全 文 ：中国药房 2008年第 19卷第 33期 China Pharm acy 2008 Vol.19 No.33 · 2601·
*工程师 , 博士。研究方向:香精香料与天然产物的开发。 E-
mail:hbchh2008@163.com
RP -HPLC 法测定岩黄连注射液中脱氢卡维丁的含量
程 华 1 *,熊 斌 1 ,丁碧军 1 ,朱 巍 1 ,黄 龙 1 ,余龙江 2(1.湖北中烟工业有限责任公司技术研发中心 ,武汉市
430051;2.华中科技大学生命科学与技术学院 ,武汉市 430074)
中图分类号 R283.611;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2008)33-2601-02
摘 要 目的:建立以反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定岩黄连注射液中脱氢卡维丁含量的方法 。方法:色谱柱为 Dikma
Diamonsil C18(250 mm ×4.6 mm , 5μm), 流动相为乙腈-水(40∶60 ,每 1 L 流动相加 3.4 g 磷酸二氢钾和 1.7 g 十二烷基磺酸
钠),检测波长为 345 nm ,流速为 1 mL ·min -1 ,柱温为 25 ℃。结果:脱氢卡维丁进样量在 0.142 ～ 2.840μg 范围内与峰面积积分
值呈良好的线性关系(r =0.999 1);平均回收率为 99.70%, RSD =1.68%(n=9)。结论:本方法准确 、可靠 、重现性好 ,可用于岩
黄连注射液的质量控制 。
关键词 反相高效液相色谱法;脱氢卡维丁;岩黄连注射液;含量测定
Determination of Dehydrocavidine in Yanhuangl ian Injection by RP-HPLC
CHENG Hua , XIONG Bin , DING Bi -jun , ZHU Wei , HUANG Long(Technical Research ＆ Development
Center ,China Tobacco Hubei Indust rail Co.Ltd.,Wuhan 430051 , China)
YU Long -jiang(College o f Li fe Science and Technolog y , Huazhong Universi ty of Science and Technolog y ,
Wuhan 430074 , China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish a RP -HPLC method fo r t he de termina tion o f dehydrocav idine in Yanhuang lian in-
jection.METHODS:T he de termina tion w as perf ormed on a Dikma Diamonsil C18 column(250 mm×4.6 mm , 5μm).T he mo-
bile phase w as acetonitr ile-w ater(40∶60)supplem ented w ith 3.4 g · L -1 KH 2PO 4 and 1.7 g · L -1 sodium dodecy lsulphate
(SDS)w ith a flow rate o f 1 mL ·min -1.The chromatog ram w as de tected at 345 nm , and t he colum n temperature w as kept at
25°C.RESULTS:The calibra tion curve o f dehydrocav idine w as linear (r =0.999 1)w ithin a range of 0.142 ～ 2.840μg.T he
average recovery o f dehydrocav idine was 99.70%(RSD =1.68%, n =9).CONCLUSION :The established m ethod is accurate ,
reliable and reproducible ,and it can be used fo r the quality cont rol of Yanhuang lian injection.
KEY WORDS RP-HPLC;Dehydrocav idine ;Yanhuanglian injection;Content de te rmination
[ 2] 周元芬 ,刘 江.山楂叶不同采集时间对总黄酮含量影
响的研究[ J] .实用中医内科杂志 , 2008 , 22(1):63.
[ 3] 张黎明 ,李春莲.大孔吸附树脂分离纯化山楂叶总黄酮
的研究[ J] .林产化学与工业 , 2006 ,26(1):88.
[ 4] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)[ S] .
2005年版.北京:化学工业出版社 , 2005:22 ～ 23.
[ 5] 应 雪 , 陈 文 , 江发寿 , 等 .大孔吸附树脂分离纯化甘
草总黄酮工艺研究[ J] .中国药房 , 2006 , 17(17):1 355.
[ 6] 李 月 ,程 岚 ,康廷国.高效液相色谱法测定山楂叶提
取物中金丝桃苷的含量 [ J] .时珍国医国药 , 2006 , 17
(3):372.
