全 文 ：按文献〔2〕方法进行测定 ,结果见表 。
　表　　　　冬凌草不同部位中迷迭香酸 、
冬凌草甲素的含量(n=3)
部位 迷迭香酸含量(%)野生 人工栽培
冬凌草甲素(%)
野生 人工栽培
草质茎叶 0.635 0.911 0.474 0.679
叶 1.636 1.782 0.867 1.499
草质茎 0.248 0.057 0.064 0.012
木质化茎 0.185 0.028 0.056 0.032
3 　讨论
冬凌草为多年生半灌木植物 , 7月份以前当年
生的地上茎为草质 ,以后逐渐木质化 ,叶也脱落。对
于冬凌草的入药部位 ,文献记载也不一致 , 《中华人
民共和国卫生部药材标准》冬凌草以“干燥叶及地上
部分”入药;其它文献记载冬凌草多以“干燥地上部
分”入药〔3 ～ 5〕 。但在实际采收时 ,常割其地上草质部
分或只掳其叶(带少量幼茎)。因此 ,在规范化种植
研究时 ,为了确定冬凌草的入药部位 ,提高药材质
量 ,我们以迷迭香酸 、冬凌草甲素为指标 ,对冬凌草
不同部位的含量进行了考察。实验结果表明 ,迷迭
香酸 、冬凌草甲素主要集中分布在冬凌草叶中 。所
以建议在冬凌草采收时可以单采其叶 ,或为了采收
方便割其地上草质部分。
本实验结果表明:相同条件下 ,用甲醇提取迷迭
香酸 、冬凌草甲素的含量明显高于用丙酮提取;与用
甲醇作溶媒索氏提取相比 ,超声法具有含杂质少 ,提
取时间短等优点 ,用甲醇超声提取 60 min和用甲醇
超声提取 80 min测得迷迭香酸冬凌草甲素的含量
无明显差异 ,故以甲醇超声提取 60 min为最佳提取
条件。
　　注:科技部十五攻关课题(编号 2001BA701A23-05)及河南省科技
攻关项目(编号 0324420042)
　　＊通讯作者
参 考 文 献
1 　阴健等主编.中药现代研究与临床应用.北京:学苑出
版社 , 1993∶10
2 　陈随清 ,等.冬凌草不同采收期迷迭香酸的含量变化.
河南中医学院学报 , 2003 , 18(6)∶29
3 　河南省卫生厅编.河南省中药材标准.郑州:中原农民
出版社 , 1992∶32 ～ 34
4 　万定荣 ,等主编.湖北药材志.武汉:湖北科学技术出版
社 , 2002 , 1∶157
5 　肖培根主编.中药志.第三卷.北京:化学工业出版社 ,
2002 , 1∶69
(2004-02-17收稿)
苦瓜子中植物胰岛素的凝胶柱与 RP-HPLC法分离
盛清凯1　姚惠源1　徐华军2　凌小云2　何　婷2
(1.江南大学食品学院 ,无锡214036;2广西北生药业股份有限公司 ,北海 536000)
　　摘要　采用有机酸 、醇提取 , Sephadex G-50 凝胶柱层析 、反相高效液相色谱(RP-HPLC)技术分离 , 从苦瓜子中分
离出降糖多肽 PA ,根据SDS-PAGE电泳和氨基酸组成分析 ,判定 PA 为植物胰岛素。
关键词　苦瓜子　植物胰岛素　氨基酸组成
　　《本草纲目》 、《滇南本草》等记载苦瓜具有明目
解毒等功效 。现代医学证明苦瓜有降低血糖 、增强
机体免疫等作用〔1〕 。国内外随着糖尿病患者的增
多 ,苦瓜作为一种药食产品 ,其安全降糖作用日益受
到关注。国内外学者对苦瓜的降血糖有效成分进行
大量研究 ,认为苦瓜中存在植物胰岛素〔2〕 、皂苷〔3〕等
成分。苦瓜中植物胰岛素的研究引起人们的重视 ,
其分离方法已申请了专利〔2、4〕 。1981年 Khanna〔2〕采
用有机酸 、醇提取 ,薄层层析方法首次从苦瓜果实和
苦瓜种子中分离出降糖多肽-P(p-polypeptide),该肽
皮下注射可降低动物和人的高血糖。苦瓜多肽-P
约为 166个氨基酸残基 ,分子量为 11000D。因提取
方式与动物胰岛素相似 ,且薄层层析迁移率与动物
胰岛素一致 ,故多肽-P 又称植物胰岛素(p-insulin)。
薄层层析方法分离度高 ,但样品上样量低 ,不适于大
量制备 。作者首次采用有机酸 、醇提取 ,凝胶柱层析
和反相高效液相色谱技术纯化 ,分离出苦瓜植物胰
岛素。
1 　材料与仪器
苦瓜子 ,广西北生药业股份有限公司提供;电泳
·414· 中药材第 27 卷第 6期 2004年 6 月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2004.06.013
Marker ,上海华美生工有限公司;胰岛素 ,南京新天
