全 文 ：文章编号:1001 － 4829(2014)05 － 2076 － 04
收稿日期:2013 － 11 － 09
基金项目:四川食用菌产业技术体系创新团队栽培岗位专项资
金;国家现代食用菌产业技术体系毛木耳和药用菌栽培岗位专
项资金
作者简介:吴 翔(1980 －) ，女，羌族，助理研究员，博士研究
生，E-mail:qingshui028@ 126． com，* 为通讯作者，E-mail:huang-
zhongqian29@ 126． com。
四川毛木耳主栽区发菌棚内外空气细菌的检测及分析
吴 翔，苗人云，郑林用，叶小金，周 洁，谢丽源，甘炳成，谭 伟，彭卫红，黄忠乾*
(四川省农业科学院土壤肥料研究所，四川 成都 610066)
摘 要:为了解四川毛木耳主栽区发菌棚内外的细菌数量和主要种类，在四川省毛木耳主栽区的接种季节，对毛木耳发菌棚内外
空气中 24 h的细菌数量进行检测，并分析了其与棚内外空气温度和湿度的关系。凌晨 1:00 － 5:00 时间段中空气细菌数量较小，
而影响检测时间内细菌数量的主要因素是空气湿度。对分离所得细菌进行鉴定，结果表明，检测时间内空气中主要的细菌属于芽
孢杆菌属。因此，发菌棚内外的空气细菌数量具有较强的时间性，种类则以芽孢杆菌为主。
关键词:毛木耳;发菌棚;空气细菌
中图分类号:S646． 6 文献标识码:A
Detection and Analysisi of Airy Bacterium in and out of
Auricularia polytricha’s Culture Ｒoom in Sichuan Main Plantation
WU Xiang，MIAO Ｒen-yun，ZHENG Lin-yong，YE Xiao-jin，ZHOU Jie，
XIE Li-yuan，GAN Bing-cheng，TAN Wei，PENG Wei-hong，HUANG Zhong-qian*
(Soil and Fertilizer Institute，Sichuan Academy of Agricultural Sciences，Sichuan Chengdu 610066，China)
Abstract:In order to study the content and species of bacterium inside and outside culture room，in the main Auricularia polytricha plantation
of Sichuan province，the bacterium content in air was tested inside and outside culture room in 24 hours at the time of inoculating． Correlation
analysis of bacterium content in air with temperature and humidity showed that the latter was the main factor． And the period of minimum
bacterium content was from 1:00 to 5:00． Identification of bacterium showed that most of them were Bacillus． The results showed that content
of bacterium inside and outside culture room with strong timeliness，and most of them were Bacillus．
Key words:Auricularia polytricha;Culture room;Airy bacterium
毛木耳(Auricularia polytricha)是黄背木耳和白
背木耳等的总称，是我国主要栽培和重要出口的食
用菌种类。毛木耳属于担子菌亚门，层菌纲，木耳科
木耳属，其营养成分与黑木耳相似，具有清肺益气、
止痛活血的功效。毛木耳粗纤维含量较高，这些纤
维素对人体内许多营养物质的消化、吸收和代谢有
很好的促进作用［1 ～ 2］。
四川是毛木耳的主要栽培区之一，本实验开展
的地点位于四川省什邡市西北部的湔氐镇，海拔
550 m，是国家级毛木耳生产基地。近年来，湔氐镇
毛木耳年栽培量都超过 1 亿袋，2013 年栽培量约为
1． 2 亿袋，带来的经济收入占当地农业总收入的 80
%，由此可知，毛木耳产业是耳农增收致富的重要途
径，对当地经济发展起着举足轻重的作用。然而，据
统计，每季毛木耳因为杂菌污染可导致 7 %的栽培
袋受到污染，其中因为细菌引起的污染率占 0． 2 %，
造成严重的经济损失。发菌棚是毛木耳接种的主要
场地，如何根据空气中细菌量的多少选择最佳的接
种时间，有利于减少毛木耳的污染率。
1 材料与方法
1． 1 采样时间
2012 年 1 月，采样时间正值当地毛木耳接种季
节，从凌晨 1:00 开始，每隔 4 h 采样 1 次，到傍晚
21:00 结束。采样过程中用自动温湿度记录仪记录
环境的温度和湿度。
