全 文 ：
菌物学报
jwxt@im.ac.cn 15 November 2015, 34(6): 1176‐1186
Http://journals.im.ac.cn Mycosystema ISSN1672‐6472 CN11‐5180/Q © 2015 IMCAS, all rights reserved.
研究论文 Research paper DOI: 10.13346/j.mycosystema.140121
基金项目：国家“十二五”科技支撑项目（2013BAD16B02）；上海市科技人才计划项目（13XD1424700）；上海种业项
目[沪农科种字（2012）第 6号]
Supported by The National Key Technology R & D Program (2013BAD16B02); Shanghai Science and Technology Talent Program
(13XD1424700); Shanghai Seed Industry Development Program [沪农科种字(2012)第 6号].
*Corresponding author. E‐mail: syj0@saas.sh.cn
Received: 2014‐04‐28, accepted: 2014‐09‐30
猴头菌子实体小分子提取物的分离与体外抑制幽门螺旋杆菌
的分析
李亮 1, 2 尚晓冬 2 谭琦 2*
1上海海洋大学食品科学学院 上海 200090
2农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室 国家食用菌工程技术研究中心 上海市农业遗传育种重点实验室 上海市农
业科学院食用菌研究所 上海 201106
摘 要：本研究以甲硝唑为阳性对照，利用 HPD‐100 大孔树脂和 95%乙醇将猴头菌子实体中小分子活性物质进行富集，
得到乙醇制备液（MREEs）；然后对乙醇制备液分别使用石油醚（60–90℃）和氯仿进行多次萃取，得到石油醚萃取物（A1、
A2）和氯仿萃取物（B），并进行 GC‐MS测定；对 MREEs和 A1、A2、B分别进行药敏试验，同时对 5种幽门螺旋杆菌进行
最低抑菌浓度测定。结果表明，使用大孔树脂得到的 MREEs 有较好的抑菌活性，得到的 A1、A2 和 B 对幽门螺旋杆菌的
抑菌率均高于 40.0%，其中石油醚萃取物 A1在 Helicobacter pylori SSI中的抑菌率甚至高达 62.9%；A1、A2和 B使用 GC‐MS
测定出的主要成分分别是邻苯二甲酸二丁酯（A1，4.53%和 A2，6.93%）和棕榈酸 2.87%，但仍有大量成分没有被测出。
另外，在最低抑菌浓度试验中，A1相应组分对 Helicobacter pylori W2504、Helicobacter pylori 9和 Helicobacter pylori ATCC
43504的最低抑菌浓度都为 0.25mg/mL，A2对 Helicobacter pylori 78的最低抑菌浓度仅为 0.25mg/mL，而 B对 Helicobacter
pylori W2504、Helicobacter pylori 9的最低抑菌浓度均仅为 0.125mg/mL，说明通过石油醚和氯仿萃取得到的猴头菌子实体
提取物对幽门螺旋杆菌具有潜在的抑菌作用。
关键词：猴头菌，小分子活性，抑菌活性，幽门螺旋杆菌，最低抑菌浓度，抑菌率
Isolation and antimicrobial activity against Helicobacter pylori in vitro of low
molecular weight bioactive components from Hericium erinaceus
LI Liang1, 2 SHANG Xiao‐Dong2 TAN Qi2*
1College of Food Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 200090, China
2Key Laboratory of Applied Mycological Resources and Utilization, Ministry of Agriculture; National Engineering Research Center
of Edible Fungi; Shanghai Key Laboratory of Agricultural Genetics and Breeding; Institute of Edible Fungi, Shanghai Academy of
Agricultural Science, Shanghai 201106, China
李亮 等 /猴头菌子实体小分子提取物的分离与体外抑制幽门螺旋杆菌的分析
菌物学报
1177
Abstract: MREEs was prepared by enriching the low molecule weight bioactive components extracted from the fruiting bodies of
Hericium erinaceus using 95% ethanol in HPD‐100 macroporous resin with the metronidazole as positive control. The MREEs
were leached by petroleum ether (60–90°C) and chloroform for several times and three extractions were isolated which were
encoded as A1, A2 and B and were also detected by GC‐MS. The anti‐Helicobacter pylori activities of the MREEs, A1, A2 and B
were performed through antimicrobial susceptibility test, and the minimum inhibitory concentration (MIC) of five Helicobacter
pylori strains was then determined. The results indicated that the MREEs had obvious inhibition effect on the growth of
Helicobacter pylori and the inhibition rate of the three extracts (A1, A2, and B) was higher than 40.0%, especially for A1 of which
the inhibition rate was as high as 62.9%. The main components of A1, A2, B analyzed by GC‐MS were DBP (A1, 4.53% and A2,
6.93%) and palmitic acid (2.87%). In addition, The MIC of A1 against Helicobacter pylori W2504, Helicobacter pylori 9 and
Helicobacter pylori ATCC 43504 was 0.25mg/mL, and MIC of A2 against Helicobacter pylori 78 was 0.25mg/mL. B was the most
potent fraction against Helicobacter pylori W2504 and Helicobacter pylori 9, whose MIC was only 0.125mg/mL. In conclusion,
extractions with petroleum ether and chloroform from Hericium erinaceus presented strongly inhibitory activity against
Helicobacter pylori.
