全 文 ：食品研究与开发 2009 年 4 月第 30 卷第 4 期
将 AOAC 991.43 等同采用作为总的、可溶性和不溶性
膳食纤维测定的国家标准，并对测定过程提出了一些
建议[7]。 本试验改进后的酶－重量法不仅适用于发酵型
膳食纤维的测定，而且也可以用此方法测定一般的膳
食纤维样品，为制定我国膳食纤维标准测定方法提供
参考。 选用具塞刻度试管作为酶反应容器能够有效减
小测定过程中因转移样品带来的误差，定容方便，可以
作为广泛的膳食纤维源测定的酶反应容器。 对于酶解
前的预处理过程主要是针对样品容易漂浮的特点且
磁力搅拌没有作用的情况下，样品经过微波高火 1 min
后便于酶解反应完全，且采用微波的方法比其它方法
所需时间更短，如测定无漂浮特点的样品，可以省去煮
沸过程而直接进行酶解反应的过程。 另外， 过滤前加
入玻璃棉比加入硅藻土的助滤效果更好， 但酶－重量
法使用的硅藻土也能起到助滤的效果，具体测定可先
进行比较试验，针对不同的样品选择适合的助滤剂。
参考文献：
[1] Malkki Y. Trends in dietary fiber research and development:a review
[J]. Acta Alimentaria,2004,33:39-62
[2] 李建文 ,杨月欣 .膳食纤维定义及分析方法研究进展 [J].食品科
学,2007 (2):350-355
[3] 邬建国,周帅,张晓昱,等.采用药用真菌液态发酵甘薯渣获得膳
食纤维的发酵工艺研究[J].食品与发酵工业,2005(7):42-44
[4] 刘达玉 ,左勇 .酶解法提取薯渣膳食纤维的研究 [J].食品工业科
技,2005(5):91-92
[5] AOAC Official method 991.43,Total,solube,and insoluble dietary fiber
in foods. Official methods of analysis of AOAC INTERNATIONAL[S].
17th ed.2000,2(32):7-12
[6] 中国标准出版社总编室.中国国家标准汇编[M].北京 :中国标准
出版社,2003:88
[7] 杨晓莉,杨月欣,周瑞华,等.食品中总的、不溶性及可溶性膳食纤
维的酶-重量测定法[J].卫生研究,2001,30(6):377-379
收稿日期：2008-04-03
刘露露 1，顾正荣 2，饶琴 3
（1.常德芷兰实验学校，湖南 常德 415000；2.江南大学 化学与材料工程学院，江苏 无锡 214122；
3.常德市第四中学，湖南 常德 415000）
毛细管电泳检测低热量食品中
甜菊糖甙的含量
作者简介：刘露露（1983—），女（汉），硕士研究生，研究方向：分离检测技术。
DETERMINATION OF REBAUDIOSIDE AND STEVIOSIDE IN LOW CALORIC FOOD SAMPLES
BY CAPILLARY ZONE ELECTROPHORESIS
LIU Lu-lu1, GU Zheng-rong2, RAO Qin3
(1. Changde Zhilan Experiment School, Changde 415000, Hunan, China; 2. School of Chemical and Material
Engineering, Jiang nan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China; 3. The Number Four Middle School
of Changde, Changde 415000, Hunan, China)
Abstract: A capillary zone electrophoresis (CZE) separation was developed for simultaneous determination of
rebaudioside A and stevioside in low caloric food samples at the first time. The effects of modifiers,
摘 要：将高效毛细管电泳法成功地运用到低热量食品中斯替维苷（st）和莱鲍迪苷（RA）含量的检测。研究试验参数
对分离、检测的影响，得到优化的试验条件：在含有 23 %乙腈和 7 %甲醇的 50 mmol/L硼砂缓冲液(pH＝10.10)中，RA
和 St在 15 min内得到良好的分离。RA和 St分别在 0.05 mg/mL～10.0 mg/mL和 0.06 mg/mL～10.0 mg/mL的范围内浓
度与电泳峰面积呈良好的线性关系，检测限分别为 0.01 mg/mL和 0.02 mg/mL。
