全 文 ：收稿日期:2005 10 17
基金项目:辽宁省科技攻关项目(2004226008 1)
作者简介:杨威(1978 ), 男(汉族),四川绵阳人 , 硕士研究生 , 主要从事肝胆系统药物药理与新药药理及毒理研究 ,
Tel.024 23986281 , E mail yangwei0719@163.com;王敏伟(1940 ), 男(汉族),辽宁沈阳人 , 教授 , 博士生导师 ,主要
从事消化系统药理与新药药理及毒理研究 , E mail wangminw ei3451@163.com。
文章编号:1006 2858(2006)08 0524 05
陆英提取物对急性化学性肝损伤的保护作用
杨　威 , 王茜莎 , 王敏伟 , 廖琼峰 , 毕开顺
(沈阳药科大学 药学院 ,辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 研究陆英中保肝降酶活性部位提取物(LY)保肝降酶的功效。方法 采用急性 CCl4 肝
损伤模型 、D 半乳糖胺盐酸盐大鼠急性肝损伤模型 、ConA 致小鼠急性肝损伤模型研究 LY灌胃给
药对急性实验性肝损伤的保护作用 ,同时采用碳粒廓清实验考察了 LY 灌胃给药对小鼠非特异性
免疫功能的的影响。结果 LY 对 CCl4 致小鼠急性肝损伤有明显的保护作用 , 其保肝作用可能与对
抗脂质过氧化有关;对 D 半乳糖胺盐酸盐致大鼠急性肝损伤和 ConA 所致小鼠急性肝损伤亦有明
显的保护作用;能增强小鼠非特异性免疫功能。结论 LY对多种急性实验性肝损伤有明显的保护
作用并且能增强小鼠非特异性免疫功能的作用。
关键词:陆英;保肝降酶;急性肝损伤;非特异性免疫
中图分类号:R 96　　　文献标识码:A
　　中药陆英为忍冬科(Caprofoliaceae)接骨木属
(Sambucus L.)植物陆英(Sambucus chinensis
Lindl.)的干燥全草 ,又称接骨草 、臭草。味甘 、微
苦 ,性平。早在《神农本草经》中就有记载 。是我
国民间常用草药 ,产于全国各地 ,资源丰富。有疏
肝健脾 、祛风利湿 、活血散瘀 、消炎止痛 、镇痉消肿
之功效 ,主要用于急性病毒性肝炎 、肾性水肿 、风
湿 、跌打损伤 、骨折等症[ 1 , 2] ;作者对陆英活性部
位进行了筛选 ,并用急性 CCl4 肝损伤模型进行了
药效学跟踪 ,最后确定了其保肝降酶活性部位 ,本
文对陆英中保肝降酶活性部位提取物保肝药效学
进行了初步研究和评价 ,旨在为进一步开发此药
提供实验依据。
1　仪器与材料
7020型全自动生化分析仪(日本日立公司),
OLYMPUS生物显微镜(日本奥迈公司), Y89 I
型电动玻璃匀浆机(宁波新芝科器研究所), UV
9100型紫外 可见分光光度计(北京瑞利分析仪
器厂), BZKW C型电子恒温水浴锅(北京光明医
药仪器厂), DL 4000B冷冻离心机(上海安亭科
学仪器厂),精密分析天平(上海精科天平)。
受试药的制备:称取所需陆英药材 ,加 10倍 、
8倍 、6 倍量体积分数为 75%的乙醇回流提取
3次 ,每次 1 h ,合并 3 次醇提取液 ,减压蒸去乙
醇 ,浓缩至近干 ,加水稀释至适当浓度 ,上到已处
理好的大孔树脂柱 , 依次用水洗 、体积分数为
30%的乙醇洗脱后 ,体积分数为 30%乙醇洗脱液
浓缩至干 ,用质量分数为 0.5%的CMC Na 稀释
至适当浓度备用[ 陆英(luying)提取物缩写为
LY ,由沈阳药科大学药分研究室提供] 。
联苯双酯滴丸(锦州九天药业有限公司 ,批
号:030108),利肝隆片(黑龙江中医药大学制药
厂 ,批号:20020904),四氯化碳(天津四友生物医
学科技有限公司 ,批号:605315043 ,临用前以花生
油配制成 0.1%的溶液), D 氨基半乳糖胺盐酸
盐及 conA(Sigma 公司),丙二醛(MDA)、总蛋白
(考马斯亮蓝法)、Glu试剂盒(南京建成生物工程
研究所), 7020 型全自动生化分析仪用谷丙转氨
酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)