(收稿日期:2008-04-23 修回日期:2008-09-15)
岩黄连 Corydalis sa xicola Bunting 为紫堇科紫堇属多年
生草本植物 [1 ] ,是桂西北山区常用于消炎 、止痛、排毒及治疗急 、
慢性肝炎和肝硬化等疾病的一种中草药 [2 ]。岩黄连注射液系由
岩黄连经适当方法加工制成的制剂 ,具有清热解毒 、消炎止痛 、
抗肿瘤 、增进食欲 、提高免疫力的功效 ,临床用于治疗急性黄疸
性 、无黄疸性 、乙型 、丙型肝炎 ,也用于肝硬化 、肝癌及其它肿瘤
的辅助治疗 [ 3 ]。脱氢卡维丁作为岩黄连的主要活性成分 , 其含
量的高低直接体现岩黄连注射液的制备质量 。笔者建立了反相
高效液相色谱(RP-HPLC)法测定岩黄连注射液中脱氢卡维
丁的含量 , 并进行方法学考察 , 旨在为制定岩黄连注射液的质
量标准提供依据 。
1 仪器与试药
510型 HPLC仪 ,包括二元泵及其控制器 、486检测器(美
国 Waters公司);N2000型色谱工作站 (浙江大学智达信息工
程有限公司);AE 100S型分析天平 、pHS-2C 型酸度计(上海
梅特勒-托利多仪器有限公司);KQ -100DB型超声波清洗器
(浙江昆山市超声仪器有限公司);旋转蒸发仪(上海亚荣生化
仪器厂)。岩黄连注射液(广西河丰药业有限公司 ,批号分别为
20040801 、20040802 、20040803 、20040901);脱氢卡维丁标准品
(中国药品生物制品检定所 ,批号:111667-200401);乙腈为色
谱纯(德国Merck公司), 十二烷基磺酸钠(SDS)为化学纯 , 其
它试剂均为分析纯 。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Dikm a Diamonsil C 18(250 mm ×4.6 mm , 5μm);
流动相:乙腈-水(40∶60),每 1 L流动相加 3.4 g 磷酸二氢钾
· 2602· China Pharmacy 2008 Vol.19 No.33 中国药房 2008年第 19卷第 33期
和 1.7 gSDS;检测波长:345 nm;流速:1 mL ·min -1;柱温:25
℃;进样量:10μL 。在此条件下 ,脱氢卡维丁与其它峰可达到基
线分离 ,峰形良好 。色谱见图 1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取脱氢卡维丁对照品 5.21 mg ,置于 10 mL 容量瓶
中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,即得浓度为 0.521 mg ·mL -1的对照
品溶液 。
2.3 供试品溶液的制备
取岩黄连注射液 1支 (规格:每支 2 mL), 用氨水调 pH
9.0 , 用 5 mL氯仿萃取 , 取有机相 , 加少量无水硫酸钠 , 过滤 ,
滤液减压蒸干 ,加入适量甲醇溶解 ,用 0.45μm 微孔滤膜滤过 ,
即得。
2.4 标准曲线的绘制
精密移取脱氢卡维丁对照品溶液 , 用甲醇稀释至不同浓
度 ,分别取 10μL 注入色谱仪 ,按上述色谱条件测定 。以进样量
(X , μg)为横坐标 ,峰面积积分值(Y )为纵坐标绘制标准曲线 ,
得回归方程为 Y =3 511.1X —87.82(r =0.999 1)。结果表
明 , 脱氢卡维丁进样量在 0.142 ～ 2.840μg 范围内与峰面积积
分值呈良好线性关系 。
2.5 精密度试验
精密吸取脱氢卡维丁对照品溶液 , 重复进样 6次 , 按上述
色谱条件测定峰面积 。结果 , RSD =0.57%(n =6),表明仪器
精密度良好 。
2.6 稳定性试验
精密吸取同一批供试品溶液 10μL ,分别于 0 、3 、6 、9 、12 、
24 h注入色谱仪 ,按上述色谱条件测定峰面积 。结果 , RSD =
2.41%,表明供试品溶液在 24 h 内稳定 。
2.7 重现性试验
取同一批样品 ,按“2.3”项下方法制备供试品溶液 ,按上述
色谱条件平行测定 6次 。结果 , RSD =1.72%,表明方法重现
性良好 。
2.8 加样回收率试验
