全 文 ：US H Z IH E N ME D I C IN E A N D M A TE R IA ME D A E I C RS EA R CH Z ) (X 7V O L
.
18 N O
.
9 时珍国医国药 20 7年第 8 1卷第 9 期
生物有效性的一种重要措施。 通常用水 、稀盐酸或缓冲液作溶出
介质 。 因乌索酸在水及酸性溶液中几乎不溶 ,在乙醇中溶解 ,若
用无水乙醇为溶出介质 , 虽增加了溶解性 ,但使用乙醇仅适用于
少数药物或制剂 ,故不能可靠地用来预测药物的生物有效性 。 因
此 ,选择 0 . 5 % 十二烷基硫酸钠溶液为溶出介质 , 在 37 ℃ 时对乌
索酸有较好的溶解性。 但溶出液样品在室温放置一段时间后 , 出
现细微的针状结晶 。 因此取出的溶出液要立即加人等量甲醇混
匀 ,避免乌索酸析出 。
3
.
3 乌索映在制剂中的存在状态 采用 Em po w er 色谱软件适应
性模块对色谱峰纯度分析 , 对照品和样品中乌索酸色谱峰的纯度
角值小于阑值 ,纯度角线均位于自动闭值线下方 ,证实色谱峰为
单一组分吸收峰 ;采用光电二极管阵列检测器对乌索酸对照品和
固体分散体溶液在 190 一 450 n m 波长范围内进行紫外扫描 ,紫外
光谱经归一化后完全重合 , 固体分散体中乌索酸的最大吸收波长
为 2 02 . 2 n m ,与乌索酸对照品相同 ; 比较乌索酸对照品和固体分
散体样品红外光谱 ,乌索酸的拨基峰位于大约 1 71 1 C m 一 ’ 处 , 而
在乌索酸固体分散体的红外光谱中碳基的吸收峰有明显变化 , 在
大约 1 6 6() C m 一 ’处有一组峰 ,说明乌索酸与 P v P 一 3K o 之间发生
了分子间的氢键作用 ,使拨基峰红移 ,表明固体分散体中乌索酸
和载体分子间除物理作用以外 ,无化学键生成 ,仍与单体形式存
在 ,乌索酸分子中的梭基与 PV P 一 3K O 分子中的氧形成氢键 , 增
加了两者相互间的作用力 ,从而改善乌索酸的溶解度 ,提高其溶
出速度。 证实在制备乌索酸固体分散体胶囊的过程中 ,乌索酸分
子与载体间无化学键生成 ,分子结构亦无改变 。
3
.
4 Hr LC 方法的建立 采用 H P LC 法测定制剂和溶出介质中
乌索酸的含量 ,操作简便 、 快速 、 精密度高、 数据准确。 乌索酸在
水中的溶解极小 ,选用 0 . 5 % 十二烷基硫酸钠水溶液做溶出介
质 ,能有效增加乌索酸的溶解度 ,测量中载体 VP P 一 3K 0 和介质
十二烷基硫酸钠对乌索酸的测定均无干扰。
参考文献 :
〔 1 」 肖坤福 , 郑云法 ,刘成左 , 等 . 熊果酸的研究进展【J] . 时珍国医 国
药 , 2X( 只 , 16 ( 12 ) : 129 8 .
【2 」 李宝红 , 张立坚 ,庄海旗 , 等 . 蛇床子素固体分散体的制备与分析
【J〕. 华东理工大学学报 , 2 0( 抖 , 3 9 ( 5 ) : 5 98 .
【3 」 向大雄 , 陶显斐 ,王 峰 ,等 . 齐墩果酸固体分散体形成和增溶机制
研究【J] . 中草药 , 2 0 2 , 3 3 ( 4 ) : 3 1 .
〔4 〕 顾宜 , 高苏莉 ,杨春娥 , 等 . 齐墩果酸固体分散体胶囊的溶出度测定
及 W e i bu ll 分析 [ J ] . 解放军药学学报 , 2以拓 , 2 2 ( l ) : 5 8 .