生物制药有限公司;Sephadex G-50 ,瑞典Pharmacia 公
司产品;7000D透析袋 ,美国 Spectrum 公司;LC-2010
高效液相色谱仪 ,日本岛津公司;835-50型氨基酸分
析仪 ,日本日立公司 。
2 　苦瓜多肽的分离与鉴定
2.1 　苦瓜多肽提取　将苦瓜子丙酮脱脂后粉碎 ,
按Khanna方法〔2〕以有机酸 、醇提取 ,丙酮沉淀 ,沉淀
物用 7000D透析袋透析 48 h后冷冻干燥 ,得苦瓜多
肽粗提物 。
2.2 　凝胶柱层析　将按常规方法将 Sephadex G-50
装柱 ,将苦瓜多肽粗提物溶于缓冲液中配成 18 mg/
ml的浓度 ,进行凝胶柱分离 ,得到两个洗脱峰 ,收集
冻干。由图 1可知 ,收集的 P1 、P2两组分中 , P2 为
主导组分 。凝胶层析条件为:缓冲液:pH 5.0 、0.2
mol/L醋酸-醋酸钠 ,凝胶柱:80×2 cm ,UV 280 nm 检
测。每管收集溶液 3.2 ml。
图 1　苦瓜多肽凝胶柱层析图
　　将 P1 、P2冻干粉分别溶于水中 ,皮下注射正常
小鼠和四氧嘧啶高血糖模型小鼠 。试验结果表明
P1无降血糖效果 , P2可显著降低正常小鼠 、四氧嘧
啶高血糖模型小鼠的血糖 。
2.3 　反相高效液相色谱纯化　将 P2冻干粉溶于
超纯水中 ,配成 5 mg/ml 的浓度 ,超声波脱气后 C18
反相高效液相色谱纯化(图 2)。多次收集 PA 、PB 、
PC 、PD等组分 ,冷冻干燥。实验条件为:上样量:10
μl ,流速:0.8 ml/min , 洗脱液:A 液 , 5%乙腈(含
0.05%三氟乙酸);B液 ,80%乙腈(含 0.05%三氟乙
酸)。线性洗脱梯度为 0 ※1 min A 液 85%, B 液
15%,1※40 min A液 50%、B液 50%,温度 30℃。
将PA 、PB 、PC 、PD溶于水 ,与胰岛素溶液一起进
行硅胶G薄层层析 。展开剂为正丁醇∶水∶乙酸=12∶5∶
1。结果显示 PA 、PB 、PC 、PD 、胰岛素的相对迁移率
分别为 0.19 、0.10 、0 、0 、0.19。PA 的相对迁移率与
胰岛素一致。PA可能为 Khanna 报道的苦瓜多肽-
P
〔2〕 。
图 2　苦瓜降糖多肽 C18RP-HPLC色谱图
图 3　苦瓜多肽 PA的 SDS-PAGE电泳图
　表 苦瓜多肽 PA 氨基酸组成分析
氨基酸 μMoles/mg 分子个数
天冬氨酸 0.273 17
苏氨酸 0.138 8.7
丝氨酸 0.195 12
谷氨酸 0.305 19
脯氨酸 0.159 10
甘氨酸 0.225 19
丙氨酸 0.240 15
缬氨酸 0.174 11
1/ 2半胱氨酸 0.058 3.6
蛋氨酸 0.031 2
异亮氨酸Ⅰ 0.116 7
亮氨酸 0.207 13
酪氨酸 0.016 1
苯丙氨酸 0.082 5
组氨酸 0.066 4
赖氨酸 0.209 13
精氨酸 0.161 10
氨 0.431 27
总计 166
2.4 　苦瓜多肽 SDS-PAGE凝胶电泳 　将 PA 溶于
水 ,进行 SDS-PAGE凝胶电泳 ,结果显示 ,PA为一条
带 ,分子量约为 11000D(图 3)。凝胶电泳条件:分离
胶浓度为 12%,浓缩胶为 5%,电压 220V ,电泳4 h ,
·415·中药材第27卷第 6 期 2004 年 6月
考马斯亮兰 R-250染色 。
2.5 　苦瓜多肽的氨基酸组成分析　将 PA 完全水
解 ,进行氨基酸组成分析(见表)。
3 　结论
(1)PA的薄层层析相对迁移率 、分子量 、氨基酸
组成与Khanna报道的结果〔2〕完全一致 ,因此本实验
通过凝胶层析 、反相高效液相色谱制备的苦瓜多肽
PA即为苦瓜植物胰岛素〔2〕 。(2)用凝胶柱层析 、反
相高效液相色谱方法纯化苦瓜多肽 ,优于薄层层析
方法制备。本实验中所用 C18柱为分析柱 ,大量制备
时可采用制备柱 。
参 考 文 献
1 　Lesile Taylor.Herbal Secrets of the Rainforest.2nd edition ,
Sage Press , Inc.2002.4
2 　Khanna , Pushpa , et al.Hypoglycemic activity of polypeptide
from a plant source.J.Nat.Prod.1981 , 44(6)∶648.
