by HPLC for determination of rutin and quercetin in leaves and stems of Sambucus
Canadensis Aurea which were cultivated in Ningxia． Methods The chromatographic condition:Thermo ODS － 2HYPERSIL (250 mm
×4． 6 mm，5 μm)column，DAD detection at 360 nm，the mobile phase consisted of methanol and 0． 2% acetic acid water liquid (45:
55) ，with a flow rate of 1． 0 ml /min，at 30℃ ． Results The linear ranges of rutin and quercetin were respectively 0． 01 ～ 1 mg /ml (n =
6)and 0． 0056 ～ 0． 56 mg /ml (n = 6)． The average recoveries were respectively 101． 69% (RSD = 2． 75%，n = 6)and 98． 41% (RSD
= 2． 82%，n = 6)． The content of rutin and quercetin in leaves of Sambucus Canadensis Aurea were respectively 5． 30mg /g and 0． 48
μg /g． The content of rutin in stems was 0． 66mg /g． Conclusion The method is simple and precise，and can be used to control the
quality of Sambucus Canadensis Aurea．
［Key words］ RP － HPLC;Sambucus canadensis aurea;Rutin;Quercetin
［作者单位］宁夏医科大学药学院，宁夏 银川 750004
［作者简介］马学琴(1980 ～) ，女，博士研究生，讲师，从事中药质量
控制研究方向。
［网络出版地址］http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /64． 1008． R．
20121212． 1648． 028． html
金叶接骨木(Sambucus Canadensis． ＇Aurea＇)为忍
冬科接骨木属植物加拿大接骨木(Sambucus Cana-
densis L)的彩色叶变种，我国很多城市作为园林观
赏植物引种［1］。忍冬科接骨木属植物大多具有广泛
的药用价值［2］。有学者［3 － 4］对金叶接骨木的药用价
值进行了初探，薄层色谱结果显示该植物中具有槲
皮素、芸香苷、熊果酸和齐墩果酸等药用成分，并且
具有一定的毒性。本文针对金叶接骨木中芦丁和槲
皮素建立同时检测两者含量的 HPLC 方法，考察宁
夏引种的金叶接骨木叶和茎中两者的含量，为其药
用价值的开发提供实验数据。
1 仪器与方法
1． 1 仪器:日立 LC － 2000 高效液相色谱仪 (L －
2455DAD检测器，L － 2300 柱温箱，L － 2200 自动进
样器，L － 2130 四元泵) ;日本岛津 UV － 2550 紫外分
光光度计，美国奥豪斯 AP210 型分析天平，上海金鹏
FW100 型中药材粉碎机，江苏昆山 KQ － 250B 型超
声清洗器。
1． 2 药品与试剂:芦丁对照品(批号:100080 －
200306，中国药品生物制品检定所) ，槲皮素对照品
(批号:100081 － 200406，中国药品生物制品检定
所) ，甲醇(色谱纯，美国 TEDIA) ，娃哈哈纯净水，其
它试剂均为分析纯。金叶接骨木为自采，1 年生，经
宁夏医科大学药学院生药学教研室鉴定为忍冬科接
骨木属植物加拿大接骨木(Sambucus Canadensis L．)
的彩色叶变种金叶接骨木(Sambucus Canadensis． ＇
Aurea＇)。
1． 3 方法
1． 3． 1 色谱条件:色谱柱，美国 Thermo ODS －
2HYPERSIL(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ;流动相:甲醇
－ 0． 2%醋酸水溶液(45 ∶ 55) ;流速 1 ml /min，柱温
30 ℃，进样 10 μl，采集时间 16 min。
1． 3． 2 对照品溶液的制备:精密称取干燥至恒重的
芦丁对照品 5． 0 mg、槲皮素对照品 2． 8 mg，共置 5 ml
容量瓶中，加入适量甲醇超声溶解，定容，得含芦丁
1． 0 mg /ml 和槲皮素 0． 56 mg /ml 的混合对照品溶
·1221·宁夏医学杂志 2012 年 12 月第 34 卷第 12 期 Ningxia Med J，Dec. 2012，Vol 34，No. 12
DOI:10.13621/j.1001-5949.2012.12.012
液。按“2． 1”项下色谱条件进样检测，得色谱图 1。
1． 3． 3 供试品溶液的制备:分别取金叶接骨木的叶
和茎药材，粉碎，过 80 目筛，60℃干燥至恒重。精密