关键词：毛细管电泳；斯替维苷；莱鲍迪苷；低热量食品
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检测分析
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食品研究与开发2009 年 4 月第 30 卷第 4 期
图 1 斯替维苷结构式
Fig.1 Structure of stevioside
甜菊糖甙，又名甜菊糖苷，简称甜菊糖，是从菊科
草本植物甜叶菊( stevia rebaudiana)的叶子中提取的含
8 种成分的双萜糖苷的混合物， 按照天然植物化学的
划分,属于四环二萜的糖苷类,其通式为(C5H8)4[1]。 在甜
菊糖已知的 8种糖甙中， 甜味品质最好的组分是相对
含量较高的莱鲍迪苷 A(RA) 。 而另一相对含量较高的
组分斯替维苷(St)（含量约为 RA的 2倍~4倍）有一定的
不良余味及后苦味道，严重影响着甜菊糖的味质 [2-3]。
因此建立一套快速高效准确的甜菊糖苷组分分离测定
方法对于甜菊品种改良和甜菊糖苷的生产与应用具
有重要的意义。 由于 St和 RA具有极为相近的分子结
构和极性，两者结构之间的差别仅在于多一个和少一
个葡萄糖基，具体结构式见图 1、图 2，因此难用常规手
段将其分离[4]。
现有的检测甜菊糖的方法主要有高效液相色
谱 [5-7]，但分析时需要专用色谱柱，柱价昂贵，且色谱柱
易污染，成本高。 毛细管电泳法具有分离效率高、分析
速度快、试剂用量少和成本低等特点 [8]，也已经运用于
甜菊叶和甜菊糖成品中甜菊糖的分离测定[9-10]，但鲜见
文献报导利用毛细管电泳法同时检测出低热量食品
中 RA和 St的含量。本文克服缓冲液易结晶[10]、体系易
受温度影响 [11]等缺点，利用毛细管电泳技术建立一种
新的体系分离检测甜菊糖组分，并将其成功地运用到
低热量食品中甜菊糖主要组分的含量分离测定。
1 材料与方法
1.1 仪器和试剂
高效毛细管电泳系统（CAPEL 105，刘梅克斯公司，
俄罗斯），配有紫外检测器和正离子高压电源，石英毛
细 管 （有 效 长 度 50 cm， 内 径 50 μm，Polymicro
Technologies，USA）；PHS-25 型酸度计：上海分析仪器
厂；电子天平：FA2004，上海精密科学仪器有限公司；
恒温水浴锅（WSZ－133－65）：江苏南通县科学仪器厂；
硼砂、氢氧化钠 (分析纯 )：国药集团化学试剂有限公
司；乙腈、甲醇（色谱纯）：江苏汉邦科技有限公司；甜
菊糖标准品（Osaka）：Japan；天王甜菊糖（甜度为蔗糖
的 12.5 倍）：陕西天王保健品研究所；甜菊普洱茶：云
南老苍茶业有限公司；试验用水均为去离子水。
1.2 标准溶液和样品溶液的制备
1.2.1 标准溶液的制备
将标准样品置于 105 ℃干燥烘箱中，烘 2 h，分别
准确称取 St 和 RA 标准品，用水溶解配制，使质量浓
度均为 10.00 mg/mL，室温保存。使用时，根据需要用水
稀释成不同浓度的标准液。
1.2.2 样品溶液的制备
1）天王甜菊糖样品溶液的制备：准确称取干燥后
的天王甜菊糖 2.500 0 g，加水溶解，转移至 25 mL 容量
瓶中，定容，即得天王甜菊糖样品溶液。2）甜菊普洱茶
样品溶液的制备： 准确称取干燥后的样品 5.000 0 g，
研磨后置于 50 mL 圆底烧瓶中， 加 15 mL 沸水软化
concentration and pH of running buffer, separation voltage and injection time were investigated. The best
separation of rebaudioside A and stevioside could be obtained using 50 mmol/L borate buffer (pH=10.10),
containing 23 % acetonitrile and 7 % methanol as modifiers. Under the optimum conditions, these two
analytes could be separated within 15 min. The calibration curves had good linearity in the range of 0.05 mg/mL-
10. 0 mg/mL for RA and 0.06 mg/mL-10.0 mg/mL for St, with the detection limits of 0.01 mg/mL for RA and
0.02 mg/mL for St.
