全 文 ： 作者简介:字刚(1982 ～),男 ,硕士研究生 ,主要从事新药制剂和质量控制研究。
通讯作者:丁中涛(1968～ ),男 ,博士, 教授, 博士生导师, 主要从事天然活性物质的分离分析研究。 E-mail:ztding@ynu.edu.cn
HPLC法测定鸡嗉子叶中 3种黄酮苷的含量
字 刚1 , 2 , 丁中涛2
(1.云南省药物研究所制剂研究中心 , 云南 昆明 650111;2.云南大学化学科学与工程学院 , 云南 昆明 650091)
摘 要:目的:建立鸡嗉子叶中金丝桃苷 、异槲皮苷 、槲皮
苷的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法 , 以 C18 柱 ,
甲醇-0.2%磷酸溶液梯度洗脱 , 检测波长 352 nm , 进行定量
测定。结果:金丝桃苷 、异槲皮苷 、槲皮苷在 100 倍范围内线
性关系良好 , 相关系数均大于 0.9990 , 加样回收率分别为
100.33%、97.78%、99.83%。 结论:该方法能准确可靠地测
定鸡嗉子叶中金丝桃苷 , 异槲皮苷 ,槲皮苷的含量。
关键词:鸡嗉子叶;H PLC 法;金丝桃苷;异槲皮苷;槲
皮苷
中图分类号:R284 文献标识码:A
文章编号:1007-2349(2011)07-0072-02
鸡嗉子叶为山茱萸科植物头状四照花[ Dendrobenthamia
capitata(Wall.)H utch.] 的叶 , 功能消积杀虫 , 消肿解毒 , 利水
消肿。主治食积 、小儿疳积 、虫积腹痛 、肝炎 、腹水 、水火烫伤 、
外伤出血 、疮疡。鸡嗉子叶是彝族习用药 , 临床应用已有较长
的历史[ 1] 。
该药材收载于《云南省中药材标准》(2005 年版第 4 册 ·
彝族药),无含量测定方法。笔者建立了金丝桃苷 、异槲皮苷 、
槲皮苷 3 种黄酮苷的含量测定方法 , 为控制鸡嗉子叶药材的
质量提供科学的实验依据。
1 实验仪器和试药
1.1 仪器 美国 Ag ilent 1100 高效液相色谱仪 , Mettle r
AE163电子天平 , HS6150D 超声清洗仪。
1.2 试剂和药材 鸡嗉子叶:分别来源于昆明西山 090406 ,
楚雄 090510 , 大理 090512(经云南省药物研究所生药室鉴定
为山茱萸科植物鸡嗉子);标准品:金丝桃苷和槲皮苷对照品
为中国药品生物制品检定所提供 , 批号:金丝桃苷 111521 -
200303(供含量测定);槲皮苷 111538-200403(供含量测定)。
异槲皮苷为自制对照品 , 经 H PLC 检测 ,纯度大于 98%。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:Hanbon L ichro spher C18 柱(4.6×
150 mm , 5 μm),流动相 A:0.2%磷酸溶液 B:甲醇 , 按表 1 进
行梯度洗脱 , 流速为 1.0 mL/ min ,检测波长为 352 nm , 在此条
件下金丝桃苷 , 异槲皮苷和槲皮苷对照品溶液及供试品溶液
的色谱图如图 1 所示被测组分分离度均达到 1.5 以上 , 理论
塔板数均不低于 5000。
表 1 流动相洗脱梯度
时间(min) A B
0 74 26
55 68 32
57 74 26
60 74 26
对照品(从左至右):金丝桃苷,异槲皮苷 ,槲皮苷
供试品
图 1 色谱图
2.2 对照品溶液的制备 精密称取 60 ℃减压干燥 2 h 的金
丝桃苷 、异槲皮苷 、槲皮苷对照品适量 , 置容量瓶内 ,加甲醇适
量 , 超声处理使溶解 , 放冷 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 , 滤过 , 即得 ,
每 1 mL 含金丝桃苷 、异槲皮苷 、槲皮苷分别为 80 μg 、50 μg 、
60 μg 。
2.3 供试品溶液的制备 精密称取鸡嗉子叶药材细粉
1.0 g , 精密加入甲醇 50 mL ,精密称重 , 加热回流提取 2 h , 放
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冷 , 补足缺失重量 ,摇匀 , 滤过 ,取续滤液 , 即得。
2.4 线性关系 精密称取在60 ℃减压干燥 2 h 的金丝桃苷 、
异槲皮苷 、槲皮苷对照品 10.37 mg 、8.51 mg、5.90 mg 置 10
mL 容量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 制得 7#混合
对照品溶液 , 精密吸取对照品溶液 2.5 mL、2.5 mL 、1 m L 分
