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树头发的氨基酸含量分析



全 文 :233※分析检验 食品科学 2004, Vol. 25, No. 11
树头发的氨基酸含量分析
蒋盛岩1,张前军2, 陈立德1, 赵良忠1,*, 段林东1, 王放银1
(1邵阳学院生物工程系,湖南 邵阳 422004; 2.南华大学,湖南 衡阳 421001)
摘 要:采用异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生,反相高效液相色谱法即PICO-TAG方法对树头发的氨基酸含量进行
测定,得出树头发的氨基酸色谱图。结果表明:除色氨酸被水解破坏而未检出外,树头发具有16种氨基酸,9
种必需氨基酸,其氨基酸的总含量达179.652μg/mg,总必需氨基酸含量为63.546μg/mg,必需氨基酸含量占总含
量的35.37%,该测定结果为树头发的药用开发提供参考。
关键词:树头发;氨基酸;反相高效液相色谱法;PICO-TAG方法
Analysis of Amino Acids of Pterula umbrinella Bres.
JIANG Sheng-yan1, ZHANG Qian-jun2, CHEN Li-de1,
ZHAO Liang-zhong1, *, DUAN Lin-dong1, WANG Fang-yin1
(1.Bioengineering Department,Shaoyang College, Shaoyang 422004, China;
2. Nanhua University, Hengyang 421001, China)
Abstract: The analysis of amino acids in Pterula umbrinella Bre . was made with reversed-phase high performance liquid
chromatography,using phenylisothiocyanate as a precolum derivatizing agent(i.e.pico-Tag method).The results showed that kinds
of amino acid(included kinds of essential amino acids)existed in Pterula umbrinella Bres.,except that tryptophane destroyed by
hydrolysis is not checked out. The sum of amino acids was 179.652μg/mg. The su of essenti l amino acids was 63.546μg/
mg.The percentage of essential amino acids was 35.37%.The results provide reference for exploitation of Pterula umbrinel a Br s.
resources.
Key words:Pterula umbrinella Bres;amino acids;reversed-phase high performance liquid chromatography;PICO-TAG
中图分类号:Q517 文献标识码:A 文章编号:1002-6630-(2004)11-0233-02
收稿日期:2004-08-15*通讯联系人
基金项目:湖南省教育厅资助项目(03C438)
作者简介:蒋盛岩(1967-),男,讲师,硕士,从事生物技术研究。
树头发(Pterula umbrinella Bres.)是珊瑚菌科龙须菌
属的一种真菌,别名黑龙须、银头发,细丝状,黑色,
担子果丛生,质韧,基部细圆柱形,向上渐细,干后象人头发,
生于高山,多附于潮湿的黄栎树皮裂缝中,或悬挂在
树枯枝上,具有止咳止痛,接骨消肿的作用[1,2]。本
文采用微量、快速的反相高效液相色谱法对树头发进行
氨基酸分析测定,结果报道如下。
1 材料与方法
1.1实验材料 树头发。
1.2仪器与试剂
使用Waters高压液相色谱系统,包括510泵、717
进样器、486检测器、2010色谱数据处理系统。17种
氨基酸标样,样品水解液为0.1g苯酚5.7N HCl,样
品衍生液中异硫氰酸苯酯:水:乙腈:三乙胺的体积比为