Key words: capillary zone electrophoresis; Stevioside; Rebaudioside A; low caloric food
图 2 莱鲍迪苷结构式
Fig.2 Structure of Rebaudioside A
检测分析
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食品研究与开发 2009 年 4 月第 30 卷第 4 期
10 min，在 80 ℃水浴中回流提取 40 min，抽滤。 重复
3次，合并提取液，用水定容至 50 mL，取上清液 ，经
0.45 μm 滤膜过滤，即得甜菊糖样品溶液。
1.3 方法
运行缓冲液为 50 mmol/L 的硼砂缓冲液 （pH＝
10.10），加入 23 %乙腈和 7 %甲醇作为有机添加剂，所
有溶液使用前均用 0.45 μm聚丙烯滤膜过滤， 分离温
度为 25 ℃，分离电压为 20 kV，检测波长为210 nm，在
30 mbar压力下进样，进样时间为 10 s。 试验前，依次用
水，1.0 mol/L NaOH,0.1 mol/L NaOH，水，运行缓冲液分
别冲洗毛细管 5、2、3、5、10 min，2 次进样间用运行缓
冲液在 20 kV电压下冲洗 200 s。
2 结果和讨论
2.1 缓冲液离子浓度的影响
试验缓冲液离子浓度对分离检测的影响。 离子
浓度越大 ，分离度越大 ，但分析时间延长 。 试验发
现， 离子浓度在 45 mmol/L~60 mol/L 之间，RA 和 St
都能达到基线分离。 综合分离度和分析时间考虑，
选用 50 mmol/L 硼砂作为最佳缓冲液。
2.2 缓冲液 pH值的影响
考察缓冲液体系 pH值在 9.00~10.50 间对分离检
测的影响。 pH的取值对体系的稳定有很大的影响，随
着 pH 值的增加，分离度增大，分析时间也相应延长。
当 pH 增加到 10.20 时，由于分析时间延长，造成峰拖
尾，分离度反而呈下降趋势,为了得到最佳的分离度，
本试验选择缓冲液 pH值为 10.10。
2.3 有机添加剂对分离检测的影响
乙腈单独做为有机添加剂加入时，随着乙腈的比
例增加， 分离度也明显得到改善。 当乙腈的比例超过
30 %时，两峰能得到较好的分离，但峰拖尾较严重，体
系易导致硼砂在缓冲液中结晶， 堵塞毛细管柱。 由于
甲醇和乙腈的极性较为相似，且硼砂在甲醇中的溶解
度较好，不易导致缓冲液结晶，甲醇还可起到降低电渗
流，进一步改善分离度的作用，故为了得到更稳定的体
系，试验尝试将有机添加剂的比例控制在 30 %，通过
改变乙腈和甲醇的比例来达到预期目的， 效果较好。
随着甲醇比例的增加，分析时间延长，分离度增大，但
甲醇比例超过 7 %时， 分离度又明显下降， 且噪音增
大。 故试验把有机添加剂总的比例控制在 30 ％，其中
含乙腈 23％，甲醇 7 %。
2.4 分离电压和进样时间的选择
试验分离电压对被测组分迁移时间和分离度的
影响。 随着电压的增大，由于分析时间的减小，两峰宽
也随之变窄，故分离度降低不是很明显。 试验发现，分
离电压在 12 kV~20 kV 间 RA 和 St 都能达到良好分
离，由于在 20 kV时分析时间最短且能达到良好分离，
故选择 20 kV为分离电压。
分离电压为 20 kV,选择进样时间为 4、6、8、10、12、
15 s ,考察进样量的影响。随着进样量的增大，灵敏度增
大，当进样量超过 30 mbar，10 s 时，峰高增加不明显，
却引起峰展宽和峰拖尾等负面影响，故选择进样量为
30 mbar，10 s。 图 3 为最佳条件下两标准物质的电泳
图谱,两物质在 15 min内基线分离。
2.5 重复性、线性范围及检出限
在上述优化条件下，将质量浓度均 1.00 mg/mL 的
RA和 St 的混合标样连续进样 8次，重复性良好，峰高
相对偏差(RSD)分别为 1.5 %(RA)和 2.3 %(St)，迁移时
间的 RSD分别为 2.8 %(RA)和 3.7 %(St)。
配制一系列不同浓度 RA 和 St 的混合标准溶液，
在优化条件下，测定了各组分的线性范围，得出各组
分的线性回归方程，并按 3倍信噪比计算检出限。结果
如表 1所示。
图 3 RA 和 St 的标准混合液电泳图
Fig.3 Electropherogram of standard solution containingRA and St
under optimum conditions 1.RA 2.St
被测物质
Compound
RA(莱鲍迪苷 A)
St (斯替维苷)
回归方程
Regression equations
y=78.121x-2.245
y=63.753x-0.433 6
相关系数 r
Correlation coeffcient r
0.997 8
0.999 9
线性范围/（mg/mL）
Linear range/（mg/mL）
0.05～10.0
0.06～10.0
检测限/（mg/mL）
Detection limit/（mg/mL）