Key words: Hericium erinaceus, low molecular weight bioactive components, antimicrobial activity, Helicobacter pylori,
minimum inhibitory concentration, inhibition rate
猴头菌 Hericium erinaceus (Bull.) Pers.在分类
学上隶属于担子菌门 Basidiomyeota，红菇目
Russulales，猴头菌科 Hericiaceae，猴头菌属
Hericium，是一种名贵的药食兼用真菌，中医药理
论认为其具有促消化，滋补五脏的功能（戴玉成等
2010；麻兵继等 2012）。目前，市场上已经出现
多款猴头菌医药保健品（王利丽等 2011）。猴头
菌中的小分子活性物质主要包括猴头菌素、猴头菌
酮、二萜类、甾醇类、脂肪酸及其酯类等物质（尚
晓冬等 2012）。这些小分子活性物质已被证明具
有增强人体免疫力、抗癌、抗氧化等功效，而且现
代临床医学已经开始使用猴头菌提取浸膏片来治
疗胃溃疡、消化道炎症等疾病（王晓玉等 2010）。
幽门螺旋杆菌 Helicobacter pylori 是一种革兰
氏阴性微需氧杆菌，是由诺贝尔生理学和医学奖获
得者Warren和Marshal在 1979年从慢性胃炎病人
的胃镜活检标本中分离鉴定而来，1994 年世界卫
生组织才将幽门螺旋杆菌作为 I类致病因子，并且
认为其是慢性胃炎、胃十二指肠溃疡、胃癌、胃黏
膜相关淋巴组织、淋巴的主要致病因素（Olga et al.
2012）。由于猴头菌对胃病具有良好的治疗效果，
本实验室前期已证实猴头菌醇提物对幽门螺旋杆
菌具有抑制作用，进一步支持了临床试验中醇提浸
膏比水提浸膏的疗效好（李洁莉等 2001）的结论。
本实验在前期工作基础上，将猴头菌醇提液用不同
溶剂萃取，并对它们进行幽门螺旋杆菌抗性活性筛
选实验，以期从中筛选能够高效抑制幽门螺旋杆菌
的提取物。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试菌株：幽门螺旋杆菌 Helicobacter pylori
标准菌株 Helicobacter pylori ATCC43504、临床标准
菌 株 Helicobacter pylori SS1 、 临 床 分 离 株
Helicobacter pylori DXF、Helicobacter pylori 9、
Helicobacter pylori 78、Helicobacter pylori W2504由
上海交通大学郭晓奎教授提供。
1.1.2 材料和仪器：猴头菌子实体（上海市农业科
学院），布氏肉汤（青岛日水生物技术有限公司），
无菌羊血（中国腹泻病控制上海世纪供应研究中
心）。石油醚、无水乙醇、无水甲醇、氯仿等试剂
均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。
ISSN1672‐6472 CN11‐5180/Q Mycosystema November 15, 2015 Vol. 34 No. 6
http://journals‐myco.im.ac.cn
1178
Laborota 4000旋转蒸发仪（德国 Heidolph公司），
体式显微镜（Olympus 公司），水套式三气培养箱
（美国 Thermo Fisher Scientific公司），JJ‐CJ‐2FD金
净洁净操作台（吴江市净化设备总厂），AL104 电
子天平[梅特勒‐托利多仪器（上海）有限公司]，
UV2450 紫外‐可见分光光度计（日本岛津公司），
Costar 96孔细胞培养平板（美国 Corning Costar公
司），HPD‐100 型大孔树脂（河北沧州宝恩化工有
限公司）。
1.2 方法
1.2.1 猴头菌乙醇制备液的制备：称取猴头菌子实
体干粉 0.2kg，加入 2L蒸馏水，加热搅拌溶解，静
置冷却至室温。取 100mL 样液，以样液:HPD‐100
树脂=10:1拌样，放置摇床 110r/min，25℃，24–48h
下使之充分吸附，把吸附后的大孔树脂装柱（径高
比 1:8），分别用 3 倍柱床体积（BV）的蒸馏水和
50%乙醇洗去杂质以及不吸附成分；然后加入 4倍
柱床体积的 95%乙醇，放置恒温摇床 110r/min，
25℃，2h 的条件下进行静态洗脱，收集洗脱液，
回收乙醇并浓缩得到乙醇制备液（MREEs），测定
其对 Helicobacter pylori的抑菌活性。
1.2.2 提取与分离：量取 100mL猴头菌乙醇制备液
（MREEs），加入 5mL的 1mg/mL氢氧化钾溶液和
少量沸石，置 80℃冷凝回流装置中皂化 1h，冷却
至室温。将皂化后的猴头菌制备物用石油醚
（60–90℃）萃取 3 次，得到石油醚萃取物 A1 和
皂化液两部分。皂化收集液滴加浓硫酸调 pH 为
2.0–3.0，再次用石油醚（60–90℃）萃取 3次，得
到石油醚萃取物 A2；剩余液用氯仿萃取 3 次，得
到氯仿萃取物 B。分别测定抑菌活性。
1.2.3 抑菌敏感性试验：采用纸片扩散法（Chang et
al. 2012），以 75%乙醇为阴性对照组，甲硝唑为阳
性对照，布氏培养基加 7%无菌羊血，用无菌棉签
蘸取孵育 72h 的菌种，校正浓度至相当于 0.5
McFarland standard（含菌 1×107–1×108CFU/L），分
别接种于平板中，于三气培养箱中（O2：5%；CO2：
15%；N2：80%），37℃恒温培养 72h。记录每组纸
片的抑菌圈直径（mm）。
1.2.4 最低抑菌浓度（MIC）测定：采用微量琼脂稀
释扩散法，分别以 75%乙醇为阴性对照，以甲硝唑
为阳性对照，依次按 2倍连续稀释在 96孔平板中加
样，然后每孔加 0.1mL改良布氏肉汤培养基（加 7%
羊血）。用无菌棉棒蘸取待测菌菌悬液，相当于
0.5 McFarland standard（含菌 1×107–1×108CFU/L）菌
悬液，依次接种于各孔中的培养基表面，于三气培
养箱中（O2：5%；CO2：15%；N2：80%），37℃恒
温培养 72h（Zhang et al. 2013）。以体式显微镜下
观察各孔培养基表面，以孔内无菌生长为最低抑菌
活性浓度。
1.2.5 GC‐MS分析：采用 7890A‐5975C气相色谱‐质
谱联用仪（美国 Agilent 公司），色谱柱：DB‐5ms
（30m×0.25mm×0.25µm）；进样量：0.5μL；进样
温度：270℃；不分流进样；载气：氦气（99.999%）；
流量：1mL/min；柱温：50℃保持 3min，以 5℃/min