别置 5 mL 、10 mL 、10 mL 的容量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至
刻度 , 摇匀 , 得 6 #、5 #、4#溶液 , 精密吸取 4 #溶液 2.5 mL、
1 mL、1 m L分别置 5 m L、5 m L、10 mL 的容量瓶中 , 加甲醇溶
解并稀释至刻度 , 摇匀 ,得 3 #、2# 、1 #溶液。分别进样 10 μL ,
测定 , 结果以浓度(mg/ m L)为横坐标(X),面积为纵坐标(Y),
得回归方程 , 见表 2。
表2 线性关系测定结果
测定组分 回归方程 相关系数 R 线性范围
金丝桃苷 Y=20664X+151.95 0.9991 0.1037～ 10.37μg
异槲皮苷 Y=15883X+100.91 0.9991 0.0851～ 8.51μg
槲皮苷 Y=16104X+61.659 0.9992 0.059～ 5.90μg
2.5 精密度试验 取配制好的混合对照品溶液按照含量测
定方法依法测定 , 连续进样 6 针 , 以峰面积计算 , 结果 3 个组
分的 RSD 均小于 2%。
2.6 重复性试验 称取同一批供试品 , 按照制备方法同时制
成 6 份供试液 ,进样 10μL ,测定。按 2.4 下所得回归方程分别
计算含量 , 结果 3 个组分的 RSD均小于 3%。
2.7 稳定性试验 取已配制好的供试品溶液按照含量测定
方法依法测定 , 分别于 0 , 1 , 3 , 6 , 12 , 24 h 进样 , 进样 10 μL , 以
峰面积计算 , 结果 3 个组分的 RSD均小于 3%。
2.8 加样回收率试验 分别取已知金丝桃苷 , 异槲皮苷和槲
皮苷含量的供试品 6 份 , 分别加入金丝桃苷 ,异槲皮苷和槲皮
苷的浓度为 1.99 mg/m L , 1.80 mg/ mL , 2.02 mg/ mL 的混合
对照品溶液各 1 mL ,然后按确定好的样品前处理方法同法制
备 , 按供试品溶液的含量测定方法依法测定 , 计算回收率 , 结
果见表 3 ～ 表 5。
表 3 金丝桃苷加样回收率试验结果
测得值/mg 加入的对照品/mg 回收率/ % 平均回收率/ %
2.08 104.52
1.99 100.00
1.93 1.99 96.98 100.33
1.98 99.50
1.96 98.49
2.04 102.51
表 4 异槲皮苷加样回收率试验结果
测得值/mg 加入的对照品量/mg 回收率/ % 平均回收率/ %
1.75 97.22
1.87 103.89
1.72 1.80 95.56 97.78
1.73 96.11
1.72 95.56
1.77 98.33
表 5 槲皮苷加样回收率试验结果
测得值/mg 加入的对照品量/mg 回收率/ % 平均回收率/ %
1.99 98.51
1.94 96.04
2.10 2.02 103.96 99.83
1.97 97.52
2.10 103.96
2.00 99.01
2.9 样品含量测定 样品 3 批 , 分别依 2.3 项下方法制成供
试品溶液 , 依法测定金丝桃苷 , 异槲皮苷和槲皮苷含量 , 结果
见表 6。
表 6 样品含量测定
产地 金丝桃苷/mg· g-1 异槲皮苷/mg·g -1 槲皮苷/mg· g -1
大理 4.02 2.48 3.02
昆明西山 2.98 1.88 2.00
楚雄 3.03 1.49 1.65
3 小结
据现代文献报道 , 鸡嗉子叶和皮中含有黄酮类 、三萜 、环
烯醚萜类 、甾醇 、多酚类和有机酸类化合物[ 2] , 笔者在对其化
学成分研究过程中发现鸡嗉子叶中含有多种黄酮类化合物 ,
金丝桃苷 、异槲皮苷 、槲皮苷的含量较其他黄酮类成分要高 ,
选用以上 3种组分作为指标物 , 采用高效液相色谱法对鸡嗉
子叶中黄酮类成分进行含量测定研究。
以甲醇 、乙醇 、50%甲醇为溶剂考察黄酮苷的提取方法 ,
结果发现以甲醇为溶剂 ,加热回流 2 h 鸡嗉子叶中金丝桃苷 、
异槲皮苷 、槲皮苷 3 种组分提取率最高 , 提取较完全。
参考文献:
[ 1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[ M] .上海:上海
科学技术出版社 , 1999:743～ 744.
[ 2] 田雅娟 ,罗应刚 ,李伯刚 , 等.山荔枝化学成分的研究[ J] .天然产
物研究与开发 , 2002 , 14(3):18～ 20.
(收稿日期:2011-05-10)
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