全 文 ：胆木注射液中２种主要生物碱的质谱裂解行为解析
及ＨＰＬＣ含量测评
朱粉霞１，贾晓斌１，李秀峰２，王静静１，陆婷婷１
（１江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药口服释药系统重点研究室，江苏 南京　２１００２８；２海南制药厂有限公司
黎药工程中心，海南 五指山　５７２２００）
摘要：目的　采用质谱技术对胆木注射液中２种主要生物碱进行定性分析，并以ＨＰＬＣ测评其含量。方法　在正离子模
式下，以电喷雾离子源分析了胆木注射液中异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷的质谱裂解行为；采用 ＨＰＬＣ测定了胆
木注射液中异长春花苷内酰胺的含量，以异长春花苷内酰胺为参照，评估了短小蛇根草苷的含量。结果　解析了胆木注
射液中异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷的质谱碎片，并测评了上述２种成分的含量。结论　获得了胆木注射液中主
要生物碱的质谱断裂特点和含量，为胆木注射液的质量控制和再评价提供研究依据。
关键词：胆木注射液；异长春花苷内酰胺；短小蛇根草苷；电喷雾质谱；高效液相色谱
中图号：Ｒ２８４ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２－０４８２（２０１１）０５－０４９２－０３
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　Ｌａｗｓ　ｏｆ　Ｔｗｏ　Ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｂｙ　ＥＳＩ－ＭＳ　ａｎｄ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｗｏ　Ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　ｉｎ　Ｄａｎｍｕ　Ｉｎｊｅｃ－
ｔｉｏｎ
ＺＨＵ　Ｆｅｎ－ｘｉａ１，ＪＩＡ　Ｘｉａｏ－ｂｉｎ１，ＬＩ　Ｘｉｕ－ｆｅｎｇ２，ＷＡＮＧ　Ｊｉｎｇ－ｊｉｎｇ１，ＬＵ　Ｔｉｎｇ－ｔｉｎｇ１
（１．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｎｅｗ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｉｃａ，Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ，２１００２８，Ｃｈｉｎａ；２．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｃｅｎｔｅｒｓ　ｆｏｒ　Ｌｉ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈａｉｎａｎ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｆａｃｔｏｒｙｃ．，ＬＴＤ．，Ｗｕｚｈｉｓｈａｎ，５７２２００，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｌａｗｓ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｍａｊｏｒ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｂｙ　ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ　ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ（ＥＳＩ）ｍａｓｓ　ｓｐｅｃ－
ｔｒｏｍｅｔｒｙ　ａｎｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　ｉｎ　Ｄａｎｍｕ　Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｂｙ　ｓｅｔｔｉｎｇ　ＥＳＩ
ｓｏｕｒｃｅ　ａｔ　ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ　ｍｏｄｅ，ｔｈｅ　ＭＳ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｓｔｒｉｃｔｏｓａｍｉｄｅ　ａｎｄ　ｐｕｍｉｌｏｓｉｄｅ　ｗｅｒｅ　ａｃｑｕｉｒｅｄ．ＨＰＬＣ　ｗａｓ　ａｐｐｌｉｅｄ
ｆｏｒ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｓｔｒｉｃｔｏｓａｍｉｄｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｕｍｉｌｏｓｉｄｅ＇ｓ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　Ｄａｎｍｕ　Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．ＲＥＳＵＬＴＳ　
Ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ｓｔｒｉｃｔｏｓａｍｉｄｅ　ａｎｄ　ｐｕｍｉｌｏｓｉｄｅ　ｉｎ　Ｄａｎｍｕ　Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｄａｎｍｕ　Ｉｎ－
ｊｅｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｆｉｎａｌｙ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｔｈｅ　ｐｒｏｆｉｌｅｓ　ｏｆ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ａｒｅ　ｏｆ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ａｓｓｉｓｔａｎｔ　ｔｏ　ｓｅｔ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｒｉｔｅｒｉａ　ａｎｄ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄａｎｍｕ　Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：Ｄａｎｍｕ　Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；ｓｔｒｉｃｔｏｓａｍｉｄｅ；ｐｕｍｉｌｏｓｉｄｅ；ＥＳＩ－ＭＳ；ＨＰＬＣ
　　胆木注射液是由胆木单味药材开发研制而成
的中药注射剂，临床常用于治疗上呼吸道感染、支
气管炎、急性扁桃体炎及咽喉炎等症。本文以电
喷雾电离质谱技术研究了胆木注射液中异长春花
苷内 酰 胺 （ｓｔｒｉｃｔｏｓａｍｉｄｅ）和 短 小 蛇 根 草 苷
（ｐｕｍｉｌｏｓｉｄｅ）及其异构体的质谱行为，探讨了其
裂解规律。异长春花苷内酰胺在胆木药材中含量
非常高［１］，对照品相对容易得到，而短小蛇根草苷
对照品较难获得，这直接限制了用常规外标法实
现其多指标质量控制的设想。本文借鉴２０１０年
版《中华人民共和国药典》黄连［２］中４个主要成分
的含量测定，即用一个对照品的测定来评估４种
成分的含量，解决对照品缺乏问题。以 ＨＰＬＣ测
定了胆木注射液中异长春花苷内酰胺的含量，并
以异长春花苷内酰胺为参照，评估了短小蛇根草
苷的含量，为胆木注射液的质量控制和再评价提
供研究依据。
—２９４—
南京中医药大学学报２０１１年９月第２７卷第５期
ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＮＡＮＪＩＮＧ　ＴＣＭ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　Ｖｏｌ．２７　Ｎｏ．５　Ｓｅｐｔ．２０１１
收稿日期：２０１１－０３－１１；修稿日期：２０１１－０７－１５
作者简介：朱粉霞（１９７７－），女，陕西山阳人，江苏省中医药研究院助理研究员。
DOI:10.14148/j.issn.1672-0482.2011.05.016
１　材料
１．１　仪器
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＨＰＬＣ（美国 Ａｇｉｌｅｎｔ公司）；Ｑ－
ＴＯＦ　ＭｉｃｒｏＴＭ－ＭＳ（美国 Ｗａｔｅｒｓ公司）；ＡＢ１３５－Ｓ
分析天平（瑞士 ＭＥＴＴＬＥＲ　ＴＯＬＥＤＯ公司）。
１．２　试药
胆木注射液：海南制药厂有限公司。异长春
花苷内酰胺：江苏省中医药研究院制备，纯度大于
９８％。甲酸、甲醇、乙腈（色谱纯，Ｔｅｄｉａ）。
２　方法与结果
２．１　ＬＣ－ＭＳ分析条件
２．１．１　色谱条件
色谱柱：Ｘ－ｓｅｌｅｃｔ　Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５
μｍ，Ｗａｔｅｒｓ）；流动相：乙腈－水溶液，梯度洗脱条
件：０～１０ｍｉｎ，乙腈０％～５％，１０～６０ｍｉｎ，乙腈
５％～５０％，６０～７０ｍｉｎ，乙腈５０％～０％；柱温：
３０℃；检测波长：２２６ｎｍ；进样量：１０μＬ。
２．１．２　质谱条件
ＥＳＩ离子源，离子化方式：ＥＳＩ（＋）；扫描范
围：１００～８００ｍ／ｚ；毛细管电压：３　０００Ｖ；锥孔电
压：５０Ｖ；离子源温度：１５０℃；雾化气温度：３００
℃；锥孔气流速：２５０Ｌ／ｈ；雾化气流速：４００Ｌ／ｈ。
质谱测定时：在流动相的水溶液中加入０．１％的
甲酸。
２．２　对照品溶液和供试品溶液制备
对照品溶液的制备：精密称取异长春花苷内
酰胺对照品适量置于１０ｍＬ量瓶中，以甲醇定
容，制得１ｍｇ／ｍＬ的储备液。
量取胆木注射液１．０ｍＬ于１０ｍＬ量瓶中，
以蒸馏水定容，滤过，滤液作为供试品溶液。
１．短小蛇根草苷；２．短小蛇根草苷异构体；
３．异长春花苷内酰胺；４．异长春花苷内酰胺异构体
图１　胆木注射液的 ＨＰＬＣ图
２．３　异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷及其异
构体的质谱解析
２．３．１　异长春花苷内酰胺及其异构体的质谱解
析
异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷分别为吲
哚生物碱和喹啉生物碱。文献［１］报道异长春花