升至 300℃，保持 20min；接口温度：280℃；离
子源温度：230°C；四级杆温度：150℃；电离方式：
EI+，70ev；检测器电压：1 765V；扫描方式：全扫
描；溶剂延迟 3min；质量扫描范围 20–550amu。
利用气相色谱‐质谱‐计算机联用仪进行分析鉴定，
通过数据处理系统检索 NIST2011 标准质谱图库，
并与标准谱图相对照，匹配率大于 90%，按峰面积
归一化方法作定量分析。
1.2.6 统计分析：使用 IBM SPSS 19.0软件对数据进
行方差检验分析，以 P<0.05时为差异显著。
2 结果与分析
2.1 猴头菌子实体醇提取物的抑菌实验
先前我们通过研究 14 种食用菌 Hericium
erinaceus，Ganoderma lucidum，Cordyceps militaris，
Pleurotus eryngii，P. ostreatus，Agrocybe aegerita，
Lentinus edodes，Agaricus brasiliensis，A. bisporus，
Coprinus comatus， Grifola frondosa， Phellinus
李亮 等 /猴头菌子实体小分子提取物的分离与体外抑制幽门螺旋杆菌的分析
菌物学报
1179
igniarius ， Flammulina velutipes 和 Hypsizygus
marmoreus对幽门螺旋杆菌的抑菌试验，其结果显
示，猴头菌 H. erinaceus使用 95%乙醇提取得到的
物质能够有效地抑制幽门螺旋杆菌的生长（Shang
et al. 2013）。鉴于猴头菌潜在的抑菌效果，本实验
对猴头菌抑制幽门螺旋杆菌进行了后续研究，并在
原有实验提取方法的基础上进行了改进，先使用大
孔树脂和 95%乙醇制备得到猴头菌乙醇制备物
（MREEs），对制备物（MREEs）进行皂化后再利用
不同有机溶剂石油醚和氯仿对猴头菌乙醇制备液进
行进一步的萃取分离得到 A1、A2和 B 3个组分。
各组分提取得到的不同提取物对标准菌株 H.
pylori ATCC43504 进行抑菌活性的测定值见表 1，
组分 Al、A2、B的最低抑菌浓度低于 1.000mg/mL，
而猴头菌乙醇提取物（EEs）和用大孔树脂得到的
乙醇制备物（MREEs）对幽门螺旋杆菌的最低抑菌
浓度各自为 1.500–3.000mg/mL和 1.000mg/mL，并
表 1 初提取物对幽门螺旋杆菌的最低抑菌浓度
Table 1 The minimum inhibitory concentration of preliminary
extraction from Hericium erinaceus against Helicobacter
pylori ATCC43504
菌种
Strains
提取液
Extracts
最低抑菌浓度
Minimum inhibitory
concentration (mg/mL)
Helicobacter pylori
ATCC43504
EEs 1.500–3.000
MREEs 1.000
MTZ 0.001
A1 0.250
A2 0.500
B 1.000–0.500
注：EEs：95%乙醇提取物；MREEs：使用大孔树脂得到的
95%乙醇制备物；MTZ：甲硝唑；A1：石油醚萃取物；A2：
皂化液再用石油醚萃取得到的萃取物；B：氯仿萃取物.
Note: EEs: The 95% ethanol extracts; MREEs: Extracted with
95% ethanol in HPD‐100 macroporous resin; MTZ:
Metronidazole; A1: The petroleum ether extracts; A2:
Petroleum ether extracts from saponification liquid; B: The
chloroform extracts.
且用大孔树脂得到的乙醇制备物（MREEs）的最低
抑菌浓度低于乙醇制备物（EEs）的最低抑菌浓度，
由于实验中最低抑菌浓度与抑菌效果呈负相关，测
试物的最低抑菌浓度越小说明组分的抑菌效果越
好。因此使用大孔树脂能够有效加强乙醇富集猴头
菌子实体中的抑菌活性物质（表 1）；同时 A1、A2
和 B 对幽门螺旋杆菌均具有较好的抑菌效果，这
也说明利用有机溶剂萃取得到的组分 A1、A2、B
的抑菌效果又进一步得到增强，但相比抗生素而
言，3种萃取物对幽门螺旋杆菌的抑制效果仍有较
大差距。
2.2 猴头菌萃取液的抑菌效果
为进一步了解猴头菌萃取物对幽门螺旋杆菌
的抑菌效果，本实验对 3 种萃取物（5mg/mL）进
行纸片药敏试验，本实验以按照高敏 15mm，
15mm>中敏>7mm，低敏<7mm为标准（Ndip et al.
2007；冀子中和万里 2008），对 3种萃取物的药敏
性进行了测定，以中敏 10mm 为比对。从 MREEs
中用有机试剂石油醚和氯仿进一步萃取得到的萃
取物 A1、A2、B 组分对 4 株不同幽门螺旋杆菌菌
株均有不同程度的抑制效果，各组分对菌株的抑制
率在 41.0%–62.9%之间（图 1）。在 4株幽门螺旋杆
菌中，A1对 Helicobacter pylori ATCC 43504的抑制
率最低为 52.7%，但对 Helicobacter pylori SS1的抑
制率达到 62.9%；而 A2在 4株菌株的抑制实验中，
对 Helicobacter pylori W2504 的抑制率最高为
60.4%，对 Helicobacter pylori ATCC 43504的抑制作
用较弱，抑制率为 41.0%；B对 Helicobacter pylori
ATCC 43504的抑制作用较弱，抑制率为 41.5%，同
时对 Helicobacter pylori W2504的抑菌作用较好，
抑制率为 54.1%，结果表明，A1 在 3 株幽门螺旋
杆菌中的抑制率略高于 A2和 B，但统计分析 3种
萃取物之间的抑菌作用没有表现出差异显著
（P>0.05），说明 3种萃取物具有相似的抑菌效果，
但它们的组成成分并不相同。同时在 4株不同幽门
螺杆菌的抑制实验中，在抑制 Helicobacter pylori
SS1 的实验中，可以看到 A1 的抑制率可以达到
ISSN1672‐6472 CN11‐5180/Q Mycosystema November 15, 2015 Vol. 34 No. 6
http://journals‐myco.im.ac.cn
1180
图 1 猴头菌提取物对不同幽门螺旋杆菌菌株的抑制作用 A1：石油醚萃取物；A2：皂化液再用石油醚萃取得到的萃取物；
B：氯仿萃取物. 对照组以 10mm为基准.
