全 文 ：第 9 卷 第 1 期 沈 阳 药 学 院 学 报 v ol .9 No . 1 p . 2 2
19 9 2
。
1 总5 0期 J O U R N A LO F S H E N YA NG C O E L LG E O F P H AR MAC J Ya n . 1 9 9 2S um 50
小果唐松草中三种生物碱的含 t测定
王 晓霞 郭 允珍
中成药分析教研室
摘 典 本文应用反相高效液相色谱法和双波长薄层扫描法首次对小果唐松草中的白蓬 西 米
定 ( tha l i e sim i d i n e) , 氧化紫番荔枝碱 ( o x o p u r p u r e i n e )和海罄粟碱 ( g l a u e i n e )进行了含量测定 , 所
测结果分别为。 . 18 , 。 . 0 4和。 . 09 % . 经假设检验可知两种测定方法无显著性异差 。
关. 润 小果唐松草 , 反相高效液相色谱 , 双波长薄层扫描 , 白蓬西米定 , 氧化紫番荔枝碱 ,
海鹅粟碱
中日分类号 R 9 1 4 . 1
小果唐松草 ( T h ia i ct r u m m icl’ go y n u m L ce o y . ) ` ” 是我国分布较广的一种抗癌资源植
物 。 其总生物碱对 5 1 80 肉瘤有明显的抑制作用 ,而其中所含的白蓬西米定 ( t h al j cs i而 id n e) ,
氧化紫番荔枝碱 (o x叩 ur uP r ie n e) 及海罄粟碱 (以au c in e) 经体外抗癌实验表明 , 均对 51 80 肉
瘤细胞有不 同程度的杀伤作用 。 为充分开发利用该药用植物资源 , 本文应用反相高效液相色
谱法和双波长薄层扫描法对上述三种生物碱进行了含量测定 。
实验部分
1
.
1 反相离效液相色讼法
1
。
1
.
1 仪 器与试 剂 日立 6 35 A型液相色谱仪 ; 日立 2 0 0 ~ 1 0型 U V 一 V is 分光光度仪 , 不锈钢
柱 ` x 1 5 om m , 填充剂 : 3 0 5 6 一 o D s , 5 o m , 标准品自制 , 熔点合格 , 在本文所测条件下 ,
高效液相色谱只显示一个峰 , 所用溶剂均为分析纯 。
1
.
1
。
2 色讲条件 固定相用 3 0 5 6一 O D S , 流动相采用乙睛 一水 (4 O: 60) , p H = 3 , 检测 波 长
Z s Z n m
, 流动相流速 o . sm l /m in , 柱温 : 室温 , 柱压 一s o k夕 / e m Z , 纸速 : 2 . 5。 。 /而 n . 标
准品及样品的H P L C图谱见图 1 , 2 .
1
.
1
.
3 标准曲线 精密称定干燥至恒重的白蓬西米定 (简称 T ) 0 . 0 050 9 , 氧化紫番荔枝碱 (简
称 0 ) 。 . 。。“ g海密粟碱 (简称 G ) 0 . 。。48 9 . 分别用甲醇溶解 , 定容于 10 m l 容量瓶中 , 分别
以 5 , 1 0 , 1 5 , 2 0 , 2 5川进样 , 以标准品卜g数为横坐标 , 峰面积为纵坐标作图得一直线 。 回
归方程分别为 : Y T = 0 . 0 0 5 2 + 1 . o o 6 4X , r = 0 . 9 9 7 ; Y 。 = 一 o . x 3 6 + 3 . g z s 3 x , r = 0 . 9 9 5 ,
Y a = 一 0 . 2 6 4 + 2 . 2 6 4 4x , r = 0 . 9 9 8 -
1
.
1
.
4 精密度实验 按拟定色谱条件连续进样 6 次 , 每次进样 2 5闪 , 分别侧定 , 根据峰面积
( A )和保留时间 (t )计算标准差和变异系数 , 测定结果如表 1 。
收稿日期 : z。 。 o一 o。一 0 1
DOI : 10. 14066 /j . cnki . cn21 -1349 /r . 1992. 01. 007
1期 已晓霞等 : 小果唐松草中三种生物碱的含量m] J定
G
.曰妇曰州川
一八 、 ~ ~
。沙|l、又
以日从川.