试剂(英国朗道试剂公司)。
昆明种小鼠及Wistar 大鼠 ,沈阳药科大学实
验动物中心提供 ,合格证号:SCXK(辽)2003
008。
2　方法与结果
2.1　LY抗 CCl4 致小鼠急性肝损伤试验
昆明种小鼠72只 ,雄性 ,体质量 20 ～ 22 g ,随
第 23 卷 第 8期
2 0 0 6 年 8 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.23 　No.8
Aug.2006 p.524
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2006.08.013
机分为 6组 ,每组 12 只。分别灌胃不同剂量的
LY低(LY L)、中(LY M)、高剂量组(LY H)
(12 、24 、48 g·kg-1均以生药量计),阳性药对照组
给予联苯双酯滴丸(DDB)150 mg·kg-1 ,给药容
积为每 10 g 体质量 0.2 mL ,空白组与模型对照
组给予等量的溶媒(质量分数为0.5%的CMC Na
溶液)。每日一次 ,连续给药 5 d ,末次给药 1.5 h
后 ,腹腔给予体积分数为 0.1%CCl4 的花生油溶
液(给药容积为每 10 g 体质量 0.2 mL),空白组
腹腔注射给与等量的溶媒(花生油),禁食 16 h
后 ,眼眶取血 , 3 000 r·min-1离心 10 min ,取血
清 ,测定血清 AST 、ALT ;立即取肝做匀浆测
MDA活力 ,并取肝右叶放于体积分数为 10%的
福尔马林溶液中固定 ,做病理检查 。
结果见表 1及表 2 ,模型组血清中 ALT 、AST
远远高于空白组 ,与空白组比较有非常显著地意
义(P <0.001), LY各剂量组均能显著对抗 CCl4
致小鼠急性肝损伤导致的血清中 ALT 、AST 活性
升高(与模型组比较 P<0.05或 0.01或 0.001)。
模型组 MDA 显著高于空白组(P <0.001), LY
各剂量组均能显著降低 CCl4 致小鼠急性肝损伤
时所导致的肝脏 MDA 含量升高(与模型组比较
P <0.05或0.01或 0.001),提示 LY能明显对抗
CCl4 致肝线粒体脂质过氧化 。
与正常组比较 ,模型组小鼠肝细胞损伤主要
表现为:弥漫性肝小叶中心带中间带肝细胞气球
样变伴小叶中心管肝细胞胞浆凝聚 ,可见嗜酸性
变和嗜酸性小体 ,肝细胞点状坏死 ,严重的炎症细
胞浸润 ,肝中央静脉扩张 。LY 各剂量组上述表
现均明显减轻 ,其中高剂量组仅可见个别肝小叶
中心散在单个细胞气球样变性及小点状炎症细胞
浸润。上述病变以“ +”表示轻度损伤 ,以“ ++”
表示中度损伤 ,以“+++”表示重度损伤 ,以“ ±”
表示正常;炎症修复以“+”表示阳性;以“ -”表示
阴性 。
Table 1　Effects of LY on ALT、AST and MDA in hepatic injury mice induced by CCl4(n=12 , x±s)
Group Dose/(g·kg-1) a(ALT)/(U·L-1) a(AST)/(U·L-1) b(MDA)/(μmol·kg-1)
Control — 59.7±21.0 96.4±26.4 4.0±1.2
CCl4 — 768.5±280.1### 870.7±285.3### 10.3±3.9###
DDB 0.15 208.9±71.4＊＊＊ 413.7±184.2＊＊＊ 5.8±1.5＊＊
LY L 12 503.8±189.0＊ 589.1±209.6＊ 7.1±2.0＊
LY M 24 422.6±146.8＊＊ 454.0±141.5＊＊＊ 5.6±1.7＊＊
LY H 48 200.8±65.2＊＊＊ 352.8±95.5＊＊＊ 4.2±1.6＊＊＊
　　###P<0.001 , compared to control g roup;＊P<0.05 , ＊＊P <0.01 , ＊＊＊P<0.001 , compared to CCl4 group