【5 」 陈 浩 , 田景振 , 刘继勇 , 等 . 固体分散制剂技术【J] . 山东中医杂
志 , 20以〕 , 19 ( 5 ) : 304 .
【6 〕 何国熙 ,李娟 . 固体分散体技术在药剂学上的应用【J〕. 广东药学院
学报 , 199 9 , 15 ( l ) : 3 3 .
反相高效液相色谱法测定岩黄连药材中岩黄连碱的含量
韦 i己青 , , 蒋伟哲 2 , 蒋水元 ’ , 蒋运生 ’ ` ,李倩兰 2 , 凌 玲 ,
( 1
. 广西壮族自治区中国科学院 · 广西植物研究所 ,广西 桂林 541 以兀 ;
2
. 广西医科大学第一附属医院新药研究开发中心 , 广西 南宁 53 0 27 )
摘要 : 目的 建立岩黄连药材中岩黄连碱的含量测定方 法 。 方法 采用反相高效液相 色语 ( RP 一 H PL c) 法 , 以 乙 晴 : 水
( 50
:
50
, 内含 0 . 34 % 磷酸二氮钾和 0 . 17 % 十二烷基硫酸钠 ) 为流动相 , 流速为 1 m F m in , 检测波长为 347 n m , 柱温 20 ℃ ,
进样量为 20 闪 ,外标法计算含量 。 结果 岩黄连碱在 0 . 140 4 一 .2 808 此 内峰面积与对照品的进样童呈良好的线性关系 ,其回归方程为 r = Z x 一o 6 x 一 5 639 . 1 ( : = 0 . 9卯 9 8 ) 。 平 均回收率分别为 9 5 . 5% ,卯 . 4 % ,卯 . 3% 沂5刀 分 别为 1 . 27% ,
1
.
1 %
,
1
.
06 %
。 结论 所建立的 RP 一 H PL C 含量测定方法简便 、 准确 、 专属性强 、 重现性好。 为控制 药材岩黄连质童标
准提供了依据 。
关键词 : 岩黄连碱 ; 反相高效液相色谱法
中图分类号 : 2R 84 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 10 8刃8 0 5 ( 2X() 7 ) 09 一07 习3
D e te r m l n a it o n o f ht e C o n t e n t o f
一
D e h y d or ca 村 d in e i n oC 口内肠 s ax ic o勿 B un it n g 勿 R P
一 H P L C
桃1 J i 一q i n g , , J IA N G w e i 一 z h e , , J IA N e s h u i一 y u a n ’ , JIA Ne Y u n 一 s h e n g , ’ , Ll Qi a n 一 l a n , , u N e L i n g ,
( 1
.
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A b st ar e t : o bj ec d v e 肠 d e v e l o p a n e w m e thod fo r d e t e mr in a t io n o f th e e o n t e n t o f d e h yd ocr a v id in e in oC 李妞自 s ax 初 la Bu n ·
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M e ht od s Th
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o la B u n t i n g w as d e t e mr i
n e d b y RP 一 H P L C , u s in g ac e ot n而 l e 一 w a一e r ( V
,
V = 50
:
50
,
0
.
3 4 % 因 tas s i u m d i h y d or g e n p hos p h a t e a n d 0 . 17 % s od iu m la u 叮1 s u lfa t e ) as m o b i le Phase , 1 m l/ m i n , w i th 34 7
n m o f d e t e e t io n w a v e le n gt h
, th e t e m畔 ar t u er w as 20 ℃ . T h e i nj e e t i o n v o lu m e w as 20 卜1 a n d th e e x t em al s ant d alrt w as u s e d
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w e er 9 8
.
8 %
,
9
.
4 %
,
9
,
3% an d x
.
z 7%
, 一 11% , 1 . 06 % , er s p e e . iv e ly
.
