全 文 ：中国医药生物技术 2010 年 8 月第 5 卷第 4 期 Chin Med Biotechnol, August 2010, Vol. 5, No. 4 305
DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2010.04.015 ·技术与方法·
HPLC 法测定豆腐渣果中豆腐果苷的含量

杨胜，苏柘僮，杨明

豆腐渣果为山龙眼科山龙眼属（Helicia）植物深绿山龙
眼（Helicia nilagirica Bedd）的种子，其有效成分豆腐果苷
（Helicid，对苯甲醛-O-β-D-阿洛吡喃糖苷）的化学结构类
似于天麻苷（Gastrodin，对羟甲基苯-O-β-D-吡喃葡萄糖
苷）[1]。药理研究表明，豆腐果苷对中枢神经系统的作用与
天麻苷相似，但其镇静止痛作用较天麻苷强，对神经官能症
引起的头痛、头昏、睡眠障碍的治疗作用显效快[2]。因此，
豆腐渣果在神经官能症治疗方面具有广阔的应用前景。目前
已有以豆腐果苷为主要原料的市售品种豆腐果苷片，用于缓
解神经官能症引起的头痛、头昏及睡眠障碍，辅助治疗原发
性头痛[3]。虽然目前关于豆腐渣果化学成分、药理作用方面
的研究报道较多，但是关于豆腐渣果含量测定方法的研究
报道却较少。鉴于此，本文拟建立 HPLC 测定豆腐渣果中
豆腐果苷含量的方法，为豆腐渣果的进一步应用研究奠定
基础。

1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试剂 豆腐渣果购自成都市荷花池药材市场；豆腐
果苷标准品（批号：100385-200401）购自中国药品生物制
品检定所；色谱纯乙腈购自美国 Fisher 公司；重蒸水为成
都中医药大学炮制与制剂教研室自制；微孔滤头（0.45 μm）
购自美国 Millipore 公司，其他试剂均为国产分析纯。
1.1.2 仪器 HPLC 仪（LC-10ATvp 输液泵、SPD-10Avp
紫外检测器、CT-10ASvp 柱温箱）为日本岛津公司产品；
N2000 HPLC 工作站为浙江大学智达信息工程有限公司产
品；BP211D 型电子分析天平为德国 Sartorius 公司产品；
KQ-400DB 数控超声波清洗器为昆山市超声仪器有限公司
产品；SZ-93 型自动双重纯水蒸馏器为上海亚荣生化仪器厂
产品；DZF-1B 真空干燥箱为上海跃进医疗器械厂产品。
1.2 方法
1.2.1 标准品溶液制备和色谱条件 取豆腐果苷标准品适
量，精密称定 4.70 mg，置 250 ml 量瓶中，加水约 250 ml，
超声处理 5 min 后取出，放冷至室温，加水至刻度，摇匀
即获得浓度为 18.8 μg/ml 的标准品溶液。对标准品溶液进行
全波长扫描，扫描范围 200 ~ 700 nm，结果显示在 270 nm
处有最大吸收，因此采用 270 nm 作为实验检测波长。
参照文献[4]以及预试结果确定色谱条件：色谱柱为菲
罗门 Luna-C18（4.6 mm × 250 mm，5 μm），流动相为乙腈-
水-冰醋酸（8:91:1），流速 1.0 ml/min，柱温室温，进样量
为 5 ~ 10 µl。
1.2.2 HPLC 系统适用性检测 以上述色谱条件，分别对
豆腐果苷样品溶液和标准品溶液（浓度为 18.8 μg/ml）进行
理论塔板数、分离度、拖尾因子实验，各平行实验 5 次。
1.2.3 方法学考察
1.2.3.1 样品溶液制备
⑴提取方法与溶媒种类：参照文献[4]以及预试结果，
以水为溶媒，采用超声提取方法。
⑵提取时间的考察：取豆腐渣果 100 mg，加入 100 ml
水，分别超声提取 30、45、60 min 制备样品溶液。
以上述色谱条件分别对提取时间 30、45、60 min 三个
水平进行考察，各平行实验 3 次。
⑶取样量的考察：分别取豆腐渣果 60、80、100 mg，
加入 100 ml 水，超声提取 30 min 制备样品溶液。
以上述色谱条件分别对取样量 60、80、100 mg 三个水
平进行考察，各平行实验 3 次。
1.2.3.2 专属性考察 分别配制空白溶液、对照品溶液、
样品溶液，以上述色谱条件进行实验。
1.2.3.3 线性与范围考察 取浓度为 18.8 μg/ml 的标准
品溶液，以上述色谱条件进样测定。以进样量（μg）为 X，
峰面积（mV·min）为 Y，做线性回归。
1.2.3.4 精密度考察 取同一豆腐渣果样品 6 份，各约
100 mg，分别加入 100 ml 水，超声提取 30 min 制备样品
溶液。按照上述色谱条件，平行测定 6 次。
1.2.3.5 稳定性考察 分别取样品溶液和标准品溶液（浓
度为 18.8 μg/ml），按照上述色谱条件，对稳定性进行考察。
1.2.3.6 回收率考察 取豆腐果苷含量为 1.75% 的同一
样品 9 份，各约 50 mg，精密称定后分别置于 100 ml 的量
瓶中，再分别加入精密配制的浓度为 16.32 μg/ml 的标准品
溶液 40、40、40、50、50、50、60、60、60 ml，超声处理
30 min 后取出放冷至室温，加水至刻度，摇匀，滤过（0.45 μm）
后取续滤液，按照上述色谱条件，进行加样回收实验，每
份样品各平行测定 3 次，测定峰面积，并计算加样回收
率，加样回收率（%）= ）加入量（
）样品中含量（）测得量（
mg
mgmg −
× 100%。
1.2.4 样品含量测定 取 6 份豆腐渣果样品，各约
100 mg，精密称定后置于 100 ml 量瓶中，加水约 100 ml，
超声处理 30 min，放冷至室温，加水至刻度，摇匀后滤过