Fig. 1 The bactericidal activity of Hericium erinaceus extracts against four strains of Helicobacter pylori. A1: The petroleum ether extracts;
A2: Petroleum ether extracts from saponification liquid; B: The chloroform extracts. The control group used 10mm as a benchmark.
62.9%，而 A2、B对 Helicobacter pylori SS1菌株的
抑制率分别为 47.4%、50.4%；在抑制 Helicobacter
pylori ATCC 43504的实验中，A1、A2和 B 的抑菌
率分别为 52.7%， 41.0%和 41.5%；在测试
Helicobacter pylori 9的实验中，A1、A2、B的抑制
率分别为 53.3%，41.9%，45.6%；在对 Helicobacter
pylori W2504 抑制实验中 A1、A2、B 分别表现出
57.3%，60.4%，54.1%的抑制率；但是统计结果显示
幽门螺旋杆菌菌株之间的抑制效果没有表现出差异
显著性（P>0.05），结果表明 3种萃取物分别在每株
Helicobacter pylori中表现出相似的抑菌效果。
2.3 猴头菌提取物的最低抑菌活性
猴头菌萃取物对 5 株幽门螺旋杆菌抑制的最
低抑菌浓度值列于表2中。在5株幽门螺旋杆菌中，
表 2 3种不同提取物对不同幽门螺旋杆菌菌株的最低抑菌浓度
Table 2 The minimum inhibitory concentration values of three extracts from Hericium erinaceus against five Helicobacter pylori
strains
受试菌种
Strains
最低抑菌浓度 Minimum inhibitory concentration (mg/mL)
A1 A2 B
Helicobacter pylori SS1 0.500 1.000–0.500 1.000–0.500
Helicobacter pylori W2504 0.250 0.500 0.125
Helicobacter pylori DXF 0.500 0.500 0.250
Helicobacter pylori 78 0.500 0.250 0.500
Helicobacter pylori 9 0.250 0.500 0.125
注：A1：石油醚萃取物；A2：皂化液再用石油醚萃取得到的萃取物；B：氯仿萃取物.
Note: A1: The petroleum ether extracts; A2: Petroleum ether extracts from saponification liquid; B: The chloroform extracts.
李亮 等 /猴头菌子实体小分子提取物的分离与体外抑制幽门螺旋杆菌的分析
菌物学报
1181
3种萃取物对幽门螺旋杆菌均有抑制作用，其中猴
头菌提取物A1相应组分对H. pylori W2504、H.pylori
9的抑制作用最强，最低抑菌浓度为 0.250mg/mL；
A2对 H. pylori 78的抑菌作用最强，最低抑菌浓度
仅为 0.250mg/mL，B对 H. pylori W2504、H. pylori 9
的抑制作用最强，最低抑菌浓度仅为 0.125mg/mL。
说明得到的提取物能够明显对某些菌种具有非常
好的抑制效果，同时得到的提取物很有可能存在更
好的单体抑菌物质。
但通过比较在药敏试验中的数据发现，3种萃
取物 A1、A2和 B在最低抑菌浓度试验中表现出不
同的结果，这可能是因为在试验过程中，由于样品
在纸片和 96 孔板上面残留量不可能达到完全相
同，以及培养环境的变化引起。
2.4 猴头菌 3种提取物的组分
通过 GC‐MS 对猴头菌 3 种抑菌提取物进行检
测，分析出来的化合物成分不尽相同，由图 2可见
3种提取物的总离子流色谱图，含量较高的物质基
本出现在 20–50min之间，表明 3种提取物组分的
分子量较小；表 3、表 4和表 5显示猴头菌提取物
A1 和 A2 的主要组成物质均是邻苯二甲酸二丁酯
（4.53%和 6.93%），而猴头菌提取物 B中主要组成
物质是棕榈酸 2.87%，同时 A1分析出来有 32种，
而 A2仅有 7种，B有 30种物质，结果显示 3种提
取物 A1、A2和 B分析出来的物质差异很大，分析
结果已经消除溶剂对检测结果的影响。
图 2 猴头菌 3种提取物的总离子流色谱图 A1：石油醚萃取物；A2：皂化液再用石油醚萃取得到的萃取物；B：氯仿萃
取物.
Fig. 2 Total ion chromatogram in three extracts of Hericium erinaceus. A1: The petroleum ether extracts; A2: Petroleum ether
extracts from saponification liquid; B: The chloroform extracts.