Table 2　Effects of LY on the pathological change of liver tisse of mice
Group Liver cell dena turaliza tion Central v ein dilation Liver cell putrescence Inflammatory repair
Control ± ± ± -
CCl4 ++～ +++ ++～ +++ +++ -
DDB +～ ++ + ±～ + +
LY L ++ +～ ++ +～ ++ +
LY M +～ ++ +～ ++ +～ ++ +
LY H + ±～ + ±～ + +
2.2　LY抗 D 半乳糖胺盐酸盐致大鼠急性肝损
伤试验
Wistar雄性大鼠 60只 ,体质量 200 ～ 220 g ,随
机分为 6组 ,每组 10只 。即空白对照组 、D 半乳
糖胺盐酸盐(D GalN)模型组 、联苯双酯(DDB ,
100 mg·kg-1)组 、LY 低剂量组(LY L)、中(LY
M)、高剂量组(LY H)(8 、16 、32 g·kg-1均以生药量
计)。除空白对照组外各组动物于腹腔注射 D
GalN生理盐水溶液(剂量 400 mg·kg-1 ,给药容积
7.5 mL·kg-1 ,用 1 mol·L-1的 NaOH 将 pH 调至
7.0),空白对照组腹腔注射等量的用 1 mol·L-1
的 NaOH 将 pH 调至 7.0无菌生理盐水 , 6 h 后各
组动物给予相应的药物 ,给药容积 10 mL·kg-1 ,
空白对照组 、D GalN 模型组给予等量的溶媒(质
量分数为 0.5%的CMC Na溶液),同时禁食不禁
水 ,每 8 h 给药 1次 ,共 3次 ,末次给药后 2 h ,动
525第 8 期 杨　威等:陆英提取物对急性化学性肝损伤的保护作用　　　
物腹主动脉取血 , 3 000 r·min-1离心 10 min ,取
血清 ,测定血清中:ALT 、AST 、ALP 、Glu(血糖)。
结果见表 3 , LY 各剂量组均能显著对抗 D
半乳糖胺盐酸盐致大鼠急性肝损伤导致的血清中
ALT 、AST 活力升高以及 Glu含量急剧降低 ,(与
模型组比较 P <0.05或 0.01或 0.001)。
Table 3　Effects of LY on ALT ,AST, ALP and Glu in hepatic injury rat induced by D GalN(n=10 , x±s)
Group Dose/(g·kg-1) a(ALT)/(U·L-1) a(AST)/(U·L-1) a(ALP)/(U·L-1) ρ(Glu)/(g·L-1)
Control — 59.9±19.9 93.9±25.4 178.7±46.8 1.660±0.270
D GalN — 337.7±128.8### 524.1±204.4### 434.6±64.8### 0.901±0.153###
DDB 0.10 158.7±59.4＊＊＊ 319.0±97.9＊ 251.5±64.5＊ 1.210±0.239＊＊
LY L 8 184.6±65.8＊＊ 325.9±191.5＊ 304.5±47.9＊ 1.126±0.257＊
LY M 16 145.7±61.3＊＊＊ 277.8±131.6＊＊ 248.4±70.4＊ 1.326±0.389＊＊
LY H 32 108.5±47.4＊＊＊ 108.1±35.7＊＊＊ 204.2±63.1＊＊ 1.506±0.305＊＊
　　###P<0.001 , compared to control g roup;＊P<0.05 , ＊＊P <0.01 , ＊＊＊P<0.001 , compared to D GalN group
2.3　LY抗 ConA致小鼠急性肝损伤试验
昆明种小鼠 72只 ,雄性 ,体质量(20±2)g 随
机分为 6组即空白对照组 、ConA 模型组 、联苯双
酯(DDB ,150 mg·kg-1 ,阳性对照组)、LY低 、中 、
高剂量组(12 、24 、48 g·kg-1均以生药量计),药物
均用质量分数为 0.5%的CMC Na 配制 。给药组
