全 文 ：RP-HPLC法测定湿生扁蕾中当药黄素的含量
吉守祥　(青海民族学院药学系 ,青海西宁 810007)
摘要　[目的]建立反相高效液相色谱法测定湿生扁蕾中有效成分当药黄素含量的方法。[ 方法]采用Kromasil-C18(250 mm×4.6 mm , 5
μm.)色谱柱 ,52%甲醇/水(含 0.04%H3PO4)为流动相 ,流速 0.8 ml/min ,检测波长270 nm ,柱温30 ℃。[ 结果]当药黄素在 10 min内与其他组分达均到基线分离 ,当药黄素的线性范围是 0.338～ 2.025μg(r=0.999 5), 加标回收率为 103.3%(RSD=3.2%)。[结论]该方法测定
快速 ,结果准确 、可靠。
关键词　反相高效液相色谱法;湿生扁蕾;当药黄素
中图分类号　S567.21+9　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2008)09-03734-01
Determination of Swertisin in Gentianopsis Paludosa(Munro)Ma with RP-HPLC
JI Shou-xiang　(Department of Pharmacology , Qinghai Nationality College, Xining , Qinghai 810007)
Abstract　[ Objective] To establish a quantitative method deter-mination of swe-rtisin in Gentianopsis paludosa (Munro)Ma with RP-HPLC.[ Methods]
The sample were separated in the column of Kromasil-C18(250 mm×4.6 mm , 5μm.), which was eluted with 52%methanol and water(0.04% phospho-
ric acid), with detected wavelength at 270 nm , flow rate at 0.8 ml/min , column temperature at 30 ℃.[ Results] Effecttive component was baseline isola-
tion.The linear ranges of swertisin and swertianolin were 0.338～ 2.025μg(r=0.999 5), 0.275～ 1.65μg(r=0.999 5)respectively.The average recov-
eries were 103.3%(RSD=3.2%), 99.6%(RSD=2.7%).[ Conclusion] The method was rapid and precise.
Key words　RP-HPLC;Gentianopsis paludosa(Munro)Ma;Swertisin Swertianolin
作者简介　吉守祥(1962-),男 , 土族 ,青海民和人 , 副教授 ,从事药物
化学研究。
收稿日期　2008-02-19
　　湿生扁蕾[ Gentianopsis paludosa(Munro)Ma] ,藏语称“吉合
斗” ,为一年生龙胆科草本植物 ,主要分布在青海省海东 、黄
南 、海北 、海西 、玉树 、果洛等地 ,生长在海拔 2 500 ～ 4 500 m
的河滩 、沼泽地 、山坡草地及林缘 ,是青藏高原地区已用于临
床的药用植物;藏药称“机合滴” ,具有清热 、解毒 、利湿消黄
之功效;主治肝炎 、胆囊炎 、热病发斑 、泄泻 、肠胃炎 、结膜炎 、
高血压 、急性肾盂肾炎 、疮疥肿毒等症 ,已被列入青海重要的
开发藏草药项目[ 1] 。体外抑菌试验表明 ,该植物对绿脓杆
菌 、巨大芽孢杆菌 、金色葡萄球菌 、八叠球菌 、大肠杆菌 、变形
杆菌 、梭状牙孢杆菌等均有显著的抑制作用[ 2] 。
当药黄素是黄酮苷类化合物 ,对鼠伤寒杆菌具有中度抑
制作用 ,是龙胆科药物中的有效成分 。有关龙胆科植物中当
药黄素检测方法的报道较少[ 3-4] ,湿生扁蕾中当药黄素的检
测方法未见报道。为客观准确地评价藏药湿生扁蕾的质量 ,
笔者建立了反相高效液相色谱法测定该藏药材中当药黄素
含量的方法 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　仪器。Agilent 1100高效液相色谱仪(配置:手动进样器 、
在线脱气机 、高压二元梯度泵 、恒温柱温箱 、DAD检测器 、Agi-
lent 1100色谱工作站);Kromasil-C18(250 mm×4.6mm ,5μm)色谱
柱;KQ3200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.1.2　试剂。甲醇:高效液相色谱专用试剂(山东禹王实业
有限公司禹城化工厂);水:娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团
公司);磷酸:AR级(北京红星化工厂)。
对照品:当药黄素由青海民族学院药学系林鹏程教授提
供 ,经归一化法检测 ,纯度大于 98%。
1.1.3　样品采集。2005年采于青海省互助北山林场 ,经青
海民族学院药学系毛继祖教授鉴定。样品阴干后粉碎至 80
目 ,冷藏备用。
1.2　方法
1.2.1　对照品溶液的配制 。精密称取当药黄素对照品 2.7
mg ,置于 10 ml容量瓶中 ,以甲醇溶解并定容至 10 ml ,配制成
相应浓度的对照品储备液 ,使用时稀释成所需浓度。
1.2.2　样品溶液的制备。精密称取 0.5 g样品 ,加 10 ml甲
醇超声 60min ,过滤 ,滤渣重复提取两次 ,合并滤液 ,浓缩后定
容至 25 ml ,过 0.45 μm滤膜 ,在选定色谱条件下测定峰面积 。
2　结果与分析
2.1　不同提取方法对分析结果的影响
2.1.1　不同提取方法对当药黄素提取率的影响。精密称取
9份湿生扁蕾样品 ,每份重 0.5 g ,分别用甲醇热回流(2 h)、超
声(20 min)、冷浸(24 h),分别测定不同提取法下当药黄素的
含量 ,结果发现 ,超声提取方法提取时间短 ,提取率最高 ,因
