全 文 ：收稿日期:2005 05 20
作者简介:田晓玲(1973 ), 女(汉族),辽宁沈阳人 ,硕士研究生 , E mail xl tian@163.com;毕开顺(1956 ),男(汉族),
河北丰南人 ,教授 , 博士生导师 ,主要从事中药现代化研究 , Tel.024 23986296 , E mail ksbi@mail.sy.ln.cn。
文章编号:1006 2858(2006)06 0366 03
RP HPLC法测定陆英颗粒与陆英糖浆中
乌索酸与齐墩果酸含量
田晓玲 , 贾　英 , 廖琼峰 , 陈晓辉 , 毕开顺
(沈阳药科大学 药学院 ,辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的测定陆英颗粒和陆英糖浆中乌索酸与齐墩果酸的含量。方法用RP HPLC 法。色谱柱
为Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm , 5μm),流动相为甲醇 水(体积比为 87∶13), 检测波长为210 nm ,
流速为 1.0 mL·min-1 ,柱温为 35 ℃, 进样量为 20 μL。 结果 在该色谱条件下 , 乌索酸质量浓度
在5.4～ 86.4 mg·L-1内 , 质量浓度与峰面积具有良好的线性关系 ,回归方程为 A =9.58×103ρ-
2.769×104 , r=0.999 0;齐墩果酸质量浓度在5.2 ～ 83.2 mg·L-1内 ,质量浓度与峰面积具有良好
的线性关系 ,回归方程为 A=7.604×103ρ-2.253×104 , r =0.999 0。 陆英颗粒中乌索酸与齐墩
果酸加样回收率分别为 101.0%(RSD=1.9%)、99.6%(RSD=1.3%);陆英糖浆剂中乌索酸与齐
墩果酸加样回收率分别为 99.9%(RSD=1.4%)、100.3%(RSD=1.1%)。结论 该法为陆英颗粒
及陆英糖浆的质量控制提供了依据。
关键词:陆英;乌索酸;齐墩果酸;反相高效液相色谱法
中图分类号:R 917　　　文献标识码:A
　　陆英(Sambucus chinensis Lindl.)为忍冬科
接骨木属多年生草本植物 ,又名八棱麻 、接骨木 、
八里麻 ,产于我国南北各地 ,以根 、茎 、叶入药 ,是
我国民间常用草药 ,有活血散瘀 ,祛风活络 ,发汗
利尿之功效[ 1] 。用于治疗跌打损伤 、风湿痛 、脱
臼 、肾炎水肿 、脚气水肿 、荨麻疹 。临床应用陆英
及其制剂治疗肝炎取得了显著效果[ 2 ,3] 。我国部
颁标准中已收载了陆英颗粒和糖浆 ,但无其含量
测定方法。经研究证实 ,陆英中乌索酸和齐墩果
酸是陆英抗肝炎的主要活性成分[ 4] 。为了控制
陆英制剂质量 ,作者研究了用RP HPLC 法同时
测定陆英颗粒及陆英糖浆中乌索酸与齐墩果酸的
含量 。
1　仪器与材料
高效液相色谱仪(2690 泵 、2487紫外可见光
检测器 、Millennium32色谱管理系统 ,美国Waters
公司),KQ 250超声波振荡器(江苏昆山超声仪
器有限公司)。
乌索酸和齐墩果酸对照品(批号 110742
200212 、110709 200304 ,中国药品生物制品检定
所), 陆 英 颗 粒 (供 试 品 , 批 号 20020110 、
20020212 、20020218 ,江西山香药业有限公司),
陆英糖浆(供试品 , 批号 20030101 、20021001 、
20021002 ,江西心诚药业有限公司),甲醇(色谱
纯 ,美国 Tedia公司),乙醇(分析纯 ,市售),水(重
蒸馏水 ,自制)。
2　方法与结果
2.1　对照品溶液的配制
取乌索酸对照品和齐墩果酸对照品适量 ,精
密称定 ,置 10 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至
刻度 ,摇匀 ,制成含乌索酸 0.540 g·L-1 、齐墩果
酸 0.520 g·L-1的溶液 ,备用 。
2.2　色谱条件选择与系统适用性试验
色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm ,