每天按设定计量灌胃给药给药一次 ,给药容积为
每 10 g 体质量 0.2 mL ,空白对照组 ,模型组均给
等量质量分数为 0.5%的CMC Na ,连续 5 d。末
次给药后 1 h按 20 mg·kg-1尾静脉注射ConA溶
液(用 PBS 配置),空白组则给等量 PBS 溶液 ,禁
食不禁水 , 8 h 后眼眶静脉丛采血 ,静置 30 min ,
3 000 r·min-1 , 15 min 离心 , 分离血清 , 测 ALT
和AST 。
结果见表 4 ,与模型组比较 , LY 各剂量组小
鼠血清 ALT 、AST 含量显著降低(P <0.001 或
P <0.01);提示其对 ConA所致急性肝损伤小鼠
有良好的保护作用。
Table 4　Effects of LY on ALT and AST in hepatic injury mice induced by ConA(n=12 , x±s)
Group Dose/(g·kg -1) a(ALT)/(U·L-1) a(AST)/(U·L-1)
Control — 77.5±20.3 84.3±17.5
ConA — 563.4±119.3### 533.6±104.5###
DDB 0.15 207.6±63.5＊＊＊ 218.4±59.8＊＊＊
LY L 12 308.6±103.2＊＊ 297.6±93.4＊＊
LY M 24 236.4±68.9＊＊＊ 243.2±48.9＊＊＊
LY H 48 174.6±46.3＊＊＊ 189.4±50.4＊＊＊
　　###P<0.001 , compared to control g roup;＊＊P<0.01 , ＊＊＊P<0.001 , compared to ConA group
2.4　LY对小鼠非特异性免疫功能的的影响(碳
粒廓清法)
昆明种小鼠72只 ,雌雄各半 ,体质量(20±2)g ,
随机分为 6组 ,每组 12只 。分别灌胃给予联苯双
酯组(DDB , 0.15 g·kg-1)、LY低剂量组(LY L ,
12 g·kg-1)、LY 中剂量组(LY M , 24 g·kg-1)、
LY 高剂量组(LY H , 48 g·kg -1), 给药容积
20 mL·kg-1 ,模型对照组给予等量的溶媒(质量
分数为 0.5%的CMC Na)。每日 1次 ,连续给药
5 d ,末次给药后 1.5 h小鼠静脉给予体积分数为
25%的印度墨汁 10 mL·kg-1 ,于 2 min和 10 min
分别用定量毛细玻璃管各鼠右眼眶取血 0.02 mL ,
立即加入到 2 mL 的质量分数为 0.1%的 Na2CO3
溶液中 ,另取 0.02 mL 小鼠正常血溶于 2 mL质量
分数为 0.1%的 Na2CO3 溶液校零 ,于 UV 9100
分光光度计 675 nm 处比色 ,测 OD值 ,随后处死
小鼠 ,摘取肝脏 、脾脏 ,称量湿重 ,并计算廓清指数
(K)、肝脾脏器系数 、吞噬指数(α)。
结果见表 5及表 6 ,3个剂量的 LY均能明显
提高单核—巨嗜细胞吞噬功能 ,增加血清中异物
清除速率(与对照组比较 P <0.05 或 0.01 或
0.001);陆英颗粒中 、高剂量均能明显提高肝脾网
状内皮系统吞噬指数(与对照组比较 P <0.05或
0.01),低剂量组有提高趋势 ,但与对照组比较无
显著性差异。此外 , 3个剂量的 LY 均能明显提
高小鼠肝脾脏器系数 ,尤以对提高肝脏脏器系数
效果更好(与对照组比较 P<0.05或 0.01)。
526 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 23卷
Table 5　Effect of LY on the clearance rate of carbon particles in blood of mice(n=12 , x±s)
Group Dose/(g·kg-1) K α
Control — 0.018 2±0.006 9 5.14±0.56
DDB 0.15 0.029 9±0.010 9＊＊ 5.47±0.57
