全 文 ：青海民族大学学报(教育科学版)
JOURNAL OF QINGHAI NATIONALITIES UNIVERSITY
(Education Science Edition)
2011 年第 5 期 No5. 2011
收稿日期:2011 － 06 － 03
作者简介:李海琳(1962 －) ，女，陕西延安人，青海民族大学化学与生命科学学院助理实验师．
文章编号:1674 － 9235(2011)05 － 0057 － 03
RP － HPLC法测定湿生扁蕾中当药醇苷的含量
李海琳1，李虎业2，杨 扬3
(1. 2. 3. 青海民族大学 化学与生命科学学院，青海 西宁 810007)
摘 要:采用反相高效液相色谱法测定湿生扁蕾中有效成分当药醇苷的含量．色谱条件 Kromasil － C18(250mm × 4. 6mm，
5μm)色谱柱，流动相为甲醇和水(含 0. 04%H3PO4)55∶ 45 等度洗脱，流速 0. 8ml /min，检测波长 254nm，柱温 30℃ ．当药醇苷与
其它组分达到基线分离，当药醇苷的线性范围为 0. 275 － 1. 65μg(r = 0. 9997) ，加标回收率为 99. 6% (RSD = 2. 7%)．该方法测
定快速，结果准确，可靠．
关键词:反相高效液相色谱法;湿生扁蕾;当药醇苷
Determination of Swertianolin in Gentianopsis Paludosa (Munro)Ma by RP －HPLC
LI Hai － lin1，LI Hu － ye2，YANG Yang3
(1. 2. 3. Qinghai Nationalities University，Xining Qinghai 810007，China)
Abstract:To establish a quantitative method determination of swertianolin in Gentianopsis paludosa (Munro)Ma by RP － HPLC.
The sample were separated on the column of Kromasil － C18(4. 6mm × 250mm，5μm)which eluted with 55% methanol and water(con-
taining 0. 04% phosphoric acid)with detected wavelength at 254 nm . The flow rate was 0. 8 mL·min －1，and the column temperature
was 30 ℃. The components were base － isolated. The linear ranges of swertianolin was 0. 275 － 1. 65μg (r = 0. 9997). The average
recovery rate was 99. 6% (RSD = 2. 7%). The method is rapid and precise.
Key words:RP － HPLC;Gentianopsis paludosa (Munro)Ma;Swertianolin
中图分类号:O657. 7
文献标识码:B
1 前言
湿生扁蕾(Gentianopsis paludosa (Munro)Ma) ，藏语称“吉合斗”，为一年生龙胆科草本植物，主要分布
在青海省海东、黄南、海北、海西、玉树、果洛等地，生长在海拔 2500 － 4500 米的河滩、沼泽地、山坡草地及林
缘，是青藏高原地区已用于临床的药用植物．因其具有清热，解毒，利湿消黄之功效，临床上主要用于治疗肝
炎，胆囊炎，热病发斑，泄泻，肠胃炎，结膜炎，高血压，急性肾盂肾炎，疮疥肿毒等症．体外抑菌试验表明，该植
物对绿脓杆菌、巨大芽孢杆菌、金色葡萄球菌、八叠球菌、大肠杆菌、变形杆菌、梭状牙孢杆菌等均有显著的抑
制作用［1］，现已被列为青海省重点藏药开发研究项目［2］．
当药醇苷为山酮苷类化合物，具有抑制结核菌的作用［3］，是龙胆科药物中的有效成分．有关龙胆科植物
中当药醇苷的检测方法的报道较少［4，5］，湿生扁蕾中上述成分的检测方法更是未见报道．为客观准确的评价
藏药湿生扁蕾的质量，本文建立了反相高效液相色谱法测定该藏药材中当药醇苷的含量．
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青海民族大学学报(教育科学版)
2 材料与方法
2． 1 材料
2． 1． 1 仪器
Agilent1100 高效液相色谱仪(配置:手动进样器、在线脱气机、高压二元梯度泵、恒温柱温箱、DAD 检测
器、Agilent1100 色谱工作站)、Kromasil － C18(250mm × 4. 6mm，5μm)色谱柱;KQ3200 超声波清洗器(昆山市
超声仪器有限公司) ;水为三重蒸馏水．
2． 1． 2 试剂
甲醇:高效液相色谱专用试剂(山东禹王实业有限公司禹城化工厂) ;水:娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集
团公司) ;磷酸:AR级(北京红星化工厂)．