苷内酰胺和短小蛇根草苷异构体的结构，其２者
的３位均为α－Ｈ取向，异构体３位为β－Ｈ取向。
由图２可知，在正离子模式下，异长春花苷内
酰胺形成质荷比为４９９．３的［Ｍ ＋ Ｈ］＋和５２１．３
的［Ｍ ＋Ｎａ］＋，ｍ／ｚ　３３７．２是异长春花苷内酰胺
失去一分子葡萄糖产生，ｍ／ｚ　２６７．２是３３７．２失
去碎片ＣＨ２＝ ＣＨ－ＣＨ－ＣＨ－ＯＨ 产生，详细碎片
解析结果［３］见图３。图１上４号峰的质谱裂解碎
片和紫外吸收同异长春花苷内酰胺，根据文献［１］
推测其为异长春花苷内酰胺异构体（喜果苷）。
图２　对照品（Ａ）和样品（Ｂ）中的异长春花苷内酰胺质谱图
图３　异长春花苷内酰胺及其异构体的碎片离子
２．３．２　短小蛇根草苷及其异构体的质谱解析
图１中的１号峰在正离子模式下质谱裂解见
图４，ｍ／ｚ　５１３．４为［Ｍ ＋ Ｈ ］＋，ｍ／ｚ　３５１．２为基
峰离子，是５１３．４失去一分子葡萄糖（１６２．２）产
生，ｍ／ｚ　２８１．２是 ｍ／ｚ　３５１．２失去碎片 ＣＨ２＝
ＣＨ－ＣＨ－ＣＨ－ＯＨ产生，推测其为短小蛇根草苷，
详细碎片解析结果见图５。图１上２号峰质谱裂
解碎片和紫外吸收同短小蛇根草苷，根据文献［１］
—３９４—朱粉霞，等：胆木注射液中２种主要生物碱的质谱裂解行为解析及 ＨＰＬＣ含量测评　第５期
推测其为短小蛇根草苷异构体。
图４　短小蛇根草苷质谱图
图５　短小蛇根草苷及其异构体的碎片离子
２．４　含量测定
２．４．１　精密度和稳定性
取同一供试品溶液，连续进样６次，记录异长
春花苷内酰胺的保留时间和峰面积，保留时间的
ＲＳＤ值０．０８４％，峰面积的ＲＳＤ值１．０２％，表明
仪器精密度良好。
取同一供试品溶液，分别于０、１、２、４、１２和
２４ｈ进样测定，异长春花苷内酰胺峰的保留时间
的ＲＳＤ值０．０８２％，峰面积的ＲＳＤ值１．９３％，表
明样品在２４ｈ内稳定。
２．４．２　重现性试验
取６支胆木注射液（每支２ｍＬ），混匀，按“供
试品溶液的制备”项下制备６份供试溶液，进行重
现性试验。记录异长春花苷内酰胺的保留时间和
峰面积值，保留时间的ＲＳＤ 值０．０９８％，峰面积
的ＲＳＤ值１．５２％，表明方法的重现性好。
２．４．３　线性范围考察
分别移取异长春花苷内酰胺对照品储备液
０．２５、０．５０、１．０、１．５、２．５ｍＬ置１０ｍＬ量瓶内，
以水定容，制得２５、５０、１００、１５０、２５０μｇ／ｍＬ的系
列标准液。吸取上述溶液各１０μＬ进样，测定，以
峰面积为纵坐标，浓度（μｇ／ｍＬ）为横坐标绘制标
准曲线，计算回归方程为Ｙ＝５２．９３７　Ｘ－８１．９１２，
ｒ＝０．９９９　３，线性良好。线性范围２５～２５０μｇ／
ｍＬ。
２．４．４　加样回收率实验
取２．２项下对照品储备液，配制成含异长春
花苷内酰胺的浓度为２００μｇ／ｍＬ的对照品溶液，
分别精密量取对照品溶液１．０ｍＬ和已知含量的
供试品０．５ｍＬ　６份，置５ｍＬ量瓶中，按“供试品
溶液的制备”方法操作，测定回收率分别为
９８．６％，９５．７％，１０１．１％，１０４．６％，１０３．９％，
１０４．７％，平均回收率为１０１．４％。
２．４．５　样品测定
分别精密吸取供试品和０．１ｍｇ／ｍＬ标准品
溶液各１０μＬ注入高效液相色谱仪，测定３次，以
异长春花苷内酰胺对照品的峰面积为对照，分别
计算异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷的平均含
量，并以短小蛇根草苷色谱峰与异长春花苷内酰
胺色谱峰的相对保留时间确定短小蛇根草苷的出
峰位置，结果见表１。
表１　胆木注射液中异长春花苷内酰胺和
短小蛇根草苷的含量
批号
相对保留
时间
短小蛇根草苷／
（ｍｇ·ｍＬ－１）
异长春花苷内酰／
（ｍｇ·ｍＬ－１）
１００１０１　 ０．７４　 ０．１７　 ０．８６
１００１０２　 ０．７４　 ０．２６　 １．２０
１００２０１　 ０．７４　 ０．１７　 ０．８９
１００７０１　 ０．７３　 ０．２１　 １．３４
３　讨论
异长春花甘内酰胺和短小蛇根草苷的紫外最
大吸收波长分别为２２６ｎｍ和２４５ｎｍ。当以２２６
ｎｍ为含量测定波长时，短小蛇根草苷的吸收也
较强，故本实验选择２２６ｎｍ为测定波长。
通过本文对胆木注射液中２种主要生物碱异
长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷质谱断裂特点的
分析，得出其裂解规律；同时发现作为异构体，其
质谱裂解一致，为利用质谱技术分析胆木及其制
剂中生物碱类化学成分提供了基础。以 ＨＰＬＣ
测定了胆木注射液中异长春花苷内酰胺的含量，
并以异长春花苷内酰胺为参照，评估了短小蛇根
草苷的含量，为胆木注射液的质量控制和再评价
提供研究依据。
参考文献：
［１］宣伟东．中药胆木和云南狗牙花活性成分研究［Ｄ］．
上海：第二军医大学博士学位论文，２００５．
［２］国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［Ｓ］．北
京：中国医药科技出版社，２０１０：２８５．
［３］廖琼峰，谢智勇，张蕾，等．吴茱萸中吲哚喹唑啉类生
物碱和吴茱萸内酯的质谱裂解分析［Ｊ］．中药材，２００８，３１
（５）：６７３－６７６． （编辑：李伟东 董宇）
—４９４— 南京中医药大学学报２０１１年９月第２７卷第５期