5μm);流动相:甲醇 水(体积比为 87∶13);流速:
1.0 mL·min-1;检测波长:210 nm;柱温:35 ℃;
进样量:20μL 。
在此条件下 ,对供试品溶液和对照品溶液进
行测定。色谱分离结果见图 1。理论塔板数按齐
墩果酸峰计为 7 991 ,按乌索酸峰计为 8 055。二
者分离度为 1.53 ,且与其他杂质峰完全分离。
2.3　标准曲线的绘制
分别精密量取对照品溶液 0.1 、0.2 、0.4 、
0.8 、1.6mL置10mL量瓶中 ,加流动相稀释至
第 23 卷 第 6期
2 0 0 6 年 6 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.23 　No.6
Jun.2006 p.366
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2006.06.008
1—Oleanolic acid;2— Ursolic acid
Fig.1　Chromatogram of standard(A), granule(B)and syrupsample(C)
刻度 ,摇匀 。精密吸取 20 μL ,注入高效液相色谱
仪 ,以质量浓度 ρ(mg·L-1)为横坐标 ,峰面积 A
为纵坐标做图 ,得回归方程为 A =9.58×103ρ-
2.769×104 , r =0.999 0(乌索酸);A =7.604×
103ρ-2.253×104 , r =0.999 0(齐墩果酸)。表
明乌索酸和齐墩果酸质量浓度分别在 5.4 ～
86.4 mg·L-1、5.2 ～ 83.2 mg·L-1内线性关系良好。
2.4　精密度试验
取线性关系质量浓度内含乌索酸和齐墩果酸
的对照品溶液 ,重复进样 5次 ,记录峰面积 ,结果
乌索酸峰面积 RSD 为 0.6%, 齐墩果酸峰面积
RSD为 0.4%。分别取同一批号供试品 5 份 ,按
“2.7”条制备供试品溶液 ,测定 。乌索酸在颗粒和
糖浆中含量相对标准偏差分别为 1.4%、1.1%,
齐墩果酸在颗粒和糖浆中含量相对标准偏差分别
为 1.6%、2.1%。
2.5　回收率试验
取已知含量的陆英颗粒供试品 (批号
20020110)2 g ,分别精密加入一定量的乌索酸和
齐墩果酸对照品 ,置索氏提取器中 ,按“ 2.7”条操
作进行回收率测定 ,乌索酸与齐墩果酸的平均收
率分别为 101.0%、99.6%, RSD分别为 1.9%、
1.3%,其他结果见表 1。
Table 1　Recoveries in Granulate Sambuci sample(n=9)
Ursolic acid
m added/ mg m found/ mg Recovery/ %
Oleanolic acid
madded/mg m found/mg Recovery/ %
3.00 3.039 101.3 0.50 0.498 99.6
3.00 3.004 100.1 0.50 0.501 100.2
3.10 3.201 103.3 0.60 0.586 97.6
6.10 6.317 103.6 1.00 0.992 99.2
6.00 6.105 101.8 1.10 1.085 98.6
6.00 6.141 102.4 1.10 1.086 98.7
9.00 8.801 97.8 1.50 1.521 101.4
9.20 9.120 99.1 1.60 1.596 99.8
9.00 8.982 99.8 1.40 1.423 101.6
　　精密量取已知含量的陆英糖浆供试品(批号
20030101)2.00 mL置分液漏斗中 ,分别精密加入
一定量的乌索酸对照品和齐墩果酸对照品溶液 ,
按照“2.7”条操作进行回收率测定 ,乌索酸和齐墩
果酸的平均收率分别为 99.9%、100.3%, RSD分
别为 1.4%、1.1%,其他结果见表 2。
2.6　稳定性试验
取供试品溶液在 0 、2 、4 、6 、8 h 分别进样分
析 ,记录峰面积 , 结果颗粒:乌索酸 RSD 为
1.1%,齐墩果酸 RSD 为 1.3%;糖浆:乌索酸
