全 文 ：第 29卷第 5期
2007年 10月　　
　 大 连 医 科 大 学 学 报
Journa l ofDalianM edica lUniversity
　 Vo .l 29 No. 5
O ct. 2007
比色法测定大麻药及其提取物中总皂苷的含量*
许丽娜 ,蔡博能 ,尹连红 ,王晓娜 ,彭金咏
(大连医科大学药学院 ,辽宁 大连 116044)
摘要:[目的 ]建立大麻药及其相关提取物的总皂苷含量分析方法。 [方法 ]样品经香草醛 -高氯酸显色后 , 以人参
皂苷 Rg1为对照品 , 进行紫外分光光度测定 ,优选最佳分析条件。 [结果 ]最佳分析条件为:0. 2 mL 5% 香草醛 -冰
醋酸溶液和 0. 8 m L高氯酸为显色剂 , 显色温度为 60℃, 显色时间为 15 m in, 测定波长为 550 nm。样品在 3. 25 ～
19. 52 μg /m L范围内呈良好的线性关系 , 回归方程为 Y =0. 030X+0. 117(r=0. 9995),平均加样回收率为 97. 45%
(RSD=1. 75%, n =5)。 [结论 ]本法可作为大麻药及相关提取物中皂苷的质量控制方法。
关键词:大麻药;总皂苷;比色法
中图分类号:914　　　文献标识码:A　　　文章编号:1671 -7295(2007)05 - 0448 -03
　　大麻药 [ dolichos tenuicaulis (Bake r) C ra ib]是豆科扁豆
属植物镰果扁豆的根和叶 ,在我国云南 、四川 、甘肃等地均有
分布 , 尤其在云南有着丰富的植物资源 , 具有祛风活血 , 止血
止痛等功效。在云南民间主要用于骨折 、跌打损伤 、风湿疼
痛 、外用治疗外伤出血 [ 1] 。目前 ,有关大麻药化学成分及其
生物活性的研究报道甚少 , 作者在对大麻药的前期研究中 ,
发现其含有大量结构新颖的三帖皂苷类化合物 (相关研究
内容另文报道)。为了进一步研究该药材的物质基础及生物
活性 , 有必要建立大麻药及相关提取物中总皂苷的含量测定
方法。本研究中 , 采用紫外 -可见分光光度法 [ 2, 3] , 以人参
皂苷 Rg1为对照品 , 对大麻药及其相关提取物中的总皂苷进
行了含量测定 , 优化了最佳的分析条件 , 并建立了简便可靠
的分析方法。
1　材料和方法
1. 1　试剂与仪器
U3010紫外 -可见分光光度计 ( H ITACH I, Japan),
BS210S万分之一电子天平 (北京赛多利斯天平有限公司),
KUDOS超声清洗器 (上海科导超声仪器有限公司), SENCO
旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司)。
人参皂苷 Rg1对照品(110703 -200424),购于中国药品
生物制品检定所;大麻药购于云南青草源药业有限公司 , 并
经大连医科大学药物化学教研室刁云鹏老师鉴定为 dolichos
tenuicau lis(Bake r) C ra ib的根。香草醛 、高氯酸 、甲醇为分析
纯(天津科密欧化学试剂开发中心 ), 冰醋酸为分析纯(沈阳
试剂三厂)。
1. 2　实验方法
1. 2. 1　溶液的制备:精密称取干燥至恒重的人参皂苷 Rg1
对照品 12. 2 mg, 置于 25 mL量瓶中 ,甲醇溶解后定容。再精
密量取该溶液 10 m L, 置于 25 m L容量瓶中 , 用甲醇稀释至
刻度 ,即得 0. 195 m g /mL的对照品溶液。
大麻药经适当的粉碎后 , 干燥脱水至恒重 , 精密称取
0. 2 g, 加入甲醇 , 超声提取 2次 , 每次 30 m in, 过滤 、合并滤
液并定容至 25 m L容量瓶中 , 即得大麻药甲醇提取液。
称取大麻药适量 ,用 75%乙醇回流提取 2次 , 每次 2 h。
提取液经旋转蒸发仪浓缩得浸膏 , 将其加到 D101大孔树脂
柱上(4 cm ×60 cm), 依次用水 、 40%、60% 和 95% 的乙醇
梯度洗脱。接收 60%乙醇洗脱流份 , 减压浓缩后真空干燥
得浅白色粉末。精密称取该纯化物 12. 5 m g, 用甲醇溶解并
定容于 25 mL容量瓶中 ,即得大麻药大孔树脂纯化物溶液。
1. 2. 2　测定方法:准确量取供试液 0. 3 m L, 置 10 mL具塞
试管中 ,挥干溶剂 , 加 0. 2 mL新配制的 5%香草醛 -冰醋酸
溶液和 0. 8 mL高氯酸 , 摇匀 , 60℃水浴 15 m in,取出立即用
水冷却至室温 ,加冰醋酸 5 m L, 摇匀。在紫外 -可见分光光
度计上测定其 A值。
2　结　果
2. 1　最佳测定条件的确定
2. 1. 1　最大吸收波长的确定:准确量取对照品溶液和供试
品溶液 ,按 1. 2. 2项下所述方法显色 , 以相关溶剂为空白 ,在
* 收稿日期:2007 - 06 - 13;修回日期:2007 - 07 - 20