1:1:7:1,样品稀释液为Na2HPO4水溶液(pH7.4)。
1.3色谱条件
氨基酸分析柱YWGC(3.9×300mm),检测波长
为254nm,柱温为45℃,流动相A为0.04mmol/L乙酸
钠,6%乙腈,0.05%三乙胺的混合液(pH值为6.4);
流动相B为60%乙腈水溶液,流动相采用曲线型梯
度淋洗法,梯度为0%~0%B,5min,流速0.7ml/min;
0%~46%B,20min,流速0.7ml/min;46%~100%B,
3min,流速0.7ml/min;100%B,10min,流速0.7ml/
min;100%A,5min,流速0.7ml/min;100%~
54%A,20min,流速0.7ml/min;见表1。
2004, Vol. 25, No. 11 食品科学 ※分析检验234
时间(min)流速(ml/min)A % B % Curve
开始 0.70 100 0
5.0 0.70 100 0 6
25.0 0.70 54 46 6
28.0 0.70 0 100 6
38.0 0.70 0 100 6
表1  氨基酸洗脱梯度表(3.9mm柱)
1.4样品处理方法
取干样品研粉后,称取5mg,放入小管中,加苯
酚0.1g,浓盐酸(5.7mol/L)20μl,冲氮封口在105℃条件
下水解24h,加10μl干燥液真空抽干;加衍生剂20μl,
室温下放置20min,再置于真空干燥泵中抽干3~4h,加
磷酸缓冲液稀释,离心后进行HPLC分析,标准品亦同
法处理,得出氨基酸样品图,按外标法以峰面积定量方
式,计算样品各种氨基酸含量。
2 结果及分析
图1是氨基酸标准样品图,D:ASP(天冬氨酸),E:
Glu(谷氨酸),S:Ser(丝氨酸),G:Gly(甘氨酸),H:His(组
氨酸),T:Thr(苏氨酸),R:Arg(精氨酸),A:Ala(丙氨
酸),P:Pro(脯氨酸),Y:Tyr(酪氨酸),V:Val(缬氨酸),
M:Met(蛋氨酸),C:Cys(半胱氨酸),I:Ile(异亮氨酸),L:
Leu(亮氨酸),F:Phe(苯丙氨酸),K:Lys(赖氨酸);图2
是样品的氨基酸色谱图,按下列公式计算氨基酸的含
量,结果见表 2。
比较图1和图2可以看出,树头发经盐酸水解后,
含有16种氨基酸,其中9种是必需氨基酸,从表2可
以看出,树头发中氨基酸的总含量达179.652μg/mg,总
必需氨基酸含量为63.546μg/mg,必需氨基酸含量占总
含量的35.37%,其中Arg、Asp、Gly、Glu、Ser、
His、Ala等含量较高。
3 讨 论
树头发具有止咳止痛,接骨消肿的功能,具有重要
的药用价值,是苗医和瑶医用来止咳止痛、接骨消肿的
传统特效药物,是一种非常宝贵的药用资源,但到目前
为止,国内外没有相关的中成药产品,也未见该药物的
研究报道,开发树头发这一药用真菌资源对民族药物的
发展具有重要意义,我们对树头发的氨基酸含量进行分
析测定,发现Arg、Glu、His含量较高,众所周知,
谷氨酸具有健脑作用,促进脑细胞进行呼吸、消除脑代
谢中氨的伤害,提高智力,被誉为智慧酸,精氨酸
为人体半必需氨基酸,能促进创伤修复,提高机体免疫
功能,对高血压、肝功能不良患者的恢复都有积极意
义,组氨酸盐酸盐可用于治疗消化器官溃疡、狭心病和
动脉硬化症及风湿病,还可以促进肠吸收铁离子,对治
疗贫血有效,树头发的氨基酸含量分析测定为开发树头发
这一药用资源提供一定的参考依据。
参考文献:
[1]《全国中草药汇编》汇编组. 全国中草药汇编(下册)[M]
北京: 人民卫生出版社, 1978. 420.
[2]江苏新医学院. 中药大辞典(下册)[M]. 上海: 上海人民出
版社, 1986. 1536.
A样品 加稀释液ml数 M(分子量)
×10-3μg/mgA标准 × 进样ml数 × W(样品毫克数)
表2 树头发样品中氨基酸的含量(μg/mg)
氨基酸 含量 氨基酸 含量
Asp 14.57 Glu 13.39
Arg 14.44 Ser 20.97
Gly 40.38 ﹡His 6.37
Pro 12.29 ﹡Ala 17.55
﹡Ile 6.49 Tyr 0.066
﹡Leu 10.03 ﹡Met 0.007
﹡Val 8.39 ﹡Phe 8.72
﹡Lys 0.039 ﹡Thr 5.95
总氨基酸含量(μg/ mg) 179.652
总必需氨基酸(μg/ mg) 63.546
必需氨基酸占总氨基酸(﹪) 35.37
注:﹡为必需氨基酸。