ISSN1672‐6472 CN11‐5180/Q Mycosystema November 15, 2015 Vol. 34 No. 6
http://journals‐myco.im.ac.cn
1182
表 3 猴头菌提取物 A1成分 GC‐MS分析
Table 3 Hericium erinaceus extract A1 constituent analyzed by GC‐MS
保留时间
TR (min)
化合物名称
Compound
分子式
Molecular formula
相对含量
Relative content (%)
1 8.186 Benzene, (1‐methylethyl)‐ 异丙基苯 C9H12 0.46
2 16.258 Naphthalene 萘 C10H8 0.27
3 17.692 Benzene, 1,3,5‐triethyl‐ 1,3,5‐三乙基苯 C12H18 0.05
4 18.444 Ethanone, 1‐(4‐ethylphenyl)‐ 对乙基苯乙酮 C10H12O 0.69
5 19.442 Naphthalene, 2‐methyl‐ 2‐甲基萘 C11H10 0.86
6 21.698 Biphenyl 联苯 C12H10 0.53
7 21.980 Naphthalene,1,2,3,4‐tetrahydro‐5,6‐dimethyl 1,2,3,4‐四氢‐5,6‐二甲基萘 C12H16 0.05
8 22.086 Naphthalene, 2‐ethyl‐ 2‐乙基萘 C12H12 0.31
9 22.215 Tetradecane十四烷 C14H30 0.65
10 22.732 Naphthalene, 1,4‐dimethyl‐ 1,4‐二甲基萘 C12H12 0.33
11 23.038 Diphenylmethane二苯基甲烷 C13H12 1.28
12 24.589 Benzene, 1,2‐dimethoxy‐4‐(1‐propenyl)‐ 异丁香酚甲醚 C11H14O2 0.36
13 24.741 Pentadecane正十五烷 C15H32 0.52
14 25.728 Benzene, 1‐methyl‐4‐(phenylmethyl)‐ 4‐甲基二苯甲烷 C14H14 0.03
15 25.987 Naphthalene, 1,6,7‐trimethyl‐ 1,6,7‐ 三甲基萘 C13H14 0.24
16 26.175 Ethanone, 1‐(3,4‐dimethoxyphenyl)‐ 3,4‐二甲氧基苯乙酮 C10H12O3 0.71
17 27.138 Hexadecane 1‐十六烯 C16H32 1.13
18 27.749 Methyl 6,8‐dodecadienyl ether 6.8‐二烯基甲醚 C13H24O 0.60
19 28.748 Ethanone,1‐(3,4,5‐trimethoxyphenyl)‐ 1‐(3,4,5‐三甲氧苯基)乙烯酮 C11H14O4 0.46
20 29.347 2‐Pentadecanone 2‐十五烷酮 C15H30O 0.18
21 29.418 Heptadecane 正十七烷 C17H36 0.56
22 30.123 Cyclotetradecane 环十四烷 C14H28 0.53
23 31.580 Octadecane 正十八烷 C18H38 1.19
24 33.295 (4‐Acetylphenyl)phenylmethane 4‐(乙酰苯基)苯甲烷 C15H14O 0.25
25 34.670 Dibutyl phthalate 邻苯二甲酸二丁酯 C16H22O4 4.53
26 35.445 Hexadecanoic acid, ethyl ester 十六酸乙酯 C18H36O2 0.30
27 35.598 Eicosane正二十烷 C20H42 0.35
28 37.478 Heneicosane正二十一烷 C21H44 0.38
29 38.829 Hexadecanamide十六碳酰胺 C16H33NO 0.18
30 41.931 9‐Octadecenamide, (Z)‐ 油酸酰胺 C18H35NO 0.61
31 44.657 Phthalic acid, di(2‐propylpentyl) ester 邻 2‐茉莉酮基‐邻苯二甲酸酯 C24H38O4 0.42
李亮 等 /猴头菌子实体小分子提取物的分离与体外抑制幽门螺旋杆菌的分析
菌物学报
1183
表 4 猴头菌提取物 A2成分 GC‐MS分析
Table 4 Hericium erinaceus extract A2 constituent analyzed by GC‐MS
保留时间
tR (min)
化合物名称
Compound
分子式
Molecular formula
相对含量
Relative content (%)
1 8.186 Benzene, (1‐methylethyl)‐ 2‐苯基‐1‐丙烯 C9H10 1.81
2 22.215 Vanillin 香兰素 C8H8O3 0.26
3 28.725 Ethanone, 1‐(3,4,5‐trimethoxyphenyl)‐ 3,4,5‐三甲氧基苯乙酮 C11H14O4 0.68
4 34.106 Hexadecanoic acid, methyl ester 棕榈酸甲酯 C17H34O2 1.35
5 34.658 Dibutyl phthalate 邻苯二甲酸二丁酯 C16H22O4 6.93
6 40.052 Tributylacetylcitrate 乙酰柠檬酸三丁酯 C20H34O8 0.59
7 41.931 9‐Octadecenamide, (Z)‐ 油酸酰胺 C18H35NO 0.59
表 5 猴头菌提取物 B成分 GC‐MS分析
Table 5 Hericium erinaceus extract B constituent analyzed by GC‐MS
保留时间
tR (min)
化合物名称
Compound
分子式
Molecular formula
相对含量
Relative content (%)
1 8.116 Ethane, 1,1,2,2‐tetrachloro‐ 1,1,2,2‐四氯乙烷 C2H2Cl4 0.94
2 10.125 Pentanoic acid, 4‐oxo‐, methyl ester 乙酰丙酸甲酯 C6H10O3 0.05
3 12.451 Pentanoic acid, 4‐oxo‐, ethyl ester 乙酰丙酸乙酯 C7H12O3 0.37
4 12.827 2‐Furancarboxylic acid 糠酸 C5H4O3 0.21
5 12.898 Ethane, hexachloro‐ 六氯乙烷 C2Cl6 0.18
6 14.167 2‐Cyclopenten‐1‐one, 3‐ethyl‐2‐hydroxy‐ 乙基环戊烯醇酮 C7H10O2 0.08
7 17.069 Undecane, 2,6‐dimethyl‐ 2,6‐二甲基十一烷 C13H28 0.10