此试验选用超声提取法。
2.1.2　不同提取溶剂对当药黄素提取率的影响。精密称取
9份湿生扁蕾样品 ,每份重 0.5 g ,分别用甲醇 、乙醇 、水超声
提取 20 min ,测定甲醇 、乙醇 、水对当药黄素提取率的影响 ,结
果发现 ,甲醇提取率最高 ,故选用甲醇为提取溶剂 。
2.2　检测波长的确定　利用 DAD检测器在 220 ～ 400 nm扫
描其吸收光谱 ,当药黄素对照品在 270和 337 nm处有较高的
吸收(图 1),结合文献[ 4]选择 270 nm为检测波长 。
图 1　当药黄素的紫外吸收光谱
Fig.1　UV spectrumof swertisin
(下转第 3751页)
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2008 , 36(9):3734 , 3751　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　孙红忠　责任校对　孙红忠
表 2　桃一点斑叶蝉在桃树西面、北面树冠的聚集度指标
Table 3　Aggregation indices of Erythroneura sudra D.on west and north of peach crown
调查日期
Investigation
date
调查叶片数
No.of leaves
investigated
西面West
x S 2 m＊ I m＊/ m Ca C k
北面 North
x S 2 m＊ I m＊/ m Ca C k
05-21 90 0.200 0.274 0.571 0.371 2.854 1.854 1.371 0.539 0.067 0.085 0.348 0.281 5.213 4.213 1.281 0.237
06-01 90 0.389 0.555 0.816 0.427 2.098 1.098 1.427 0.911 0.233 0.271 0.394 0.161 1.688 0.688 1.161 1.454
06-08 90 0.333 0.404 0.547 0.213 1.640 0.640 1.213 1.561 0.067 0.085 0.348 0.281 5.213 4.213 1.281 0.237
06-14 90 0.278 0.360 0.574 0.297 2.068 1.068 1.297 0.936 0.478 0.657 0.852 0.375 1.784 0.784 1.375 1.275
06-25 90 1.022 1.325 1.319 0.297 1.290 0.290 1.297 3.447 0.633 0.819 0.927 0.293 1.463 0.463 1.293 2.159
07-05 90 0.611 0.802 0.924 0.313 1.511 0.511 1.313 1.955 0.622 0.844 0.979 0.357 1.574 0.574 1.357 1.742
07-15 90 0.867 1.308 1.376 0.509 1.587 0.587 1.509 1.702 0.656 0.768 0.827 0.171 1.261 0.261 1.171 3.833
07-25 90 0.667 1.011 1.184 0.517 1.775 0.775 1.517 1.290 0.578 0.629 0.666 0.088 1.153 0.153 1.088 6.554
07-31 90 1.289 2.050 1.880 0.591 1.458 0.458 1.591 2.181 1.711 2.545 2.198 0.487 1.285 0.285 1.487 3.512
08-08 90 2.622 7.901 4.635 2.013 1.768 0.768 3.013 1.303 2.344 9.824 5.535 3.190 2.361 1.361 4.190 0.735
08-14 90 0.322 0.468 0.775 0.453 2.404 1.404 1.453 0.712 0.500 0.837 1.174 0.674 2.348 1.348 1.674 0.742
08-20 90 0.133 0.162 0.347 0.213 2.601 1.601 1.213 0.625 0.156 0.178 0.298 0.143 1.918 0.918 1.143 1.089
08-28 90 0.556 0.834 1.057 0.501 1.902 0.902 1.501 1.109 0.411 0.514 0.663 0.251 1.612 0.612 1.251 1.635
09-05 90 0.156 0.223 0.587 0.432 3.776 2.776 1.432 0.360 0.133 0.162 0.347 0.213 2.601 1.601 1.213 0.625
09-13 90 0.156 0.178 0.298 0.143 1.918 0.918 1.143 1.089 0.144 0.192 0.476 0.332 3.298 2.298 1.332 0.435
09-19 90 0.178 0.260 0.641 0.463 3.607 2.607 1.463 0.384 0.211 0.326 0.754 0.543 3.572 2.572 1.543 0.389
09-28 90 0.056 0.076 0.415 0.360 7.472 6.472 1.360 0.155 0.056 0.076 0.415 0.360 7.472 6.472 1.360 0.155
10-08 90 0.356 0.591 1.018 0.663 2.864 1.864 1.663 0.536 0.567 1.035 1.393 0.826 2.458 1.458 1.826 0.686
3　结论
(1)自 5月下旬到 10月上旬 ,桃一点斑叶蝉在桃树树冠
东 、南 、西 、北 4个方向上均呈聚集分布。
(2)桃一点斑叶蝉在桃树树冠上呈聚集分布是由环境条
件引起的。
参考文献
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1984:93-120.