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K e y w o r ds : D
e hy dorC
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n e ; Rp 一 H p CL
收稿日期 : 2侧巧一 12 一8 ; 修订日期 : 2 0 7刀5 一 17
若金项目: 广西科技攻关项 目资助 ( No . 桂科攻 02 3 50 2 一 5)
作密简介 : 书记青 ( 19 6 8 一 ) ,女 (汉族 ) , 广西桂林人 , 现任广西植物研究所
工程师 , 学士学位 , 主要从事科研项 目管理和植物引种栽培研究工作 .
. 组讯作者简介 : 蒋运生 ( 19 6 一 ) , 男 (瑶族 ) , 广西桂林人 ,现任广 西壮 族
自治 区中国科学院副研究员 , 学士学位 , 主要从事植物 引种栽培和 生理生
态研究工作 .
岩黄连 co 叮面 115 s ax ic o la B u nt i ng , 又名石生黄董 ,紫董科紫茧
属多年草本植物 [ ’ 一 ’ } 。 具有显著的抗菌 、消炎 、镇痛和安定作用 ,
是桂西北山区常用消炎止痛 、排毒 、 治疗急慢性肝炎和肝硬化等
疾病的一种中草药 [ ’ .al , 其化学成分含有t’] : 脱氢卡维丁 ( d e -
h y dcor
a v id in e )
,小巢碱 ( be ber ir n e ) , ( 土 ) e a v id i n e , ( 土 ) thal ie itr fo -
li
n e , d e h y d ,
a v id i n e
,
(
一 ) 13 p 一 h y doxr
y s t i lo P in e
,
(
+ ) 四氢巴 马
·
2 0 7 7
·
时珍国医国药 7 200年第 1 8卷第 9期 US H忆 E H NM E I D CI NE A M AE AM E A I I N D T R D R F C只下 A R CH Z) (X7 VO L .1 8 N 0 . 9
汀 [ (土 ) te t ra hy I dD pa lm ai te n」, ( 一 )斯库来碱 [ ( 一 ) s e ou l e ir n e ] ,
白屈菜红碱 ( e h e le yrt h ir n e ) , ( 一 ) 四氢非洲防己胺 [ ( 一 ) et atr -
h y d舰 ol u m b a n l ine 」,原阿片碱 ( port 叩 ine ) ,卡维丁 ,延胡索甲素等
多种生物碱 ,其主要活性成分为岩黄连碱 ( C 2 . H 20 0 4 N , 即脱氢卡
维汀 ) ,生物碱含量高低直接影响药材质量和疗效 。 岩黄连植物
分布局限于石灰岩山区 , 属石山特有种川 。 目前 ,国内外对岩黄
连的研究主要集中在岩黄连总生物碱的成分分析 5[] , 引种栽
培 〔, 一 6〕和药理作用汇, 一 ’ 。〕的研究 , 而对不同地区的岩黄连中岩黄
连碱含量差异的研究未见报道。 本实验主要建立了岩黄连中岩
黄连碱含量测定方法 ,并对不同地区的岩黄连中岩黄连碱含量进
行测定 ,为岩黄连质量考查提供参考 ,这对于指导岩黄连的标准
化种植及合理采收具有重要意义 。
1 仪器与试药
1
.
1 仪界 CL 一 吠以〕D 高效液相色谱仪 (南宁威玛龙色谱科技
有限公司 ) , S曰 rt o n u , MEZ 巧 (S 德国赛多利斯 )电子天平 , B32 0 S
超声处理器 (上海必能信超声有限公司 ) , RE 一 52 A 型旋转蒸发
仪 (上海亚荣生化仪器厂 ) 。
1
.