RSD为 0.9%,齐墩果酸 RSD为 1.2%。表明供
试品溶液在 8 h 内稳定 。
2.7　供试品含量测定
取陆英颗粒供试品 3 g ,置索氏提取器中 ,加
质量分数为 95%的乙醇 80 mL 提取 5 h ,回收乙
醇 ,残渣用甲醇溶解 ,转移至200 mL量瓶中 ,用
367第 6 期 田晓玲等:RP HPLC 法测定陆英颗粒与陆英糖浆中乌索酸与齐墩果酸含量　　　
Table 2　Recoveries in Syrupus Sambuci sample(n=9)
Ursolic acid
m added/ mg m found/ mg Recovery/ %
Oleanolic acid
madded/mg m found/mg Recovery/ %
3.10 3.081 99.4 0.50 0.508 101.5
3.10 3.081 99.4 0.50 0.508 101.5
3.00 3.000 100.0 0.50 0.502 100.4
3.10 3.081 99.4 0.50 0.491 98.1
6.00 6.062 101.0 1.00 0.992 99.2
6.00 5.928 98.8 1.00 1.015 101.5
6.10 6.246 102.4 1.00 1.002 100.2
9.00 8.856 98.4 1.60 1.592 99.5
9.00 9.126 101.4 1.60 1.624 101.5
8.90 8.784 98.7 1.50 1.512 100.8
甲醇定容至刻度 ,摇匀。用微孔滤膜过滤 ,得供试
品溶液 。分别取 20 μL 供试品溶液和对照品溶
液 ,注入液相色谱仪 ,计算含量的质量分数 ,结果
见表 3。
精密量取陆英糖浆供试品 2.00 mL 置分液
漏斗中 ,加氯仿提取 2次(10 mL 、5 mL),合并氯
仿液 , 蒸干 , 残渣用甲醇溶解 , 并定量转移至
200 mL量瓶中 ,稀释至刻度 ,摇匀 ,用微孔滤膜过
滤 ,得供试品溶液。分别取 20 μL 供试品溶液和
对照品溶液 ,注入液相色谱仪 ,计算含量的质量浓
度 ,结果见表 4。
Table 3　Contents(w)of ursolic acid and oleanolic acid in Granulate Sambuci
Batch w(ursolic acid)/ % w(oleano lic acid)/ %
20020110 0.396 0.049
20020212 0.382 0.042
20020218 0.368 0.040
Table 4　Contents(ρ)of ursolic acid and oleanolic acid in Syrupus Sambuci
Batch ρ(ursolic acid)/(g·L-1) ρ(oleanolic acid)/(g·L-1)
20030101 3.22 0.59
20021001 3.18 0.49
20021002 3.21 0.55
3　讨论
a.由于乌索酸和齐墩果酸同为三萜酸且为
同分异构体 ,极性几乎无差别 ,因而很难用薄层扫
描法分离定量 ,选用RP HPLC 法对其分离定量 ,
对于控制质量具有重要意义。
b.选 210 nm 为检测波长可同时检测两者含
量。在反相柱上甲醇的比例增减对两者的分离与
保留均影响较大.选择的流动相体系既能使乌索
酸与齐墩果酸得到良好分离 ,又能与其他众多杂
质分离。
c.针对 2 种剂型的不同特点采取了不同的
处理方法。测定糖浆时 ,如果将供试品直接用甲
醇稀释 、过滤后进样分析 ,不影响测定结果。但考
虑到色谱柱的污染程度 ,在不影响乌索酸和齐墩
果酸含量的情况下 ,采用氯仿萃取的方法弃去杂
质 ,以保护色谱柱。
参考文献:
[ 1] 《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编:上册
[ M] .北京:人民卫生出版社 , 1983.437.
[ 2] 江西省宜春地区陆英临床研究协作组.陆英冲剂治疗
急性病毒性肝炎 304 例疗效观察 [ J] .中草药通讯,
1978 , 7:25-27.