8 17.892 Benzeneacetic acid, ethyl ester 苯乙酸乙酯 C10H12O2 0.47
9 18.197 Dodecane, 4,6‐dimethyl‐ 4,6‐二甲基十二烷 C14H30 0.09
10 20.806 Phenol, 2,6‐dimethoxy‐ 2,6‐二甲氧基苯酚 C8H10O3 0.18
11 21.123 2(3H)‐Furanone, dihydro‐5‐pentyl‐ 二氢‐5‐戊基‐2(3H)‐呋喃酮 C9H16O2 0.05
12 22.074 Vanillin 香兰素 C8H8O3 0.58
13 22.215 Tetradecane 十四烷 C14H30 0.09
14 22.991 Benzoic acid, 4‐methoxy‐ 对甲氧基苯甲酸 C8H8O3 0.44
15 23.296 Acetophenone, 4‐hydroxy‐ 对羟基苯乙酮 C8H8O2 0.64
16 24.742 Pentadecane 正十五烷 C15H32 0.11
17 24.906 Phenol, 2,4‐bis(1,1‐dimethylethyl)‐ 2,4‐二叔丁基苯酚 C14H22O 2.04
18 25.787 Nonanedioic acid, dimethyl ester 壬二酸二甲酯 C11H20O4 0.18
19 26.187 Ethanone, 1‐(3,4‐dimethoxyphenyl)‐ 3,4‐二甲氧基苯乙酮 C10H12O3 1.26
20 26.727 Diethyl suberate 辛二酸二乙酯 C12H22O4 0.40
21 27.139 Hexadecane 1‐十六烯 C16H32 0.23
22 28.384 Benzaldehyde, 4‐hydroxy‐3,5‐dimethoxy‐ 丁香醛 C9H10O4 0.48
23 28.760 Ethanone, 1‐(3,4,5‐trimethoxyphenyl)‐ 3,4,5‐三甲氧基苯乙酮 C11H14O4 0.45
24 31.275 Decanedioic acid, diethyl ester 癸二酸二乙酯 C14H26O4 1.38
25 31.592 Octadecane 正十八烷 C18H38 0.39
26 33.519 2‐Propenoic acid, 3‐(4‐hydroxy‐3‐methoxyphenyl)‐, (E)‐
3‐(4‐羟基‐3‐甲氧基苯基)2‐丙烯酸
C12H14O4 1.25
27 35.034 n‐Hexadecanoic acid棕榈酸 C16H32O2 2.87
28 37.831 Heptadecane, 2‐methyl‐ 2‐甲基十七烷 C18H38 0.13
29 38.712 Octadecanoic acid 硬脂酸 C18H36O2 2.54
30 48.840 Squalene角鲨烯 C30H50 0.15
ISSN1672‐6472 CN11‐5180/Q Mycosystema November 15, 2015 Vol. 34 No. 6
http://journals‐myco.im.ac.cn
1184
试验结果显示，3种提取物检测出的物质中以
萘和苯为结构的衍生物较多，并且一些酚、酮和萜
类被鉴定出来。其中从提取物中分析出来的萘类具
有潜在的抗菌开发价值，5‐羟基‐2‐乙氧基‐1,4‐萘醌
对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、姜瘟菌、蜡状芽孢
杆菌、白色念球菌、沙门氏菌具有显著的抑制作用
（李汉浠等 2012）；四氢萘类化合物具有体外抗
菌活性，其对白念珠菌的抑菌活性明显强于氟康
唑，同时对平滑念珠菌和红色毛癣菌的抑菌作用较
好，MIC<0.125µg/mL（梁蓉梅等 2007）；从指甲
花中分离得到的甲基萘能够抑制超氧阴离子的产
生，并释放弹性蛋白酶，从而增加甲基萘对生物的
抗炎性（Liou et al. 2013）。
抑菌实验结果显示，苯环能对微生物具有明显
的抑制作用，联苯对于革兰氏阳性菌具有显著的抑
制作用，而对于革兰氏阴性菌和真菌的抑制作用不
明显（Ribeiro et al. 2011）。而酯类对生物细胞有毒
性作用，因此猜测其具有潜在的抑菌作用，邻苯二
甲酸二丁酯能够抑制蚕豆胚根生长速度，提高超氧
化物歧化酶活性，降低氧化物酶活性，并对蚕豆胚
根具有遗传毒性，且能够破坏纺锤丝的结构（赖金
龙等 2014），其毒性对细胞具有一定的抑制；棕
榈酸甲酯广泛存在于自然界许多植物中，并且是多
种昆虫的化学信息素，用作蚂蚁拒食剂、某些昆虫
的驱避剂，具有明显的杀虫作用（王海香等 2013）。
在体外试验中，香兰素对大肠杆菌、金黄色葡萄
球菌、酵母菌、黑曲霉均有显著的抑制效果，同时香
兰素对真菌的抑制效果优于对细菌的抑制效果（周庆
礼等 2005）；在对细菌的抑制作用中，对革兰氏阴性
菌的抑制效果又优于对革兰氏阳性菌的抑制效果（周
庆礼等 2007）；进一步的研究发现，香兰素高温处理
后不影响其对细菌、黑根霉等的抑菌效果，在牛奶中
添加后会延长牛奶保质期（赵建芬等 2009）。
3 讨论
幽门螺旋杆菌 Helicobacter pylori 能够在动物
胃黏膜上皮表面生长，人体感染 H. pylori之后，由
于人体内细菌自发性清除较少，并且胃内环境复
杂，所以机体很难彻底清除幽门螺旋杆菌。目前临
床上一般使用抗生素来治疗由幽门螺旋杆菌引起
的胃病，但抗生素易受到胃排空、胃黏液层和胃酸
等理化因素的制约，同时抗生素的过度使用又会引
起病菌耐药性的增强，鉴于此，药效温良的中药制
剂正受到越来越多的重视，因此由珍贵药食用真菌
猴头菌中制得的药剂片便常用于治疗肠胃疾病。
目前在国内外，猴头菌中多种有效活性成分被
发现，从猴头菌中发现的神经生长因子 Amycenone
便被证实对神经衰弱和失眠有很好的疗效
（Inanaga 2012）；猴头菌多糖能显著降低脂质过氧
化水平，以及增加受试动物的抗氧化酶活性（Han
et al. 2013）；而对于小分子活性物质的研究目前在
国内尚处于起步阶段（袁胜东等 2011）。因此，
为了能够更好地了解猴头菌中小分子活性物质对
胃肠病的治疗作用，本试验除了检测猴头菌提取物
的最小抑菌活性能力，还另外选择了纸片扩散法对
猴头菌子实体不同溶剂提取物的体外抑菌能力进
行了评价，本研究结果显示，猴头菌醇提物具有一
定的抑菌效果，经过有机萃取后猴头菌提取物的抑
菌成分进一步富集，而且抑菌效果比醇提取物的抑
菌效果明显增强。张庭廷等（2003）发现猴头菌
在不同生长阶段对病菌的抑制作用不同，因此我们
猜测猴头菌不同生长阶段对幽门螺旋杆菌也有着
不同的抑制作用，经实验验证猴头菌的菌丝体和子
实体都对幽门螺旋杆菌具有抑制作用（蔡艳华
2009；孙蓉 2009），可能是猴头菌在生长过程中产
生的抗菌物质不同，本实验结果表明，使用不同的
溶剂萃取得到的成分抑菌作用不尽相同，虽然萃取
提取物的抑菌效果高于单纯醇提物成分的抑菌效
果，但总体抑菌率仍然较差。因此还需要对萃取物
的成分富集进一步深入阐明，但其提取物成分对幽
门螺旋杆菌的抑制作用还没有深入的研究，其药物