作者单位：610083 成都医学院药理教研室（杨胜）；610075 成都中医
药大学炮制与制剂教研室（苏柘僮、杨明）；330004 南昌，江西中医学
院中药现代制剂教育部重点实验室（杨明）
通讯作者：杨明，Email：yangming16@126.com
收稿日期：2010-04-17
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（0.45 μm），制备样品溶液，根据上述色谱条件，分别测定
样品中豆腐果苷含量。

2 结果
2.1 HPLC 系统适用性
结果理论塔板数按豆腐果苷计算平均为 12003，故确定
理论塔板数按豆腐果苷计算不应低于 8000；分离情况良好，
故确定分离度不应低于 1.5；拖尾因子平均为 1.01，表明峰
型良好；HPLC 仪重复性指标相对标准偏差（RSD）为
1.30%，表明仪器重复性良好。
2.2 方法学考察
2.2.1 样品溶液制备 通过对提取时间和取样量的考察，
确定提取时间为 30 min，取样量为 100 mg（表 1、表 2）。

表 1 样品溶液制备的提取时间考察
（ sx ± ，n = 3）
时间（min） 豆腐果苷含量（%）
30 1.81 ± 0.03
45 1.76 ± 0.04
60 1.83 ± 0.08


样品溶液配制方法为：取适量样品细粉约 100 mg，精密称
定，置 100 ml 量瓶中，加水约 100 ml，超声处理 30 min 后
取出，放冷至室温，加水至刻度，摇匀，滤过（0.45 μm）
后取续滤液，即获得样品溶液。
2.2.2 专属性考察 HPLC 分析显示各成分和溶剂之间无

