全 文 ：·287·中国现代药物应用2016年6月第10卷第11期　Chin J Mod Drug Appl, Jun 2016, Vol. 10, No. 11
·实验研究·
医药理论结合起来 , 使中药大黄在中西医结合治疗当中发挥
更大的作用。
参 考 文 献
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［收稿日期 ：2016-03-21］
苦瓜子有效成分 RNA 酶 MC2 抑制肝癌细胞生长的
作用分析
黄炬辉
【摘要】　目的　对苦瓜子有效成分 RNA 酶 (RNase)MC2 抑制肝癌细胞生长的作用和机制进行分析
和探讨。方法　通过克隆形成和 MTT 对肝癌细胞增殖受到的 RNase MC2 的影响进行分析 ；选择流式细
胞技术对肝癌细胞周期受到的 RNase MC2 的影响进行检测 ；选择电镜对细胞自噬受到的 RNase MC2 的
诱导作用进行检测。结果　RNase MC2 会对肝癌细胞增殖起到显著的抑制作用 ；通过对 p21 和 p53 蛋
白表达进行上调能够导致 G2/M 期阻滞 ；通过 LC3- Ⅱ和 Beclin-1 蛋白表达的增加能够对细胞自噬起到
诱导作用。结论　RNase MC2 通过对 p21 的上调能够对 G2/ M 期阻滞起到诱导作用 , 通过对 Beclin-1 的
上调能够对细胞自噬起到诱导作用 , 从而对肝癌细胞中的增殖起到显著的抑制作用。
【关键词】　RNA 酶 MC2 ；肝癌细胞 ；抑制
DOI ：10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.11.203
作者单位 ：511483　广州市番禺区沙湾人民医院
在全球范围内肝癌细胞都属于一种常见的恶性细胞 , 因
此肝癌细胞治疗技术的进展受到了人们的普遍关注。肝癌细
胞的抗药性非常强 , 其具有很高的死亡率。现阶段肝癌细胞
的治疗技术仍然没有实现突破性进展 , 大量的研究表明［1］,
治疗肝癌细胞的一个非常重要的途径就是提取中草药中的有
效成分 , 对其中的抗肿瘤药物进行筛选。作为一种核糖核酸
酶 , RNase C2 属于一种饮食苦瓜子提取物 , 其能够对肝癌细
胞的生长起到抑制作用。本文对苦瓜子有效成分 RNase MC2
抑制肝癌细胞生长的作用和机制进行了分析和探讨 , 现报告
如下。
1　材料与方法
1. 1　材料　从美国模式培养物集存库 (ATCC) 购买 el-7402
和 QGY-7703 人类肝癌细胞株 , 由本院提供 RNase MC2, 通过
纯水溶解 RNase MC2, 使其成为 5.0 mmol/L 储存液的形式。
1. 2　方法　①细胞培养 ：在 CO2 培养箱中培养 el-7402( 为
对照 ) 和 QGY-7703 人类肝癌细胞株 , 具体培养条件为 ：选
择 10% 胎牛血清的 DMEM 作为培养基 ；温度为 37℃ ；湿度
为 95% ；CO2 浓度为 5%［2］。②通过 MTT 法测定细胞活性。
在 96 孔板中对 8000 个细胞进行 24 h 的培养 , 随后将浓度分
别为 20、5、1 μmol/L 的 RNase MC2 加入进去 , 进行 48 h
的孵育。将 100 ml 的 MTT 溶液分别加入到每孔中 , 使其
持续 2.5 h 的作用［3］。在将上清液去除掉后 , 将 100 ml 的二
甲亚砜 (DMSO) 溶液加入 , 利用分光光度计对充分溶解后的
晶体进行读取。③克隆形成实验 ：在 6 孔板中对 100 个细胞
进行培养 , 随后在 5.0 μmol/L RNase MC2 的培养基中将其加
入。选择 0.05% 结晶紫对其进行 5 min 的染色 , 对集落数
量进行计算［4］。④细胞周期检测 ：在细胞受 RNase MC2 作
用不同时间后, 通过70%的乙醇将其固定在4℃冰箱中过夜 ,
将磷酸盐缓冲溶液 (PBS) 加入 , 在黑暗中对其进行 30 min