精取已知含量的岩黄连注射液 , 分别精密加入脱氢卡维丁
对照品适量 ,按“2.3”项下方法制备供试品溶液 ,按上述色谱条
件测定 ,计算加样回收率 ,结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果(n=9)
Tab 1 Results of recovery test(n=9)
样品含量/μg 加入量/μg 测得量/μg 回收率/ % x/ % RSD/%
1.197 8 0.625 2 1.829 1 100.98
99.70 1.68
1.183 3 0.625 2 1.794 5 97.76
1.187 4 0.625 2 1.828 2 102.50
1.378 3 0.409 6 1.779 8 98.02
1.345 1 0.409 6 1.751 6 99.24
1.406 0 0.409 6 1.820 3 101.15
1.533 2 0.208 4 1.738 1 98.32
1.555 4 0.208 4 1.765 3 100.72
1.574 0 0.208 4 1.779 5 98.61
2.9 样品含量测定
取 4批样品 ,照“2.3”项下方法制备供试品溶液 ,按上述色
谱条件测定脱氢卡维丁的峰面积 , 计算含量 。结果 , 4批样品
(批号分别为 20040801、 20040802 、20040803 、20040901)的含
量分别为 0.579 、 0.561、 0.586 、 0.573 mg ·mL -1(n =3),
R SD 分别为 1.47%、1.29%、1.38%、1.52%。
3 讨论
脱氢卡维丁在 265 、345 nm 波长处均有最大吸收 [4 ] , 阴性
对照显示以 345 nm 波长处的干扰较低 , 因而选择 345 nm 作
为检测波长 。
脱氢卡维丁的极性较强 , 具有亲水性 , 试用甲醇-水和乙
腈-水作为流动相系统进行分析 , 峰形较差且重叠 ,拖尾严重 ,
无法得到有效分离;改用乙腈-磷酸二氢钾-SDS 系统后 , 分
离效果明显改善 , 峰形较好 。表明在流动相中加入反离子试剂
形成离子对 , 能有效抑制拖尾 , 改善峰形 , 增加在柱子上的保
留 。该结果与文献 [5 ,6 ]报道一致 。
从测定结果看 , 不同批次的岩黄连注射液中脱氢卡维丁的
含量基本接近 ,表明原料质量和生产工艺比较稳定 。
试验表明 , 本方法准确 、可靠 , 重现性好 , 可用于岩黄连注
射液的质量控制 。
参考文献
[ 1] 文和群 ,许兆然 , J Villa-Lobos ,等.中国南部石灰岩稀
有濒危植物名录[ J] .广西植物 , 1993 , 13(2):110.
[ 2] 柯珉珉 ,张宪德 ,吴练中 ,等.岩黄连有效成分的研究[ J].
植物学报 , 1982 , 24(3):289.
[ 3] 孙宁玲 ,陆国才 ,袁伯俊 ,等.岩黄连研究进展[ J] .中药
新药与临床药理 ,2006 , 17(1):78.
[ 4] 黄雪梅 ,黄兴振 ,刘雪萍 ,等.岩黄连片质量标准研究[ J].
中国药房 , 2007 , 18(12):916.
[ 5] C heng H ,Yu LJ ,Hu QY , et al.Establishment o f callus
and cell suspension cultures o f Corydalis saxicola Bun_
ting ,a rare m edicinal plant[ J] .Z Natur forsch C , 2006 ,
61(3 ～ 4):251.
[ 6] 程 华 , 张同存 , 熊 斌 , 等 .放大培养对岩黄连细胞悬
浮培养的影响[ J].天然产物研究与开发 , 2007 ,19(6):939.
(收稿日期:2007-11-13 修回日期:2008-01-15)
《中国药房》杂志———中国科技论文统计源期刊 ,欢迎投稿 、订阅
图 1 高效液相色谱
A.供试品;B.对照品;C.阴性对照;1.脱氢卡维丁
Fig 1 HPLC
A.sample;B.co ntrol;C.negat ive con trol;1.dehydrocavidine