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西 南 农 业 学 报
Southwest China Journal of Agricultural Sciences
2014 年 27 卷 5 期
Vol. 27 No. 5
1． 2 布点方法
布点的设置参考《室内空气质量标准》(GB /
T18883-2002)的要求进行［3］。发菌棚长 30 m，宽 12
m，棚内面积 360 m2，设 4 角及中央 5 个点，即图 1
中 A、B、C、D、E，其中 4 个角点均离墙 1 m。发菌棚
外围设 8 个点，图 1 中 J、K、L、M 4 个点距离发菌棚
边缘距离均为 5 m，所有采样点距地面高度均为 1． 2
m。
1． 3 培养基［4］
蛋白胨 10 g，牛肉浸膏 3 g，氯化钠 5 g，琼脂 18
g，蒸馏水 1000 mL，pH 7． 2 ～ 7． 4，121 ℃灭菌 30
min。
1． 4 采样方法
采用自然沉降法采集样品。各点设 3 次重复，
同时设置空白对照(同采样皿一起放入采样点，不
开皿盖)。用直径 9 cm普通营养琼脂平板在采样点
打开，准确暴露空气中 5 min 加盖后立即送实验室
培养箱 36 ℃培养 48 h。
1． 5 菌落数计数方法及相关性分析［3，5］
奥梅梁斯基公式进行计算细菌总数(cfu /m3) :
C = 5000N /(A × T) ，其中 C 为每立方米空气中细菌
数(cfu /m3) ，A为平皿面积(cm2) ，T 为平板暴露时
间(min) ，N为平均菌落数(cfu) ，再分别计算棚内、
棚外各时间段采样点细菌数量的平均值。用
SPSS17． 0 软件分析细菌数量与温度以及湿度的相
关性。
1． 6 菌株鉴定
本试验采用 Biolog公司的 GEN Ⅲ MicroPlateTM
系统和好氧细菌数据库，试验按照仪器操作指南进
行。先将所有菌株试管斜面培养基活化，再将菌株
转接于 Biolog专用培养基上 33 ℃培养 16 h，然后将
菌株接入专用接种液体，用浊度计将细胞浓度控制
在 90 % ～98 %，将菌悬液加入微孔板，每孔加 100
μl悬液，33 ℃培养过夜。采用肉眼读板，在 16 h 后
图 1 发菌棚内外采样点布置
Fig． 1 Layout of sampling point in and out of culture room
表 1 测试时间段内环境温度和湿度
Table 1 The environmental temperature and humidity in tested period
测定时间
温度(℃) 湿度(%)
棚内 棚外 棚内 棚外
1:00 12． 5 6． 7 77． 5 84． 4
5:00 9． 6 3． 3 81． 2 96． 6
9:00 8． 9 4． 4 81． 3 93． 4
13:00 14． 3 5． 7 70． 1 72． 2
17:00 16． 4 7． 8 63． 5 62． 7
21:00 12． 2 6． 6 77． 1 78． 8
每 4 h观察 1 次，分别记录结果，重复 2 次。结果直
接与 Biolog系统数据库的菌株进行比较，确定鉴定
结果。
2 结果与分析
2． 1 温度、湿度
从表 1 看出，不同时间发菌棚内的温度均高于
对应时间棚外的温度，湿度则低于棚外或与棚外相
差不大。
2． 2 棚内外细菌数量及相关性分析
从图 2 看出，除了凌晨 1:00 和 5:00 外，棚外的
细菌含量均高于棚内，且棚内和棚外的细菌数量变
化规律都相同。午后 13:00，棚内外空气中细菌数
量均达到最大，且棚内细菌数量从 97． 5 cfu /m3 直
接上升至 217 cfu /m3，而棚外细菌数量达到最大值
时的上升幅度较小。棚内外细菌数量的最小值均出
现在凌晨 1:00，并且从凌晨 1:00 － 5:00 棚内外细
菌数量的变化都较小，因此在这个阶段对菌袋进行
操作，有利于减少细菌对菌袋的污染。
从表 2 看出，棚内细菌与棚外细菌呈显著正相
关，与棚内湿度呈显著负相关，与棚外湿度呈负相
关，但不显著;棚内温度与棚外温度呈显著正相关，
与棚内外的湿度都达到极显著的负相关;棚内湿度
与棚外温度呈显著负相关，与棚外湿度呈极显著正
350
300
250
200
150
100
50
0
01:00 05:00 09:00 13:00 17:00 21:00
检测时间
室内
室外
细
菌
数
量
（ c
fu
/m
3 ）
图 2 不同时间段棚内外检测的细菌含量
Fig． 2 The bacterium content of indoor and outdoor testing in differ-
ent period
77025 期 吴 翔等:四川毛木耳主栽区发菌棚内外空气细菌的检测及分析
表 2 空气中细菌数量与温度和湿度的相关性
Table 2 The correlation analysis of bacterium content in air with temperature and humidity
棚内细菌 棚外细菌 棚内温度 棚内湿度 棚外温度 棚外湿度
棚内细菌 相关性 1． 000 0． 799* 0． 662 － ． 791* 0． 251 － 0． 702