在体内的吸收以及对幽门螺旋杆菌的抑制机理现
李亮 等 /猴头菌子实体小分子提取物的分离与体外抑制幽门螺旋杆菌的分析
菌物学报
1185
阶段仍然没有阐述清楚。
[REFERENCES]
Cai YH, 2009. Preliminary research on Hercium erinaceus
biological characteristics and to Helicobacter pylori
inhibitory action in vitro. Master Thesis, Nanjing
Agricultural University, Nanjing. 1‐64 (in Chinese)
Chang CS, Liu JF, Lin HJ, Lin CD, Tang CH, Lu DY, Sing YT, Chen LY,
Kao MC, Kuo SC, Lai CH, 2012. Synthesis and bioevaluation
of novel 3,4,5‐trimethoxybenzylbenzimidazole derivatives
that inhibit Helicobacter pylori‐induced pathogenesis in
human gastric epithelial cells. European Journal of
Medicinal Chemistry, 48: 244‐254
Dai YC, Zhou LW, Yang ZL, Wen HA, Bau T, Li TH, 2010. A
revised checklist of edible fungi in China. Mycosystema,
29(1): 1‐21 (in Chinese)
Han ZH, Ye JM, Wang GF, 2013. Evaluation of in vivo antioxidant
activity of Hericium erinaceus polysaccharides. International
Journal of Biological Macromolecules, 52: 66‐71
Inanaga K, 2012. Amycenone, a nootropic found in Hericium
erinaceum. Personalized Medicine Universe, 1: 13‐17
Ji ZZ, Wan L, 2008. Investigation on cultivation and drug
sensitivity of H. pylori in 1134 cases. Chinese Journal of
Gastroenterology and Hepatology, 17(12): 1013‐1015 (in
Chinese)
Lai JL, Tao ZY, Wu G, Fu Q, Zhang H, Luo XG, 2014. Effect of
di‐n‐butyl phthalate on cell micronucleus formation and
the mechanism of toxicity in Vicia faba radicle. Asian
Journal of Ecotoxicology, 9(1): 107‐113 (in Chinese)
Li HX, Ren SS, Li Y, Luo P, Pan WG, 2012. Study on minimum
inhibitory concentration and minimum bactericidal
concentration of Pterocarya stenoptera naphthoquinone
against common bacteria. Lishizhen Medicine and
Materia Research, 23(6): 1422‐1424 (in Chinese)
Li JL, Lu L, Dai CC, Chen C, Qiu JY, 2001. A comparative study
on sterols of ethanol extract and water extract from
Hericium erinaceus. China Journal of Chinese Materia
Medica, 26(12): 831‐834 (in Chinese)
Liang RM, Cao YB, Zhou YJ, Wang T, Lu J, Yao B, Jiang YY, 2007.
Detection of in vitro anti‐fungi activity of 20 tetralin
compounds. Academic Journal of Second Military
Medical University, 3: 286‐293 (in Chinese)
Liou JR, Shazly ME, Du YC, Tseng CN, Hwang TL, Chuang YL, Hsu
YM, Hsieh PW, Wu CC, Chen SL, Hou MF, Chang FR, Wu YC,
2013. 1,5‐Diphenylpent‐3‐en‐1‐ynes and methyl
naphthalene carboxylates from Lawsonia inermis and their
anti‐inflammatory activity. Phytochemistry, 88: 67‐73
Ma BJ, Xu JL, Wen CN, Li W, Ruan Y, Shen JW, Ma JC, 2012.
Chemical studies on fruiting bodies of Hericium
erinaceus. Natural Product Research and Development,
24(9): 1165‐1168, 1175 (in Chinese)
Ndip RN, Tarkang AEM, Mbullah SM, Luma HN, Malongue A,
Ndip LM, Nyongbela K, Wirmum C, Efange SMN, 2007. In
vitro anti‐Helicobacter pylori activity of extracts of
selected medicinal plants from North West Cameroon.
Journal of Ethnopharmacology, 114: 452‐457
Olga S, Sílvia V, Cristina DMS, Maria JPC, Rita S, Jose C, Elsa
TG, 2012. Anti‐Helicobacter pylori activity of Terminalia
macroptera root. Fitoterapia, 83: 872‐876
Ribeiro PR, Ferraz CG, Guedes MLS, Martins D, Cruz FG, 2011.