表 2 样品溶液制备的取样量考察
（ sx ± ，n = 3）
取样量（mg） 豆腐果苷含量（%）
60 1.74 ± 0.08
80 1.61 ± 0.08
100 1.69 ± 0.05

表 3 HPLC 测定豆腐果苷的线性
与范围考察结果
进样量（μg） 峰面积（mV·min） 回归方程
0.282 771827
0.188 527128
0.141 390963
0.094 270961
0.047 130694
Y = 3×106 X + 9245.3
（r = 0.9997）





A




B




C
图 1 HPLC 测定豆腐果苷的专属性考察（A：空白溶液；B：对照品；C：样品）

表 4 HPLC 法测定样品中豆腐果苷的加样回收率（n = 3）
样品编号 取样量
（mg）
豆腐果苷含量
（mg）
豆腐渣果加入量
（mg）
豆腐果苷测得量
（mg）
回收率
（%）
平均回收率
（%）
RSD
（%）
1 52.5 0.919 0.979 1.845 94.63
2 51.3 0.898 0.979 1.899 102.28
3 48.9 0.856 0.979 1.836 100.10
4 51.6 0.903 0.653 1.554 99.63
5 48.1 0.842 0.653 1.469 96.06
6 47.4 0.830 0.653 1.452 95.31
7 48.2 0.844 0.816 1.689 103.59
8 51.7 0.905 0.816 1.708 98.45
9 49.5 0.866 0.816 1.675 99.12
98.80 3.09
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干扰，表明该方法专属性良好（图 1）。
2.2.3 线性与范围考察 结果表明豆腐果苷在 0.047 ~
0.282 μg 范围内线性关系良好（r = 0.9997），回归方程为：
Y = 3 × 106 X + 9245.3（表 3）。
2.2.4 精密度与稳定性考察 精密度结果显示 RSD 为
3.23%，表明该方法精密性较好。稳定性结果显示样品溶液
和标准品溶液的 RSD 分别为 1.04%、1.30%，表明样品溶
液和标准品溶液在 12 h 内稳定性良好。
2.2.5 回收率考察 结果显示样品的加样回收率在
94.63% ~ 103.59% 之间，RSD 为 3.09%（表 4），表明该方
法准确度良好。
2.3 样品含量测定
采用 HPLC 方法测定 6 份豆腐渣果样品中豆腐果苷
含量，结果显示样品中豆腐果苷含量范围为 1.68% ~
1.84%，平均含量为 1.75%（表 5）。

表 5 豆腐渣果样品中豆腐果苷含量的
HPLC 法检测结果
样品编号 取样量（mg） 豆腐果苷含量（%） 平均含量（%）
1 119 1.84
2 104 1.78
3 108 1.68
4 112 1.73
5 108 1.76
6 105 1.71
1.75 ± 0.06

3 讨论
豆腐渣果为云南民间药材，历代本草未见记载。豆腐渣
果中可能含有与豆腐果苷结构相似的物质，结合含量测定中
样品峰只有一个单峰的现象，考虑到可能该单峰由豆腐果苷
与其结构相似的物质所产生，其色谱行为相似，较难分离，
且出峰时间重合，因此需要对该单峰的纯度进行检验以鉴别
该峰是否仅为豆腐果苷单峰，而不含有其他杂质。
为此，照上述的含量测定方法，我们制备了两份样品以
及一份对照品，采用安捷伦 1200 二极管阵列检测器对三个
供试品的峰纯度进行检验。结果显示，通过峰纯度检验判别
该峰与对照品纯度相似为较纯物质。这一探索性研究结果保
证了本含量测定方法的科学性。
综上，本研究结果显示建立的 HPLC 方法精密度高，
重复性及线性关系良好，回收率满意，方法科学、合理、可
行，符合简便、快速、准确的要求，为豆腐渣果药材含量测
定方法提供了参考，为豆腐渣果提取工艺研究奠定了基础，
也为豆腐渣果的应用研究提供了有力支持。

参考文献
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