显著性 0． 028 0． 076 0． 030 0． 316 0． 060
棚外细菌 相关性 0． 799* 1． 000 0． 369 － 0． 561 0． 196 － 0． 519
显著性 0． 028 0． 235 0． 124 0． 355 0． 146
棚内温度 相关性 0． 662 0． 369 1． 000 － 0． 962＊＊ 0． 842* － 0． 973＊＊
显著性 0． 076 0． 235 0． 001 0． 018 0． 001
棚内湿度 相关性 － 0． 791* － 0． 561 － 0． 962＊＊ 1． 000 － 0． 741* 0． 961＊＊
显著性 0． 030 0． 124 0． 001 0． 046 0． 001
棚外温度 相关性 0． 251 0． 196 0． 842* － 0． 741* 1． 000 － 0． 854*
显著性 0． 316 0． 355 0． 018 0． 046 0． 015
棚外湿度 相关性 － 0． 702 － 0． 519 － 0． 973＊＊ 0． 961＊＊ － 0． 854* 1． 000
显著性 0． 060 0． 146 0． 001 0． 001 0． 015
注:显著性为单侧检验，* 在 0． 05 水平(单侧)上显著相关，＊＊在 0． 01 水平(单侧)上显著相关。
相关;棚外温度与棚外湿度呈显著负相关。由相关
性分析可知，相对温度而言，棚内外细菌数量受湿度
的影响更大;而棚外细菌数量受湿度和温度影响都
不显著，说明发菌棚的存在对棚内空间空气的细菌
数量具有一定的影响。
2． 3 形态特征鉴定
根据不同形态特征，从菌落平板上共挑取 9 株
不同种类的的微生物，按照 Biolog 鉴定系统对其进
行鉴定，结果如表 3。Biolog鉴定系统的结果包含可
能性(Probability，PＲOB)、相似性(Similarity，SIM)
和位距(Distance，DIST)3 个参数，其中以 SIM 最
为重要。SIM值测试结果与数据库相应数据条的相
似程度。依照 Biolog 微生物自动分析系统规定，当
SIM≥0． 50，即可视为系统确定的种属鉴定结果。
SIM值越趋近于 1． 00，结果可信度越高。若 SIM ＜
0． 50，在鉴定结果内，所有属名相同结果的 SIM 值
之和大于 0． 5 时，即可将此结果视为属名。
由表 3 可以看出，9 株细菌通过 Biolog鉴定系
表 3 供试菌株及 Biolog系统鉴定
Table 3 Strains tested and identified by Biolog identification system
菌种编号 鉴定结果 SIM值
1 Bacillus subitilis ss subitilis 0． 692
2 Bacillus cereus /pseudomycoides 0． 509
3 Kocuria rosea 0． 502
4 Bacillus pumilus 0． 764
5 Bacillus licheniformis 0． 629
6 Bacillus megaterium 0． 596
7 Bacillus subitilis /mojavensis 0． 726
8 Bacillus subtilis /atrophaeus 0． 542
9 Ochrobactrum grignonense 0． 590
统可以确定到种，鉴定结果的 SIM 值均大于 0． 5，具
有较高的可信度。由鉴定结果结合菌落形态特
征［6］可知，发菌棚内外空气中微生物分别属于芽孢
杆菌属、考克氏菌属和苍白杆菌属，以芽孢杆菌属为
主。各菌株在牛肉膏蛋白胨上的菌落形态如图 3 所
示，各菌落的形态特征各异，但都有其所属的典型特
点。
3 讨论与结论
在对发菌棚内空气微生物的检测分析方面，已
见报道的研究较少，只有刘文海等［7］人对姬菇、秀
珍菇发菌棚内链孢霉对菌袋的污染进行了相关研
究，而针对毛木耳发菌棚中细菌的研究几乎是空白。
图 3 各菌株的菌落形态
Fig． 3 The colonial morphology of bacteriums
8702 西 南 农 业 学 报 27 卷
⑴细菌污染给毛木耳栽培产业造成了较大的经
济损失，通过分析四川省主栽区湔氐镇毛木耳接种
季节的空气细菌可知，在采集样品的 24 h 内，棚内
外空气中细菌数量白天大于夜晚，最低值出现在凌
晨 1:00 － 5:00，因此在这个阶段对菌袋进行操作，
有利于减少细菌对菌袋的污染。
⑵由相关性分析可知，环境中的湿度是影响细
菌数量的主要因素，对控制发菌棚内的温度和湿度
也起着重要的作用。而棚内温度和湿度都显著或极
显著受棚外温度和湿度的影响，说明环境中的温度
和湿度是影响棚内温度和湿度变化的重要因素。
⑶在四川省毛木耳主栽区什邡市湔氐镇，毛木
耳接种季节的空气细菌种类多属于芽孢杆菌。
参考文献:
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( 责任编辑 李 洁)
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