的放置。通过流式细胞仪对不同细胞周期的细胞数量进行
检测［5］。
1. 3　统计学方法　采用 SPSS19.0 统计学软件对数据进行统
计分析。计量资料以均数±标准差 ( x-±s) 表示 , 采用 t检验；
计数资料以率 (%) 表示 , 采用χ2 检验。P<0.05 表示差异具
有统计学意义。
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2　结果
2. 1　RNase MC2 对肝癌细胞增殖的抑制作用　浓度在
2.5 μmol/L 以上的 RNase MC2 能够使肝癌细胞活性为 60%
以下 , 对肝癌细胞的活性起到显著的抑制作用 , 2.5 μmol/L 以下的
RNase MC 则具有抑制 80% 以上的肝癌细胞活性 , 比较差异
具有统计学意义 (P<0.05)。克隆形成结果显示 , RNase MC2
能够使肝癌细胞的克隆形成能力出现明显下降。
2. 2　RNase MC2 对 G2/M 期阻滞的诱导作用　通过流式细胞
技术检测结果显示 , 肝癌细胞在受到 RNase MC2 作用的 24 h
之后 , 其出现了 G2/M 期阻滞。如其中的 2.5 μmol/L, Bel-7402
在 G2/M 期达到了 (36.95±5.26)% 的细胞百分比 , QGY-7703
在 G2/M 期达到了 (30.25±3.72)% 的细胞百分比 ；对照细胞
则分别达到了 (23.50±3.63)% 和 (17.74±4.62)% 的细胞数量
百分比 , 比较差异具有统计学意义 (P<0.05)。
2. 3　RNase MC2 对肝癌细胞自噬的诱导作用　通过四甲吖
啶进行染色 , 对 RNase MC2 产生的对细胞质内酸性自噬泡
的诱导作用进行进一步观察。结果显示 , 肝癌细胞在经过
RNase MC2 处理后出现了明显增多的细胞质内酸性自噬泡数
量。电镜结果显示 , 肝癌细胞在经过 RNase MC2 处理后形成
了多个自噬小体。此外 , 上调的 LC3-Ⅱ和 Beclin-1 表达对发
生细胞自噬具有提示作用。
3　讨论
通过中药能够使化疗药物的副作用得以有效减轻 , 使肿
瘤患者的生活质量得以改善 , 并且增加肿瘤患者的生存期。
所以提取中药中的有效成分 , 使其对肝癌细胞进行对抗 , 是
突破肝癌细胞治疗瓶颈的一种非常重要的方式［6］。本次研究
发现 , RNase MC2 作为苦瓜子的有效提取成分 , 可以对肝癌
细胞的增殖起到显著地抑制作用 , RNase MC2 通过对 p21 的
上调能够对 G2/ M 期阻滞起到诱导作用 , 通过对 Beclin-1 的
上调能够对细胞自噬起到诱导作用 , 其主要是对肝癌细胞中
的 Bel-7402 和 QGY-7703 的表达进行诱导 , 从而进一步诱发
出现 G2/ M 期阻滞。
在病理状态细胞和正常细胞中自噬属于一种普遍存在的
生理机制 , 在细胞的生理和病理过程中自噬具有十分重要的
作用 , 特别是在癌细胞中作为细胞代谢压力的适应性反应自
噬发挥了十分重要的作用［7］。本次研究表现 , RNase MC2 通
过对 Beclin-1 的上调能够对细胞自噬起到诱导作用。但是目
前尚未清楚在 RNase MC2 诱发细胞死亡中自噬的作用机制 ,
仍然需要对其作用机制进行更深一步的研究［8］。
综上所述 , 本次研究显示 RNase MC2 通过对 p21 的上调
能够对 G2/ M 期阻滞起到诱导作用 , 通过对 Beclin-1 的上调
能够对细胞自噬起到诱导作用 , 从而对肝癌细胞中的增殖起
到显著地抑制作用。因此表明 , RNase MC2 作为苦瓜子的有
效提取成分 , 属于一种具有开发价值的抗肿瘤药物。
参 考 文 献
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［收稿日期 ：2016-03-09］