对照品:当药醇苷由青海民族大学林鹏程教授提供，经归一化法检测，纯度大于 98% ．
2． 1． 3 样品采集
样品:2010 年采于青海省互助北山林场，经青海民族大学毛继祖教授鉴定．样品阴干后粉碎至 80 目，冷
藏备用．
2． 2 方法
2． 2． 1 对照品溶液的配置
精密称取当药醇苷对照品 2. 2mg，置 10ml容量瓶中，以甲醇溶解并定容，使用时稀释成所需浓度．
2． 2． 2 样品溶液的制备
精密称取 0. 5 g样品，加 10 ml 甲醇超声 60 min，过滤，滤渣重复提取两次，合并滤液，浓缩后定容至
25ml，过 0. 45 μm滤膜，在选定色谱条件下测定峰面积．
3 结果与分析
3． 1 色谱条件
色谱柱:Kromasil C18(250mm ×4. 6mm，5μm )色谱柱;流动相为 55%甲醇 －水(含 0. 04% H3PO4)溶液;
流速:0. 8ml /min，柱温:30℃，检测波长:254nm．在该色谱条件下当药醇苷与其它组分均达到基线分离．
图 1 对照品(A)及样品(B)色谱图
3． 2 系统适应性试验
3． 2． 1 线性关系的考察
取 0. 22mg /ml当药醇苷对照品溶液，稀释 20 倍后进样 2. 5μl、5μl、7. 5μl、10. 0μl、12. 5μl、15μl，以进样
量对峰面积作图，测得当药醇苷标准工作曲线为:A = 5351. 3x － 46. 1(r = 0. 9995). 线性范围为 0. 275 －
1. 65μg．
3． 2． 2 检测限
在选定的色谱条件下，当信噪比 S /N = 3 时，测得该条件下当药醇苷的最低检测限为 0. 44ng．
3． 2． 3 精密度试验
取 0. 22mg /ml的当药醇苷对照品溶液，在选定色谱条件下测定色谱峰的峰面积，计算 RSD 为 0. 70%
(n = 5) ，表明仪器精密度良好．
3． 2． 4 重复性试验
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李海琳，李虎业，杨 扬:RP － HPLC法测定湿生扁蕾中当药醇苷的含量
精密称取湿生扁蕾干粉 0. 5g共 5 份，在选定色谱条件下，测定当药醇苷的含量，计算 RSD为 2. 0%(n =
5) ，表明方法的重复性良好．
3． 2． 5 稳定性试验
精密称取湿生扁蕾干粉 0. 5g，在选定色谱条件下，分别在 0，2，4，6，8h 进样，测定当药醇苷的峰面积，计
算 RSD为 1. 8%(n = 5)．表明样品溶液在 8 小时内稳定．
3． 2． 6 回收率试验
精密称取湿生扁蕾样品 0. 5g 共 5 份，各添加 0. 022mg /ml的当药醇苷对照品溶液 0. 7ml，测得当药醇苷
的平均回收率(n = 5)为 99. 6%，RSD为 2. 7% ．
3． 3 样品测定
精密称取 0. 5g样品，在给定色谱条件下分析，经 DAD检测器检测待测组分的峰纯度且紫外光谱与对照
品一致后，外标法定量，测得样品中当药醇苷的含量为 0. 0625% ．
4 小结与讨论
4． 1 不同提取方法对分析结果的影响
4． 1． 1 不同提取方法对当药醇苷提取率的影响
精密称取 9 份湿生扁蕾样品，每份重 0. 5 g，分别用甲醇热回流(2 h)、超声(20min)、冷浸(24h) ，分别测
定不同提取条件下当药醇苷的含量，结果发现，超声提取方法提取时间短，提取率最高，因此，本试验选用超
声提取法．
4． 1． 2 不同提取溶剂对当药醇苷提取率的影响
精密称取 9 份湿生扁蕾样品，每份重 0. 5 g，分别用甲醇、乙醇、水超声提取 20min，测定甲醇、乙醇、水对
当药醇苷提取率的影响，结果发现，甲醇提取率最高，故选用甲醇为提取溶剂．
4． 2 检测波长的确定
利用 DAD检测器在 220 － 400nm 扫描其吸收光谱，当药醇苷对照品在 254nm 波长处均有较高的吸收，
结合文献［6］选择该波长为检测波长．
图 2 当药醇苷的紫外吸收光谱图
4． 3 流动相的选择
试验表明，当流速为 0. 8ml /min，流动相为甲醇和水(含 0. 04%H3PO4)55∶ 45 等度洗脱，当药醇苷与其它
组分达到基线分离．
4． 4 小结
本文所建方法具有提取完全、分析方法简便，快速，结果准确，可靠等特点，对全面评价藏药材湿生扁蕾
的质量有重要的参考作用．
参考文献:
［1］米琴，曹长年，王慧春，等 . 湿生扁蕾有效成分抑菌活性的测定［J］. 青海大学学报(自然科学版) ，2004，22(2) :84 － 85.
［2］曹长年，米琴，赵宙兴等 . 藏药湿生扁蕾有效成份的研究［J］. 青海农林科技，2004，(3). 12 － 13.
［3］孙文基，绳金房 . 天然活性成分简明手册［M］. 北京，中国医药出版社，1998，7:539 － 541.
［4］胡凤祖，宋娅莉，刘梅，等 . 青藏高原龙胆科植物药用有效成分的高效液相色谱分析［J］. 色谱，23(1) :63 － 65.
［5］［6］纪兰菊，保怡，陈桂琛，等 . 15 种獐牙菜属植物中主要药用成分的高效液相色谱测定［J］. 西北植物学报，2004，24(7) :
1298 － 1302.
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