LY L 12 0.026 0±0.008 5＊ 5.19±0.33
LY M 24 0.032 3±0.009 3＊＊ 5.31±0.32＊
LY H 48 0.042 3±0.012 4＊＊＊ 5.69±0.42＊＊
　　＊P <0.05 , ＊＊P<0.01 , ＊＊＊P<0.001 , compared to control g roup
Table 6　Effect of LY on the coefficient of organ in mice(n=12 , x±s)
Group Dose/(g·kg -1) w(coefficient of liver)/ % w(coefficient of spleen)/%
Control — 0.045 0±0.002 3 0.005 2±0.001 1
DDB 0.15 0.051 6±0.006 9＊ 0.006 3±0.001 0＊
LY L 12 0.050 8±0.007 1＊ 0.006 2±0.000 7＊
LY M 24 0.053 8±0.007 3＊＊ 0.006 3±0.000 8＊
LY H 48 0.054 8±0.007 5＊＊ 0.006 8±0.001 1＊＊
　　＊P <0.05 , ＊＊P<0.01 , ＊＊＊P<0.001 , compared to control g roup
2.5　统计方法
实验数据均采用均值±标准差( x ±s)表示 ,
两组均数间的比较采用 t 检验 ,由 SPSS 软件统
计处理。
3　讨论与结论
陆英有效部位提取物抗 CCl4 致小鼠急性肝
损伤试验结果表明 , LY 各剂量组均能显著对抗
CCl4 致小鼠急性肝损伤导致的血清中 ALT 、AST
升高以及肝脏 MDA含量升高(与模型组比较P<
0.05或 0.01 或 0.001),病理检查也表明 LY各
剂量组肝损伤程度明显减轻 ,这些结果均有良好
的剂量依耐性。结果提示 LY对 CCl4 致小鼠急
性肝损伤有明显的保护作用 ,其保肝作用与对抗
脂质过氧化有关 。
LY各剂量组均能显著对抗 D 半乳糖胺盐
酸盐致大鼠急性肝损伤导致的血清中 ALT 、
AST 、ALP 升高以及Glu含量急剧降低(与模型组
比较 P <0.05 或 0.01或 0.001),并且有良好的
剂量依赖性 。结果提示 LY 对 D 半乳糖胺盐酸
盐致大鼠急性肝损伤有明显的保护作用 。
LY各剂量组均能显著对抗 ConA 致小鼠急
性肝损伤导致的血清中 ALT 、AST 升高(与模型
组比较 P <0.01或 0.001),并且有良好的剂量依
耐性。结果提示 LY对 ConA致小鼠急性肝损伤
有明显的保护作用 。另外 ,作者也进行了“LY对
小鼠非特异性免疫功能的影响”的研究 ,由于静脉
注射一定大小的颗粒物质 ,迅速被肝 、脾等器官内
网状内皮细胞吞噬而使其在血浆浓度降低 ,因此
可从其廓清率了解整个单核巨噬细胞系统的吞噬
功能。LY对小鼠单核 巨噬细胞吞噬功能的影
响试验结果表明 , LY 各剂量组均能明显提高小
鼠肝脾脏器系数 ,尤以对提高肝脏脏器系数作用
明显(与对照组比较 P<0.05或 0.01),均能明显
提高单核 巨嗜细胞吞噬功能 ,增加血清中异物清
除速率(与对照组比较 P <0.05 或 0.01 或
0.001);LY中 、高剂量均能明显提高肝脾网状内
皮系统吞噬指数(与对照组比较 P <0.05 或
0.01);这些结果均有良好的剂量依耐性 。结果提
示 LY有增强小鼠非特异性免疫功能的作用。
综上所述 ,陆英有效部位提取物(体积分数为
75%乙醇提取物经大孔树脂纯化 ,体积分数为
30%乙醇洗脱物 , LY)对多种急性实验性肝损伤
有明显的保护作用并且能增强小鼠非特异性免疫
功能的作用 ,并且有良好的剂量依赖性 ,作为保肝
降酶药物 ,其应该具有良好的开发前景 ,但其作用
机制有待于进一步深入探讨。
参考文献:
[ 1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和
国卫生部药品标准:中药材 , 第一册 [ S] .北京:化学
工业出版社 , 1992.49.