2 试剂 乙睛 (色谱纯 , 美国 ET DI A 公司 ,肠 t 506 126 ) , 甲醇
(色谱纯 , 天津四友生物医学技术有限公司 ) ,磷酸二氢钾 ( 分析
纯 , S CR C 国 药集 团 化学 试剂 有 限 公 司 , 批 号 : 肠 t . N .o
FZ o s lZ 巧 ) , 十二烷基硫酸钠 ( 分析纯 ,北京化学试剂公司 ,批
号 : 020 304 ) ,水为高纯水 , H a (分析纯 ,广东省廉江市爱廉化试
剂有限公司 ,批号 : 0 51 0 18 一 2 ) ,氨水 (分析纯 ,广东光华化学厂
有限公司 ,批号 : 2X() 5 122 2 ) ,氯仿 ( 分析纯 ,成都市科龙化工试剂
厂 ,批号 : 200 5 1228 ) 。
1
.
3 试药 岩黄连碱对照品 ( 中国药品生物制品检定所提供 ,批
号 1116 5 1 一 20 301 ,供含量测定用 ) ;药材岩黄连供试品 (东兰县
达文村示范基地 、 东兰县隘洞镇拉板村 、 东兰县兰木乡同仕村提
供 ) 。
2 方法与结果
2
.
1 色谱条件与系统适用性实验 用十八烷基硅烷键合硅胶为
填充剂 , 乙睛 : 水 ( 5:0 50 , 内含 0 . 34 % 磷酸二氢钾和 0 . 17 % 十
二烷基硫酸钠 )为流动相 , 检测波长为 347 n m ,理论塔板数按岩
黄连碱峰计算应不低于 6 砚旧。
2
.
2 对照品溶液的制备 准确称取岩黄连碱对照品适量 ,精密
称定 ,加流动相制成每毫升含 25 林g 岩黄连碱的溶液 , 即得 。
2
.
3 供试品溶液的制备 取本品约 10 9 ,剪碎 ,加人 20 倍量 l %
H CI 溶液 ,煎煮 30 m in ,取水提液 ,药渣再重复上一步骤 ,过滤 ,合
并两次水提液 ,加氨水调 p H 至 or ,析出沉淀 , 过滤得清膏 , 80 ℃
干燥 Z h ,加人 20 倍量氯仿回流提取 30 m in ,过滤 ,得黄绿色澄清
液体 ,将滤液减压蒸馏 ,挥干氯仿 ,精密加入 25 . o inl 流动相超声
溶解 , 0 . 45 卜m 微孔滤膜滤过 ,取续滤液 , 稀释 25 倍 (取 l ml 用
流动相定容至 25 耐 容量瓶 ) ,即得 。
2
.
4 阴性对照溶液的制备 以 2 . 1项的流动相为阴性对照溶液 。
2
.
5 阴性干扰实脸 精密吸取对照品溶液 、供试品溶液 、 阴性对
照溶液各 20 闪注入液相色谱仪中 ,色谱图见图 l 。 由色谱图可
知 ,在与对照品色谱峰保留时间相应的位置上 ,供试品溶液具有
相同保留时间的色谱峰出现 ,而阴性液在此峰位无吸收 , 对本品
中岩黄连碱的测定无干扰。
2
.
6 标准曲线的制定 称取岩黄连碱 7 . 02 m g , 置 10 ml 量瓶中 ,
加流动相使溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对照品贮备溶液 。 吸
取上述对照品贮备溶液 0 . 1 , 0 . 2 , 0 , 5 , 1 . 0 , 2 . o ml ,分别置 10 . 0
mI 量瓶中 ,加流动相稀释至刻度 ,摇匀 ,分别作为对照品溶液 (浓
度分别为 7 . 02 , 14 . 04 , 3 5 . 1 , 70 . 2 , 14 0 . 4 卜酬nlI ) , 按色谱条件分
别进样测定 (进样量 20 闪) 。 以岩黄连碱对照品进样量 ( 卜g )为
横坐标 ( X ) ,峰面积积分值为纵坐标 ( )Y ,绘制标准曲线 ,则回归
方程为 :
v = 2 x l o 6 x 一 5 6 39
.