　作者简介:许丽娜(1984 -), 女 ,辽宁北票人 , 助理实验师。
　通讯作者:彭金咏(1973 -), 男 ,湖北人 , 副教授。 E -m ail:jinyongpeng2005@163. com
紫外 -可见分光光度计上进行扫描(见图 1)。由图可知 , 人
参皂苷 Rg1 、大麻药甲醇提取物与大孔树脂纯化物均在 550
nm 处有最大吸收。 因此 , 本实验中选择 550 nm 为测定波
长。
图 1　对照品及供试品的光谱扫描图
1.对照品　2.大麻药甲醇提取物　 3.大麻药树脂纯化物
2. 1. 2　香草醛浓度的考察:取人参皂苷 Rg1对照品溶液 , 按
1. 2. 2项下所述方法 , 分别加入 1%、 3%、5%、 7%、 9%的香
草醛 -冰醋酸溶液显色 , 测定 A 值 , 分别为 0. 319、 0. 412、
0. 474、0. 475、0. 465。结果表明 , 香草醛浓度为 5%时 A值较
大 , 故本实验中采用 5%香草醛 -冰醋酸溶液作为显色剂。
2. 1. 3　高氯酸用量的考察:取供试品溶液 , 按 1. 2. 2项下所
述方法 , 分别加入高氯酸 0. 4、 0. 6、 0. 8、 1. 0、 1. 2 m L摇匀 ,
60℃水浴加热 15 m in, 取出后立即用水冷却 , 依次加入冰醋
酸稀释 , 使最终体积为 6 mL, 测定 A 值 , 分别为 0. 359、
0. 385、0. 393、0. 330、 0. 340。结果表明 , 高氯酸的最佳用量
为 0. 8 m L。
2. 1. 4　反应温度的考察:取供试品溶液 ,按 1. 2. 2项下所述
方法显色 , 反应温度分别为 40、 50、 60、 70 和 80℃, 测定 A
值 , 分别为 0. 252、0. 279、 0. 379、0. 402、0. 402。结果表明 , 温
度从 40℃增加到 60℃ 时 ,吸光度值逐渐增大;当反应温度
大于 60℃时 , 吸光度值基本保持不变 ,故此试验反应温度确
定为 60℃。
2. 1. 5　反应时间的考察:取供试品溶液 , 按 1. 2. 2项下所述
方法显色 , 显色时间分别设定为 5、10、15、 20和 25 m in, 测定
A值 ,分别为 0. 253、0. 294、 0. 397、 0. 328、0. 337, 因此 , 最佳
反应时间确定为 15 m in。
2. 2　标准曲线的建立
准确量取对照品溶液 0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6 mL,按
1. 2. 2项下所述方法显色 ,每个浓度平行测定 3次。以对照
品浓度(μg /mL)为横坐标 , 3次吸光度的平均值为纵坐标绘
制标准曲线 , 得回归方程 Y =0. 030X+0. 117,回归系数 r=
0. 9995,在 3. 25 ～ 19. 52 μg /mL范围内呈现良好的线性关
系 , 见图 2。
2. 3　稳定性实验
取供试品溶液 , 按 1. 2. 2项下所述方法进行显色 , 分别
在 5、15、30、60、90、120、 150 m in测定 A值 , 结果见图 3。由
图可知 , 样品显色后 3 h内基本稳定。
图 2　人参皂苷 Rg1标准曲线
图 3　稳定性曲线
2. 4　精密度实验
取对照品溶液 5份 , 按 1. 2. 2项下所述方法显色 , 测定
A值。计算得出其相对标准偏差 RSD为 1. 75%。
2. 5　加样回收率实验
取已知总皂苷含量的供试品 5份 ,各加入一定量的人参
皂苷 Rg1对照品 , 再按 1. 2. 2项下所述方法显色并测定 A
值 ,计算加样回收率 , 见表 1。
2. 6　供试品总皂苷含量测定
取大麻药甲醇提取物及树脂纯化物溶液各 3份 , 每份
0. 3 mL, 用 1. 2. 2项下所述方法显色后测定 A值 ,计算得到
大麻药中总皂苷的含量为 1. 69%, 纯化物中总皂苷的含量
为 27. 51%,见表 2。
3　讨　论
大麻药中总皂苷含量测定方法目前还未见文献报道 ,由
前期研究与化学鉴别反应试验可知该药物含有大量的皂苷
类化学成分。参考相关文献 [ 3 ～ 5] , 本研究选择了经香草醛 -
高氯酸显色后 ,用比色法测定大麻药中总皂苷的含量。
香草醛 -高氯酸常作为检测三萜皂苷 、皂苷类的显色试
剂 [ 6] ,其反应原理见图 4。三帖皂苷与香草醛在强酸性条件
下生成深紫色络合物 , 在一定浓度范围内 , 其浓度与吸光度
符合比尔定律 ,可通过比色进行定量。
香草醛的浓度 、高氯酸的用量等条件在显色及测定的过
程中起着至关重要的作用 ,直接决定着响应值的大小与灵敏
度的高低。因此 ,本实验优选了含量分析的最佳条件 , 对最
大吸收波长 、香草醛浓度 、高氯酸用量 、反应温度和加热时间
分别进行了考察。结果发现 ,在 550 nm、5%香草醛 -冰醋