[ 2] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草
[ M] .上海:上海科技出版社 , 1999.6573-6576.
527第 8 期 杨　威等:陆英提取物对急性化学性肝损伤的保护作用　　　
Primary study on the pharmacodynamics of the ex-
tract of active part of Sambucus chinensis Lindl.
(LY)against hepatitis
YANG Wei , WANG Xi-sha , WANG Min-wei , LIAO Qiong-feng , BI Kai-shun
(School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceut ical Universi ty , Shenyang 　110016 , China)
Abstract:Objective To primarily investigate the pharmacodynamics of the LY against hepatitis.Methods
The liver-injury model w as established in mice or rats induced by CCl4 o r D-GalN or Con A.Phagocy tosis of
mononuclear macrophage w as determined by detecting the content change of the carbon particle in blood.
Results The test of LY showed significantly pro tective ef fects on mice or rats acute hepatic injury induced
by CCl4 , D-GalN or Con A.A significant improvement on the abili ty of nonspecific immunity of mice was
observed.Conclusions The test of LY has significant protective effects against many kinds of chemical and
immunological liver injuries , what s mo re , it can improve the ability of nonspecific immunity of mice.
Key words:Sambucus chinensis Lindl;against hepati tis;acute hepatic injury;nonspecif ic immunity
(上接第 509页)
Simultaneous determination of the contents of the
cinnamic acid and harpagoside in Radix Scrophular-
iae by RP-HPLC
ZHANG Hong-xia1 , SONG Jin-yu2 , ZHAO Rong-shu3 , ZHAO Huai-qing1 , GONG Ke-min1
(1.School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang 　110016 , China;　2.De-
partment of Tradit ional Chinese Medicine , Shanxi Biological Applicat ion Vocationl Technical Col lege ,
Taiyuan　030031 , China;3.Shenyang Drug Instant Inspect ion Insti tute , Shenyang　110015 , China)
Abstract:Objective To establish RP-HPLC methods for the determinat ion of the contents of cinnamic acid
and harpagoside in Scrophulariae.Methods The DiamonsilTM C18 column was used at 32 ℃.The mobile
phase consisted of a mixture of 1% acetic acid in w ater -methanol(40∶60 , V∶V)at a flow rate of
0.70 mL·min-1.The detection w avelength w as set at 280 nm.Results The linear ranges were 0.004 65 ～
0.037 20 g·L-1 , 0.020 6 ～ 0.164 8 g·L-1 respectively ;The average recoveries of the four constituents w ere
99.6%(RSD=1.4%), 100.1%(RSD=1.3%), respect ively .Conclusions The methods can be used for
quality control of Radix Scrophulariae.
Key words:Radix Scrophularia;cinnamic acid;harpagoside;RP-HPLC;content determination
528 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 23卷