0.01
0.02
注：y 为峰面积；x 为被测物质的质量浓度，（mg/mL）。
表 1 回归方程和检测限
Table1 The regression equations and detection limits
检测分析
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食品研究与开发2009 年 4 月第 30 卷第 4 期
图 5 甜菊普洱茶样品电泳图
Fig.5 The electrophoregram of Stevia Puer Tea sample 1.RA 2.St
图 4 天王甜菊糖样品电泳图
Fig.4 The electrophoregram of Tianwang sweetener
sample 1.RA 2.St
2.6 样品分析
2.6.1 天王甜菊糖样品的测定
采用上述方法对天王甜菊糖样品进行分析测定，
RA 和 St 得到了较好的分离，样品溶液的电泳图见图4。
按照工作曲线计算天王甜菊糖样品中 RA 和 St
的含量。测定结果：天王甜菊糖样品中 RA 的含量为
1.31 mg/g，St 的含量为 3.57 mg/g，3 次平行测定的
回收率为 98.2 %(RA)和 96.3 %(St)。
2.6.2 甜菊普洱茶样品的测定
在优化条件下， 取甜菊普洱茶样品溶液 1.00 mL
进样，测得的样品电泳图见图 5。
按照工作曲线计算甜菊普洱茶中 RA 和 St 的
含量。 测定结果： 甜菊普洱茶样品中 RA 的含量为
0.52 mg/g，St 的含量为 1.53 mg/g，3 次平行测定的
回收率为 101.2 %(RA)和 97.5 %(St)。
3 结论
在优化条件下， 分离检测了甜菊糖样品中的 RA
和 St 的含量，RA 和 St 在 15 min 内得到良好的分离。
测得天王甜菊糖样品中 RA 的含量为 1.31 mg/g， St 的
含量为 3.57 mg/g，3 次平行测定的回收率为 98.2 %
（RA）和 96.3 %（St）；甜菊普洱茶样品中 RA 的含量为
0.52 mg/g， St 的含量为 1.53 mg/g，3 次平行测定的回
收率为101.2 %（RA）和 97.5 %（St）。
参考文献：
[1] 常丽娟，杨竹天，杨大进.甜菊糖苷化学分析法研究概况[J].国外医
学卫生学分册，2007，34(3)：197－200
[2] 朱海霞，郑建仙.甜菊糖的酶法改性[J].中国食品添加剂，2004(1):
54－60
[3] 黄应森. 中国甜菊和甜菊糖甙的分型研究[J]. 中国糖料, 1999(4):
26-29
[4] 陈天红，张杨，刘晓航，等. 新型含吡啶基树脂对甜菊糖中莱鲍
迪甙 A 的富集与分离[J]. 中国科学(B 辑) , 1999, 29(5) : 461-466
[5] Jaroslav Pol, Barbora Hohnov, Tuulia Hy¨otyl¨ainen. Characterisation
of Stevia Rebaudiana by comprehensive two -dimensional liqui d
chromatography time-of-flight mass spectrometry[J]. J chromatogr,
A, 2007 (1150): 85-92
[6] 刘超，李来生，许丽丽，等. 高效液相色谱法测定甜叶菊糖中的
甜菊苷和莱鲍迪苷 A[J]. 分析试验室, 2007, 26(7): 23-27
[7] Ludmila Bovanová , Eva Brand s姚 teterová , Stanislav Baxa. HPLC
determination of stevioside in plant material and food samples[J]. Z
Lebensm Unters Forsch A , 1998(207) : 352-355
[8] 曹玉华，汪云.毛细管电泳电化学检测法测定胡黄连中香草酸和阿
魏酸的含量[J].分析测试学报, 2003,22(6): 95-97
[9] Liu J, Liu SFY. Separation and determination of stevia sweeteners
bycapillaryelectrophoresisandhighperformanceliquidchromatography
[J]. J Liq chromat ogr , 1995 , 18 ( 9 ) : 1703-19
[10] Mauri P, Catalano G, Gardana C, et al. Analysis of Stevia glycosides
by capillary electrophoresis[J]. Electrophoresis, 1996(17): 367-71
收稿日期：2008-05-12
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