449第 5期　　　　　　　　　　　　许丽娜 , 等:比色法测定大麻药及其提取物中总皂苷的含量
表 1　加样回收率测定结果
样品量
(m g)
标准品加入量
(mg)
实际测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
0. 1349 0. 0975 0. 2328 100. 41
0. 1349 0. 0975 0. 2277 95. 18
0. 1349 0. 0975 0. 2280 96. 13 97. 45 1. 75
0. 1349 0. 0975 0. 2328 100. 41
0. 1349 0. 0975 0. 2276 95. 12
表 2　样品含量测定结果
样 品 含 量(%) 平均含量(%) RSD (%)
大麻药 - 1 1. 54
大麻药 - 2 1. 78 1. 69 2. 12
大麻药 - 3 1. 69
大麻药纯化物 -1 27. 83
大麻药纯化物 -2 28. 92 27. 51 3. 11
大麻药纯化物 -3 27. 20
图 4　香草醛 -高氯酸显色原理
酸溶液 0. 2 m L、高氯酸 0. 8 mL、水浴 60℃、加热 15 m in的条
件下 , 样品的吸光度值最大 ,反应灵敏度最高。
通过本试验 , 作者建立了大麻药中总皂苷的测定方法 ,
本法简单 、灵敏 、准确 、重复性好 , 可用于大麻药及其提取物
中总皂苷的含量测定。
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Determ ination content of total Saponins ofdo lichos tenuicaulis (Baker)
Craib and crude ex tracts by spectrophotometry
XU Li- na, CA I Bo - neng, Y IN Lian - hong, WANG X iao - na, PENG Jin - yong
(College ofPharmacy, DalianMed ica lUniversity, Da lian 116044, China )
Abstrac t:[ Ob jective] To e stablish a m ethod fo r de term ination of to ta l sapon ins of dolichos tenuicaulis (Bake r) C ra ib and crude ex-
tracts by UV. [ Methods] The sam ples w ere de te rm ined by UV after reaction w ith vanillin - pe rchlo ric acid, and g inseno side Rg1 w as
se lec ted as the standard. Som e pa rame ters which m ight e ffec t the re su lts w ere a ll investiga ted and optim ized. [ Results] The su itab le
analy tic conditions w ere optim ized as fo llow s:5% vanillin - ace tic ac id so lu tion 0. 2 m L, perch lo ric ac id 0. 8 m L, tem pe ra ture 60℃,
reac tion tim e 15 m in. , de tection w aveleng th 550 nm. The samp le sw ere linear in the range of 3. 25 ～ 19. 52μg /mL w ith the reg ression
equa tion o fY =0. 030X +0. 117(r=0. 9995), and the average recove ryw as 97. 45% (RSD=1. 75%, n =5) under the se lected con-
ditions. [ Conclusion] This m ethod is suitable fo r the de te rm ina tion o f to ta l saponins fo r quality con tro l o f dolichos tenuicau lis(Bake r)
Craib.
K ey words:dolichos tenuicaulis(Bake r) Craib;to tal saponins;spectropho tom e try
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