全 文 ：作者简介:许江红 , 大学本科 , 主管药师;Tel: 13576686219;E-mail:Xujianghong520@126.com
HPLC法测定陆英片中熊果酸的含量
许江红 , 张若良 (江西省赣州市食品药品检验所 , 赣州　341000)
摘要:　采用 HPLC法测定陆英片中熊果酸的含量。色谱柱为 SymmertryC18 , 流动相为甲醇-水 (82∶
18), 用磷酸调 pH值至 3.0, 流速为 1.0mL·min-1 , 检测波长为 210nm。线性范围为 0.095 ～ 0.950μg, r
=0.9995。平均回收率为 99.6%, RSD为 0.70%。本法简便 、 快速 、准确 , 可用于产品的质量控制。
关键词:　陆英片;HPLC法;熊果酸
中图分类号:R927.2　　文献标识码:A　　文章编号:1002-7777 (2008)02-0131-02
DeterminationofUrsolicAcidinLuyingTabletsbyHPLC
XuJianghongandZhangRuoliang(GanzhouInstituteforFoodandDrugControl, Ganzhou341000)
ABSTRACT　AHPLCmethodwasestablishedforthedeterminationofUrsolicAcidinLuyingTablets.A
SymmertryC18 columnwasusedwithmethanolandwater(82∶18, adjustedtopH3.0withphosphoricacid)as
themobilephase, theflowratewas1.0mL·min-1 andthedetectionwavelengthwas210nm.Thecalibrationrange
was0.095 ～ 0.950μg, r=0.9995.Theaveragerecoverywas99.6% withRSD=0.70%.Themothodis
convenient, sensitiveandaccurate.Itcanbeusedforthequalitycontrol.
KEYWORDS　LuyingTablets;HPLC;ursolicacid
　　陆英片为陆英的单方制剂 , 收载于卫生部药品
标准中药成方制剂 [ 1] , 具有舒肝健脾 , 活血化瘀
之功效 , 用于急性病毒性肝炎 [ 2] 。该制剂原标准
无含量测定方法 , 不利于质量控制 , 方中陆英的主
要成分为熊果酸 , 本文采用 HPLC法对制剂中陆英
的有效成分熊果酸进行含量测定 , 所建立的方法准
确可靠 , 可用于该制剂的质量控制。
1　仪器与试药
Waters高效液相色谱仪 (515泵 、 2487紫外检
测器 、 Milennium32色谱工作站), BP211D型电子
天平;熊果酸对照品 (中国药品生物制品检定所 ,
批号:110742-200415);陆英片样品 (同一厂家产
品 , 市 售 , 批 号: 031105, 031106, 031107,
031108, 031109, 031110, 031112, 031113,
031114, 031115);甲醇为色谱纯 , 水为重蒸馏水 ,
其它试剂均为分析纯 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:SymmertryC18 (3.9mm ×150mm,
5μm);流动相:甲醇 -水 (82∶18), 用磷酸调 pH
值至 3.0;流速:1.0mL· min-1;检测 波 长:
210nm;柱温:室温;进样量:20μL。理论板数按
熊果酸峰计算应不低于 4000 , 熊果酸峰与相邻杂
峰之间的分离度为 1.9, 符合要求。
2.2　溶液制备
2.2.1　对照品溶液制备　精密称取熊果酸对照品
9.50mg, 置 100mL量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至
刻度 , 作为对照品储备液。精密量取储备液 10mL
置 50mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
2.2.2　供试品溶液制备　取重量差异项下本品 ,
研细 , 精密称取约 20g, 加乙醚 50mL, 水浴回流 1
小时 , 放冷 , 过滤 , 用少量乙醚荡洗回流瓶 , 洗液
一并过滤 , 滤液蒸干 , 残渣用甲醇溶解并定容至