称取适量(约生药 0． 5 g) ，分别置 200 ml 具塞三角
锥形瓶中，加入甲醇 10 ml，超声提取 40 min，冷却，
过滤，滤液水浴蒸干，残渣分别用甲醇溶解并定容至
10 ml容量瓶中得金叶接骨木叶和茎药材供试品溶
液。按“2． 1”项下色谱条件进样检测，得色谱图 2。
1． 3． 4 线性范围考察:取上述混合对照品溶液，分
别稀释 1、2、5、10、20、100 倍，各取 10 μl 进样检测，
记录色谱图。以峰面积(A)为横坐标，浓度(C)为纵
坐标进行线性回归。芦丁和槲皮素回归方程分别为
C =1 × 10 －7A + 0． 0014(r = 0． 9995)和 C = 6 × 10 －
8A －0． 0071(r = 0． 9998) ，表明芦丁和槲皮素分别在
0． 01 ～ 1 mg /ml和 0． 0056 ～ 0． 56 mg /ml浓度范围内
与各自的峰面积呈良好的线性关系。
1． 3． 5 稳定性试验:分别取室温放置 0、2、4、8、12 h
的金叶接骨木叶供试品溶液 10μl 进样检测，记录色
谱图，计算芦丁和槲皮素的峰面积 RSD 分别为
0． 37%和 0． 44%，表明供试品溶液在 12 h内稳定。
1． 3． 6 精密度试验:取“2． 2”项下对照品溶液，重
复进样 6 次，计算芦丁和槲皮素的峰面积 RSD 分别
为 0． 23%和 0． 31%，表明仪器的精密度良好。
1． 3． 7 重复性试验:取同一批次金叶接骨木叶供试
品粉末 5 份，分别按“2． 3”项下方法制备供试品溶液
并进样检测，记录色谱图，计算 5 份供试品溶液芦丁
和槲皮素的峰面积 RSD分别为 1． 83%和 2． 01%，表
明方法重复性良好。
1． 3． 8 加样回收率:精密称取 6 份已知芦丁(5． 30
mg /g)和槲皮素含量(0． 48 μg /g)的同一批次金叶接
骨木叶粉末各约 0． 5 g，分别精密加入芦丁对照品溶
液(1． 0 mg /ml)和槲皮素对照品溶液(0． 056 mg /ml)
各 2． 5 ml和 4 μl，按“2． 3”项下方法制备供试品溶
液，进样 10 μl 检测，计算平均加样回收率。结果显
示，芦丁和槲皮素的平均加样回收率分别为
101． 69% (RSD = 2． 75%)和 98． 41% (RSD =
2． 82%) ，该回收率符合要求。
1． 4 统计学方法:计量资料比较采用 t检验，以 P ＜
0． 05 为差异有统计学意义。
2 结果
采集宁夏银川引种金叶接骨木 1 年生叶和茎，
分别按“2． 3”项下方法制备供试品溶液进样 10 μl
检测，计算样品中芦丁和槲皮素的含量，结果见表 1。
金叶接骨木中芦丁含量高，其中叶中芦丁的含量远
远高于叶中槲皮素含量(P ＜ 0． 05)。金叶接骨木茎
中芦丁含量较低(0． 66 mg /g) ，在金叶接骨木茎中没
有检测到槲皮素。
表 1 金叶接骨木叶和茎中芦丁及槲皮素含量测定结果(珋x ± s)
部位 n 芦丁含量(mg /g) 槲皮素含量(μg /g)
叶 6 5． 30 ± 0． 12 0． 48 ± 0． 01
茎 6 0． 66 ± 0． 02 －
t值 6． 41
P值 0． 00
3 讨论
3． 1 提取工艺的确定:本结果发现，以甲醇为溶剂，
回流提取和超声提取的芦丁和槲皮素峰面积和加样
回收率相近，但超声提取只需 40 min，且重复性好，
故选用超声法提取。
3． 2 色谱条件的摸索:在对供试品和对照品溶液进
行全波长扫描时，两者的最大吸收波长在 360 nm 附
近，故选用 360 nm 对样品进行含量测定。同时，实
验系统比较了甲醇、甲醇 －醋酸 －水、乙腈、乙腈 －
醋酸 －水三元等度和梯度洗脱，发现在不加酸的流
动相中，无论是甲醇或乙腈采用等度或梯度都不能
得到很好的峰形，峰拖尾较严重;在流动相中加入
0． 2%的醋酸后，芦丁和槲皮素的峰形大大改善。当
甲醇 － 0． 2%醋酸水溶液以 45 ∶ 55 的比例进行等度
洗脱时，供试品溶液能够在 15 min 内完成检测且基
线平稳，芦丁(tR = 5． 90)和槲皮素(tR = 12． 91)分离
度良好。
3． 3 含量测定结果:金叶接骨木中芦丁的含量远远
高于槲皮素的含量，这与文献报道有出入［3 － 4］。分
析原因，可能是文献中是用薄层色谱对该植物中是
否含有槲皮素进行了定性，并没进行定量测定。
本实验采用 HPLC法对金叶接骨木中的芦丁和
槲皮素进行了含量测定，发现芦丁的含量较高，可作
为金叶接骨木质量控制的指标之一。虽然文献报道
有槲皮素，但本文结果显示槲皮素在金叶接骨木中
的含量非常低，不宜作为定性和定量指标。此结果
可为开发金叶接骨木的药用价值提供实验数据。
［参考文献］
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［2］ 廖琼峰，毕开顺．接骨木属植物的化学成分和药理活性研究进
展［J］．中国中药杂志，2004，(29) :109 － 111．
［3］ 马玉花，刘俊文，赵淑红．金叶接骨木的生药学实验研究［J］．云
南中医中药杂志，2009，30(10) :47 － 49．
［4］ 赵淑红，高亦珑，徐力生，等． 银川引种金叶接骨木药用价值初
探［J］．宁夏医学杂志，2010，32(1) :58 － 60．
［收稿日期］2012 － 01 － 04 ［责任编辑］马兴忠
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