1 (
r = 0
. 卯9 9 8 )
结果表明 : 当进样量在 0 . 140 4 一 2 . 808 此 范围内时 ,岩黄连
碱进样量与峰面积呈良好的线性关系。 结果见表 l 。 标准曲线
见图 2 。
7 0
.
0
5 0
.
0
3 0 0
1 0
.
0
一 1 0
.
0
C
1 0 0
.
0
7 4
.
5
{
J i、
_
一 2 “禹 3 . 0 6 . 0 9 . 0 1 2 . 0 1 5 . 0 1 8 0
一 2 ”杨
a 一对照 品溶液
6
.
0 9
.
0 12
.
0 1 5
,
0 1 8 0
b 一供试品溶液 c 一阴 性对照品 溶液
图 1 对照品 、 供试品和阴性对照品的 HP LC 圈
表 l 线性关系
进样量/ 此 峰面积
0 140 4
0
.
2 80 8
0
.
7 02 0
1
.
4 04 0
2
.
808 0
2 5 7 5 96
5 16 5 15
1 27 1 28 7
2 54 1 784
5 13 7 13 4
6 0 n 0 0 0 0
丫二 Z E 本 0 6井 5 6 3 9
彩月尝
进样量 m / p g
图 2 标准曲线
2
.
7 精密度实脸 取 “ 2 . 6 ” 项下对照品 ,分别连续测定 6 次 ,结
果岩黄连碱峰面积值的人S D 小于 2 % 。 结果见表 2 。 实验表明 ,
本法的精密度良好。
表 2
序号 峰面积值
1 2 7 2 4 2 8
1 2 72 165
1 2 72 2 8 1
1 2 72 72 1
1 2 7 1 34 8
1 2 72 58 0
精密度实验结果
平均值 召5刀( % )
1 27 2 25 4 0
.
0 3 8 3
1,`J
4
心」
·
2 0 7 8
·
U H SI ZHE NM D IC I E N EA D M A N TR IA ME ED I CA R E SA R EC H Z的7 VO L . 18 N 0. 9 时珍国医国药 2 ) ( X7 年第 18 卷第 9期
2
.
8 重复性实脸 精密量取同一供试品 (东兰县隘洞镇拉板村 )
9份 (低 、 中 、 高剂量各 3份 ) , 按 “ 2 . 3 ” 项方法操作 , 分别进样
20 闪 ,测得岩黄连碱色谱峰面积 ,计算 五s 。 。 结果见表 3 。
明 ,在 12 h 内 ,供试品溶液稳定 。
裹 4 称定性实验结果
平均峰面积值 A 召S D (% )
裹 3 , 复性实验
峰面积 A
1 120 2 6 2
样品 取样 t
m /名 峰面积
岩黄连碱
含 t (% )
平均含 t
值 (铭 )
月 S D
(% )
5
.
7 38 49
5
.翻 2 13
5 7 26 48
10
.胶 5 6 1
10
.
198 83
10
.以 5 29
15
.
14 2 17
15
.
128醉
15
.
137 52
65 0 734
6 29 9 13
翻 6 025
1 125 165
1 156 529
1 l5() 86 l
1 6卯 392
1 7 33 246
1 7价 7 19
0
.
! 94
0
.
19 1
0
.
193
0
.
! 92
0
.
194
0
.
1%
0
.
192
0
.
1%
0
.
19 3
3 1 129 9 12
6 1 138 0 1 3 1 13 0 X() 5 1
.
02 8 4
9 1 117 146
12 1 1月4 6 94
2
.
10 加样回收率实脸 称取岩黄连碱对照品约 10 gm ,精密称
定 ,置 50 耐 量瓶中 ,加甲醇使溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对
照品溶液 。 按 “ 2 . 3 ”项下方法制备已知含量样品 ( 东兰县隘洞镇
拉板村 ) ,分别加人上述岩黄连碱对照品溶液 3 . 0 , 5 . 0 , 7 . 0 时 ,按
拟订的方法制备供试品溶液 ,共平行制备 9 份 ,分别进样测定 ,按
下式计算回收率 。 结果见表 5 。
.1,`凡」
0
.