[ 3] 陈武 ,熊筱娟 ,李开泉 ,等.鸟索酸治疗急性病毒性肝炎
的临床研究———附 102 例报告 [ J] .宜春医专学报,
2001 , 13(1):1-3.
[ 4] 陈武 ,李开泉 ,熊筱娟 ,等.陆英抗肝炎活性成分的研究
[ J] .南昌大学学报 , 2001 , 25(2):165-167.
(下转至第 383页)
368 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 23卷
Protective effects of QN capsules on cerebral is-
chemia in mice and rats
YANG Shuang , ZHOU Xiao-mian , ZHENG Hong-hao , YU Yang , CAO Ying-lin , ZHANG Shu
(School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceut ical Universi ty , Shenyang 　110016 , China)
Abstract:Objective To study the protective ef fects of QN capsules w hich w as composed of Rhizoma
Chuanxiong , Radix Angelicae Sinensis , Radix Rehmanniae Preparate and the others on cerebral ischemia in
mice and rats.Methods Anoxia w as produced by close hypoxia in mice , the surviving times w ere detected.
Acute cerebral ischemia w as produced by the occlusion of bilateral common carot id arteries wi th vague
nerves of mice and the surviving times were also detected.The contents of cerebral water , the cerebral in-
dex , the brain vascular permeability ,pathological examination , the contents of brain tissue malondialdehyde
(MDA)and plasma ni tric oxide(NO), the activi ties of superoxide dismutase(SOD)and GSH-peroxidase
(GSH-px)were detected using the models of acute incomplete brain ischemia reperfusion in rats.Results QN
capsules could signif icantly prolong the survival time of hypoxic mice and the mice w ith acute cerebral is-
chemia.QN capsules could significant ly decrease the contents of cerebral w ater , the cerebral index , the brain
vascular permeability , the MDA contents of brain tissue and NO content of plasma and improve the act ivit ies
of SOD and GSH-px during acute incomplete brain ischemia reperfusion in rats.Conclusions QN capsules
has a protective effect on cerebral ischemia and ischemia-reperfusion.
Key words:QN capsules;cerebral ischemia-reperfusion;superoxide dismutase(SOD);malondialdehyde
(MDA);GSH-peroxidase(GSH-px);nit ric o xide(NO)
(上接第 368页)
Determination of contents of ursolicacid and oleano-
lic acid in Syrupus Sambuci and Granulate Sambuci
by RP-HPL
TIAN Xiao-ling , JIA Ying , LIAO Qiong-feng , CHEN Xiao-hui , BI Kai-shun
(School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceut ical Universi ty , Shenyang 　110016 , China)
Abstract:Objective To establish a method for the determination of the contents of ursolic acid and oleanolic
acid in Syrupus Sambuci and Granulate Sambuci(t raditional Chinese medicines).Methods RP-HPLC w ith
Kromasil C18 column(250 mm×4.6 mm ,5 μm)was used.The mobile phase w as methanol-water(V∶V =
87∶13),detection w avelengh w as set at 210 nm.The flow rate w as 1.0 mL·min-1 , the column tempera-
ture w as 35 ℃ and injection volumn w as 20μL.Results The ursolic acid calibration curve was linear at the
range of 5.4-86.4 mg·L-1 and the regression equation w as A =9.58×103ρ-2.769×104 , r=0.999 0;
The oleanolic acid calibration curve w as linear at the range of 5.2-83.2 mg·L-1 and the reg ression equa-
tion w as A =7.604×103ρ-2.253 ×104 , r =0.999 0.The mean recoveries w ere 101.0%(RSD=
1.9%),99.6%(RSD=1.3%),99.9%(RSD=1.4%), and 100.3%(RSD=1.1%)for ursolic acid ,oleanolic acid
in g ranule ,ursolic acid and oleanolic acid in syrup , respectively.Conclusions The method is simple , accurate and
reproducible.It can be used in the quality control of Syrupus Sambuci and Granulate Sambuci.
Key words:Sambucus chinensis Lindl.;ursolic acid;oleanolic acid;HPLC
383第 6 期 杨　爽等:QN 胶囊对小鼠和大鼠脑缺血的保护作用