A new biphenyl and antimicrobial activity of extracts and
compounds from Clusiaburle marxii. Fitoterapia, 82:
1237‐1240
Shang XD, Tan Q, Liu RN, Yu KY, Li PZ, Zhao GP, 2013. In vitro
anti–Helicobacter pylori effects of medicinal mushroom
extracts, with special emphasis on the lion’s mane mushroom,
Hericium erinaceus (higher basidiomycetes). International
Journal of Medicinal Mushrooms, 15(2): 165‐174
Shang XD, Wang GY, Pan W, Sun R, CaiYh, Tan Q, Zhao GP,
2012. Advances in research on low molecule weight
bioactive components of Hericium erinaceus. Acta Edulis
Fungi, 19(1): 79‐84 (in Chinese)
Sun R, 2009. Observation and study on Hericium erinaceus
against Helicobacter pylori in vitro. Master Thesis,
Nanjing Agricultural University, Nanjing. 1‐53 (in Chinese)
Wang HX, Hao YP, Wang HW, 2013. Indoor bioactivity of
methyl palmitate acting on phytophagous mites and
synergetic effect of industrial methyl palmitate mixed
with silwet L‐77. Chinese Agricultural Science Bulletin,
29(21): 184‐187 (in Chinese)
ISSN1672‐6472 CN11‐5180/Q Mycosystema November 15, 2015 Vol. 34 No. 6
http://journals‐myco.im.ac.cn
1186
Wang LL, Guo HG, Wang QL, Tan R, Fu QW, Liu N, Hong SH,
Shen MZ, Yu J, Li DQ, Mao CQ, 2011. A preliminary study
of fresh Hericium erinaceus oral liquid on health‐care
function and promotion of learning and memory.
Mycosystema, 30(1): 85‐91 (in Chinese)
Wang XY, Jing QY, Ling PX, Zhang TM, 2010. Research progress
on the effective components of Hericium erinaceus and
its pharmacological actions. Chinese Journal of
Biochemical Pharmaceutics, 31(1): 70‐72 (in Chinese)
Yuan SD, Luo X, Yu MY, Xu XY, Jiang N, Wei W, Zheng LY, 2011.
Research progress on the effective components of H.
erinaceus and its pharmacological actions. Journal of Anhui
Agricultural Science, 39(15): 8926‐8928 (in Chinese)
Zhang TT, Pan JH, Zhu SX, 2003. A study on the antimicrobial
activities of Hericium erinaceus preparations. Journal of
Anhui Normal University (Natural Science), 26(2):
159‐160 (in Chinese)
Zhang XQ, Gu HM, Li XZ, Xu ZN, Chen YS, Li Y, 2013.
Anti‐Helicobacter pylori compounds from the ethanol
extracts of Geranium wilfordii. Journal of
Ethnopharmacology, 147: 204‐207
Zhang ZW, Zhou QL, 2007, Study on the inhibited effect of
vanillin against the bacteria. Science and Technology of
Food Industry, 28(1): 183‐184, 230 (in Chinese)
Zhao JF, Wei SL, Yan ZJ, 2009. Microbial inhibition effect and
the application of vanillin. Journal of Microbiology, 29(6):
73‐76 (in Chinese)
Zhou QL, Zhang ZW, Wang CL, Wu Y, Li S, Bao QS, 2005. Study
on the inhibited effect of vanillin for the bacteria and
the eumycota. Food Science, 26: 23‐25 (in Chinese)
[附中文参考文献]
蔡艳华，2009. 猴头菌生物学特性和体外抑制幽门螺旋杆
菌的初步研究. 南京农业大学硕士论文，南京. 1‐64
戴玉成，周丽伟，杨祝良，文华安，图力古尔，李泰辉，
2010. 中国食用菌名录. 菌物学报，29(1): 1‐21
冀子中，万里，2008. 1134例幽门螺旋杆菌培养及药敏分
析. 胃肠病学和肝病学杂志，17(12): 1013‐1015
赖金龙，陶宗娅，吴国，付倩，张红，罗学刚，2014. 邻
苯二甲酸二丁酯对蚕豆胚根细胞微核形成的影响及毒
理机制. 生态毒理学报，9(1): 107‐113
李汉浠，任赛赛，李勇，罗彭，潘为高，2012. 枫杨萘醌
对常见菌的抗菌谱、最低抑菌浓度和最低杀菌浓度研
究. 时珍国医国药，23(6): 1422‐1424
李洁莉，陆玲，戴传超，陈坤，邱健勇，2001. 猴头菌醇
提取浸膏和水提取浸膏甾醇类化合物的比较研究. 中
国中药杂志，26(12): 831‐834
梁蓉梅，曹永兵，周有骏，汪涛，卢嘉，姚斌，姜远英，
2007. 20种四氢萘类抗真菌化合物体外抑菌活性测定.
第二军医大学学报，28(3): 286‐293
麻兵继，徐俊蕾，文春南，于海尤，李文，阮元，申进文，
马进川，2012. 猴头菌子实体化学成分研究. 天然产物
研究与开发，24(9): 1165‐1168, 1175
尚晓冬，王国艳，潘伟，孙蓉，蔡艳华，谭琦，赵国屏，
2012. 猴头菌小分子活性成分研究进程. 食用菌学报，
19(1): 79‐84
孙蓉，2009. 猴头菌抑制幽门螺旋杆菌的研究. 南京农业
大学硕士论文，南京. 1‐53
王海香，郝艳平，王宏伟，2013. 棕榈酸甲酯对植食螨的
室内生物活性及与 Silwet L‐77 混配毒力测试. 中国农
学通报，29(21): 184‐187
王利丽，郭红光，王青龙，谭睿，付庆伟，刘娜，洪淑华，
沈明珠，余杰，李迪强，茆灿泉，2011. 鲜猴头菌口
服液益智保健功效初步研究. 菌物学报，30(1): 85‐91
王晓玉，蒋秋燕，林沛学，张天民，2010. 猴头菌活性成
分及药理作用研究进展 . 中国生化药物杂志，31(1):
70‐72
袁胜东，罗霞，余梦瑶，许晓燕，江南，魏巍，郑林用，
2011. 猴头菌生物活性成分及药理作用研究进展. 安
徽农业科学，39(15): 8926‐8928
张庭廷，潘继红，朱升学，2003. 猴头菌制备物的抑菌活
性研究 . 安徽师范大学学报（自然科学版），26(2):
159‐160
赵建芬，韦寿莲，严子军，2009. 香兰素的抑菌性及其应
用的初步研究. 微生物学杂志，29(6): 73‐76
周庆礼，张智维，王昌禄，武毅，李爽，包全帅，2005. 香
兰素抑菌作用的研究. 食品科学，26: 23‐25