193 0
.
89 5
2
.
9 称定性实验 取同一份供试品溶液 (东兰县隘洞镇拉板
村 ) ,每隔一定时间测定 1 次 ,共测定 5 次。 结果见表 4 。 实验表 回收率 (% )
二 加入对照 品 t ( gm )
x l (X) %
衰 5 加样回收率实验结果
标样浓度 加人体积
洲m l
加人值
爪 / m g
0
.
6 2 0 4
0
.
6 2 0 4
0
.
6 2 0 4
1
.
0 3 4 0
1
.
0 3 4 0
1 0 3 4 0
1
. 月4 7 6
1
. 月4 7 6
1
. 月4 7 6
实测值
刀口m g
0
.
62 4 8 1
0
.
6 3 1 5 3
0
. 创习 62
1
. 以6 4 6
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.
05 9 印
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.
03 6 46
1
.
4 5 8 5 1
1
.
4 7 1 14
1
.
4 1以
回收率
( % )
9 7
.
6
9 8
.
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9 9
.
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9 8
.
4
9 9
.
4
1《X) . 3
9 8
.
2
平均回收率
(% )
9 8 8
9 9
.
4 1
.
1 1
9
.
3 1
.
06
内、飞dé`曰气ùà7,沙
d一O八0只ù几R一托R。0弓we2,``,n一0
测定
次数
取样量
开口 g
10
.
0 13 5 8
9
.
9 4 8 19
10
.
15 5 4
10
.
2 07 2 5
10
.
0 5 1 8 1
9
.
8 4 4 5 6
10
.
15 5 4 4
9
.
9 4 8 19
10
.
10 3 6 3
样品含量
功 / m g
0
.
0 19 3
0
.
0 19 2
0
.
0 19 6
0
.
0 19 7
0
,
0 19 4
0
.
0 ] 9 0
0
.
0 19 6
0
.
0 19 2
0
.
0 19 5
,且,`门ù
2
.
n 含 t 测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各
20 闪 ,注人液相色谱仪 , 测定 , 即得 。 结果见表 6 。
表 6 岩黄连药材含 t 测定
样品 称样量爪 / g 峰面积
浓度
c/ mg
·
ml
一 几
含量
口『 n l g
百分含量
春票是墓鑫 , o · 0 1曰 4毒益最弃洞 , 0 · 0 , 3 ”
46 3 1 83 0
. 翻 0 05 25 0 32 38
(% )
0
.
2 50
129 96 3 0
.
0 30 93 19
.
3 3 1印 0 . 193
东兰县兰木
3 讨论
本实验采用岩黄连碱为季胺类生物碱 , 极性较大 , 用普通的
离子抑制色谱法无法达到 良好的分离 。 因此采用了离子对色谱
法 ,加人十二烷基硫酸钠作为离子对试剂 ,抑制其解离 ,能达到良
好的分离效果 。 最后我们发现以乙睛 一水为流动相 ,改变流动相
配比进行最佳流动相的选择 ,结果表明 ,岩黄连碱在乙睛 : 水 ( 50
:
50
, 内含 0 . 34 % 磷酸二氢钾和 0 . 17 % 十二烷基硫酸钠 ) 为流动
相与相邻组分峰分离度 R > 1 . 5 ,达到分离要求 , 能完全满足色谱
峰定量要求 。
不同产地药材含量测定结果表明 ,东兰县达文村示范基地所
产岩黄连中岩黄连碱含量最高 ,东兰县隘洞镇拉板村所产含量次
之 ,而东兰县兰木乡同仕村所产含量最低。
本实验采用经典的酸提碱沉法提取岩黄连中岩黄连碱 ,制成
清膏后采用甲醇 、醋酸乙醋和氯仿进行回流提取 ,结果发现用氯
仿回流其提取率大于用乙醇 、 醋酸乙醋提取 ,最后采用了氯仿作
为提取溶剂 。
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