3 　王先远 ,等.苦瓜皂甙降血糖作用及其机制初探.氨基
酸和生物资源 , 2001 , 23(3)∶42
4 　Khaana , Pushpa.Protein/polyeptide-k obtained fromMomordi-
ca charantia and a process for the extraction thereof.[ P] WO:
00/61619 , 2000 , October , 19
(2004-03-08收稿)
Isolation of Plant Insulin from Momordica charantia Seeds by Gel Filtration and RP-HPLC
Sheng Qingkai1 , Yao Huiyuan1 , Xu Huajun2 , Ling Xiaoyun2 , He Ting2
(1.School of Food Science and Technology , Southern Yangtze University , Wuxi 214036;2.Guangxi Beisheng Pharmaceutical Co.Ltd ,
Beihai 536000)
Abstract　Hypoglycemic polypeptide(PA)was extracted from Momordica charantia seeds with organic acid and ethanol and purified
with Sephadex G-50 gel filtration and RP-HPLC.PA was judged as plant insulin on the base of the analy sis of its SDS-PAGE electrophoresis
and amino acid composition.
Key words　Momordica charantia seeds;Plant insulin;Amino acid composition
·药理·
苦参碱对 C6胶质瘤细胞的增殖
和原癌基因表达的影响
邓　惠　罗焕敏＊　黄　丰　李晓光　高　勤
(暨南大学药学院 ,广州 510632)
　　摘要　目的:本研究拟探讨苦参碱对胶质瘤细胞株(C6细胞株)的抑制作用及其作用机理。方法:应用 MTT 比
色法检测不同浓度苦参碱对 C6 细胞的增殖抑制 ,应用流式细胞仪观察苦参碱对 C6 细胞周期的影响 , 应用 RT-PCR
观察原癌基因 C-myc表达的变化。结果:苦参碱对 C6 细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性 , 当浓度为 0.20 g/L 时 , 对
C6细胞增殖的抑制率达到(53.8±5.6)%。流式细胞仪分析显示 , 用 0.20 g/ L苦参碱培养 3 d , 细胞周期中G0/G1 期
所占比例增加 , S 期占细胞周期的比例降低。 RT-PCR结果显示 ,随着苦参碱作用剂量的增加 , C-myc基因的表达被
明显抑制。结论:苦参碱对大鼠胶质瘤细胞系 C6的增殖具有明显的抑制作用 , 并对原癌基因 C-myc 的表达具有抑
制作用。
关键词　苦参碱　C6胶质瘤细胞　细胞周期　原癌基因表达
　　脑恶性胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤 ,死
亡率高 ,治疗效果差 ,手术治疗联合化疗 、放疗后患
者的平均生存期仍然不到一年 。对于脑恶性胶质瘤
的化疗药辅助治疗的研究是近年来的一个热点 ,苦
参碱(matrine)具有较广的抗瘤谱 ,对多种肿瘤细胞
株及移植瘤有较高的抑制率 ,目前尚未见苦参碱在
C6胶质瘤治疗中的研究报告。本研究探讨了苦参
碱(matrine)对大鼠胶质瘤细胞 C6增殖的影响 ,为进
一步研究苦参碱用于胶质瘤治疗的可能性打下基
础 。
1 　材料
1.1 　细胞株　大鼠胶质瘤细胞株 C6购自中国科
学院上海生物细胞所。
1.2 　药物及试剂　苦参碱购自中国药品生物制品
检定所;RPMI-1640为 Gibco 公司产品;新生牛血清
为杭州四季青生物制品公司产品;MTT 为 Sigma 公
·416· 中药材第 27 卷第 6期 2004年 6 月