5mL, 摇匀 , 经 0.45μm的滤膜过滤 , 即得 。
2.2.3　阴性溶液制备　取辅料适量 , 按供试品溶
液制备方法制成阴性溶液。
2.3　干扰试验
取供试品溶液 , 对照品溶液和阴性溶液各
131中国药事 2008年第 22卷第 2期
DOI :10.16153/j.1002-7777.2008.02.006
20μL, 在上述色谱条件下进样 , 分析 , 供试品溶
液主峰的保留时间与对照品主峰的保留时间一致 ,
且阴性无干扰 , 见图 1。
a.对照品;b.样品;c.阴性样品;d.溶剂 ; 1.熊果酸。
图 1　陆英片的 HPLC色谱图
2.4　线性关系考察
精密量取对照品储备液 0.5, 1, 2, 3, 4 , 5mL分
别置 10mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,各进
样 20μL,测定 。以进样中熊果酸的量为横坐标 ,峰
面积为纵坐标绘制标准曲线 ,计算回归方程:
Y=9.27865×105X-7.4416×103　r=0.9995
结果表明:熊果酸在 0.095 ～ 0.95μg范围内呈良好
的线性关系 。
2.5　精密度试验
取对照品溶液重复进样 5次 , 测得峰面积的
RSD为 0.51%。
2.6　稳定性试验
取同一供试品溶液 (批号:031105),于配制后
0, 2, 4, 6 , 8小时分别进样 20μL,测得峰面积的 RSD
为 1.0%,表明供试品溶液在 8小时内稳定。
2.7　重复性试验
取本品(批号:031105),照供试品溶液制备方
法制成供试品溶液(n=6),分别测定含量 ,测得熊
果酸的平均含量为 2.46μg/片 , RSD为 1.1%。
2.8　回收率试验
取已知含量的供试品约 10g, 精密称定 , 分别
精密加入对照品溶液 2.5mL, 同供试品处理 , 按样
品测定方法测定 , 计算回收率 , 结果见表 1。
2.9　样品测定
表 1　回收率测定结果 (n=6)
样品中含量
(μg)
加入对照品
量(μg)
测得量
(μg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
51.8 47.5 99.2 99.8
51.7 47.5 99.0 99.6
51.9 47.5 99.3 99.8 99.6 0.70
51.5 47.5 98.7 99.4
52.0 47.5 99.7 100.4
50.3 47.5 97.0 98.3
　　取 10批样品 , 依法制备供试品溶液 , 分别取
对照品溶液 , 供试品溶液 20μL进样 , 测定峰面
积 , 按外标法计算含量 , 结果见表 2。
　　　　　　　　表 2　样品测定结果　　　　　μg/片
批号 含量 批号 含量
031105 2.459 031110 2.468
031106 2.457 031112 2.372
031107 2.506 031113 2.323
031108 2.416 031114 2.609
031109 2.691 031115 2.313
3　讨论
经紫外光谱扫描 , 熊果酸的甲醇溶液在 210nm
的波长处有最大吸收 , 该波长存在较强的末端吸
收 , 用分析纯甲醇作溶剂时所得色谱杂峰多 , 且基
线不稳 , 本试验选用色谱纯甲醇为溶剂 , 获得较理
想的峰形 。
参考有关文献[ 3-7] , 试验以下流动相:乙腈-甲醇-
0.1%醋酸铵溶液(68∶10∶22)、甲醇 -0.02mol· L-1
磷酸二氢钠溶液(65∶35), 用磷酸调 pH值至 3.0、
甲醇 -水(82∶18), 用磷酸调 pH值至 3.0, 结果前
两者均难达到基线分离 , 且用甲醇 -0.02mol· L-1磷
酸二氢钠溶液(65∶35)存在很大的基线噪音;而
本文所用流动相在较短保留时间能使熊果酸与齐墩
果酸峰达到良好的基线分离 。
在相同时间比较超声与回流的效果 , 结果回流
效果好;另取经回流 30 , 60, 90分钟所得样品溶
液分别测定含量 , 结果在回流 60分钟与回流 90分
钟所测得的含量一致 , 说明样品中待测成分回流
60分钟即可提取完全 。
熊果酸和齐墩果酸的分离和色谱柱的选择有很
大关系 , 曾经试验了相同填料的不同品牌色谱柱 ,
发现在相同条件下 , 文中使用的色谱柱能使熊果酸
与齐墩果酸进行较好地分离 。
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