(上接第 3734页)
2.3　流动相的选择 　经实验 ,当流速为 0.8 ml/min时 ,以流
动相MeOH∶H2O(含 0.04%H3PO4)为 52∶48进行等度洗脱 ,柱
温 30 ℃,当药黄素与其他组分在 10 min内达到基线分离;水
中加入 0.04%的磷酸 ,可抑制上述成分的拖尾。
2.4　色谱条件　色谱柱:Kromasil-C18(250 mm ×4.6 mm , 5
μm)色谱柱;流动相:MeOH∶H2O(含 0.04%H3PO4)为 52∶48等
度洗脱;流速 0.8 ml/min ,柱温 30 ℃,检测波长 270 nm 。该色
谱条件下当药黄素与其他成分达到基线分离。
2.5　系统适应性实验
2.5.1　线性关系的考察。分别取 0.27 mg/ml的当药黄素对
照品溶液 ,稀释 20倍 ,后分别进样 2.5、5.0、7.5、10.0、12.5 、15
μl ,以绝对进样量对峰面积作图 ,测得当药黄素标准工作曲
线为:A=3 029.6X +16.6 ,相关系数为 r=0.999 5 。线性范
围为 0.338～ 2.025μg。
2.5.2　检测限。在选定的色谱条件下 ,当信噪比 S/N=3
时 ,测得该条件下当药黄素的最低检测限为 0.27 ng。
2.5.3　精密度实验。分别取 0.027 mg/ml的当药黄素对照
品溶液 ,在选定色谱条件下测定色谱峰的峰面积 ,计算得
RSD 为 0.73%(n =5),表明仪器精密性良好。
2.5.4　重复性实验。精密称取湿生扁蕾干粉 0.5 g共 5份 ,
按“1.2.2”方法操作 ,在选定色谱条件下 ,测定当药黄素的含
量 ,计算得 RSD 为 1.4%(n=5),表明方法的重复性良好。
2.5.5　稳定性实验 。精密称取湿生扁蕾干粉 0.5 g ,按
“1.2.2”方法操作 ,在选定色谱条件下 ,分别在 0、2 、4、6 、8 h进
样 ,测定当药黄素的峰面积 ,计算得 RSD 为 1.4%(n=5),表
明样品溶液在 8 h内稳定。
2.5.6　回收实验 。精密称取湿生扁蕾样品 0.5 g 3份 ,各添
加当药黄素 0.027 mg/ml溶液 0.8 ml ,按“1.2.2”方法操作 ,测
得当药黄素的平均回收率为 103.3%,RSD 为 3.2%(n =3)。
2.6　测定结果　精密称取 0.5 g样品 ,按“1.2.2”方法操作 ,
在给定色谱条件下分析 ,经 DAD检测器检测待测组分的峰
纯度且紫外光谱与对照品一致后 ,外标法定量 ,测得样品中
当药黄素的含量为 0.072%。
3　小结
笔者所建方法具有提取完全 ,分析方法简便 、快速 、结果
准确 、可靠等特点 ,对全面评价藏药材湿生扁蕾的质量有重
要的参考作用 。
参考文献
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375136卷9期　　　　　　　　　　　　　　　　辛志梅等　桃园中桃一点斑叶蝉种群的空间格局