卜一 . 一一一5 }Q
时 lh J(m in )
5 ;
l ;士l、 , J ( m i n )
圈 1 标准品混合物的 H P L C 圈进 圈 2 样品的H P L C圈进
1
。
1
.
5 样品的含量测 定 精密称取 O。 5 9根粉
5 份 , 分别置于具塞磨 口三角瓶中 , 准确加
入氨水饱和的苯 10 m l , 密塞放置 4 8h , 并不
时摇动 。 分别精密吸取上清液 5 m l于小三角
瓶中 , 挥干 溶媒 , 准确加入 l m l甲醇 , 制成
供试液 。 进样 2 5川 , 5 次测定结果的平均值
见表 2 。
1
。
1
。
6 加样 回收率测 定 精密称取 0 . 5 9根粉
5 份分别置具塞磨口三角瓶中 , 分别准确加
衰 2 反相 HP LC法对三种生物喊的含 l 浦定结果
生 物 碱 T O G
裹 1 精密度实脸结果
标 准 品 项 目
A
S x CV (% )
2 5 。 3 5
4
。
1 3
9 7
。
7 9
0
。
19 0 0
。
8
0
。
0 46 1
。
0
O
。
9 1 7 0
。
9
8
。
3 8
5 5
。
8 6
0
。
0 4 2 0 。 5
0
。
5 9 6 1 。 0
0
。
0 5 9 1
。
9
A
.
裹 3
m m
Z t , m i n
反相 H P LC法进行加样回收率实脸结.
生 物 城
氏
xS
C V %
0
。
1 84
。 4 8 X 1 0 一 3
O 。 8 1
0
。
0 4 0
1 。 14 x 10一 3
2 。 8 5
0
。
0 9 3
。
9 2 X 10 一 3
2
。
0 7
R%
5 X
9 9
`
3 2 9 9
。
9 3
C V % : ;
’ l 。 6 8 4
I
。
6 9
9 8
。
5 6
1
。
4 8 4
1
。
5 1
入三种生物碱的标准品 T : o . s m g , O : O。 Zm g , G : o . s m g , 提取方法同前 。 5 次测定结果
平均值如表 3 .
1
.
2 双波长薄层扫描法
1
.
2
.
1 仪 器与试 剂 岛津 C S 一 9 10 双波长薄层扫描仪 。 标准品同前 , 所用溶剂及试剂均为分
析纯 。
1
.
2
.
2 供试液的制备 精密称取根粉 29 4 份 , 分别置具塞三角瓶中 , 加氨水饱合的苯 20 m l ,
冷浸 4 8 h . 过滤 、 浓缩 , 用甲醇定容于 5 m l 容量瓶中。 标准品溶液的浓度分别为 T : 1 . 2
tn g / m l
,
O
: 0
. ` 4 m g , ,一n l , G : 0 . 4 8二夕 / n l l .
]
.
2
.
3 薄层层析 条件 制板 : 硅胶 G F Z 。 ` 8 9 , 加 0 . 5 % C M C 一 N a水溶液 2 5 1川 , 研磨均匀 , 铺板
( Z o e m x 2 0 cm ) 自然干燥 , 1 1 0℃活化 0 . 5h , 展距约 1 3 e ,n . 展开剂 : 甲苯一 丙酮 一 氨水 ( 1 0 : 5 : o一 ) .
2 4沈 阳 药 学 院 学 报 9卷
1
.
2
。
4扫描 条
速度 : 2 0 。 川 /
件.
11l l n
1
。
2. 5标 准曲线
同一块薄层板上 ,
紫外反射式锯齿扫描 。 入R = 4 0 0 n m , 入, = Zs Zn m , 纸速 10阴 fn / m i n . 扫描
. 灵敏度 x 1 . 狭缝 : 1 . 2 5m m x l . 2 5m m ·
用微量定量毛细管分别吸取三种生物碳的标准溶液 2 , 4 , 6 , 8 , 10川点于
按上述条件展开后 , 测定
峰面积积分值 , 绘制标准曲线 。 回归方程分
别为 :
Y
T = 一 0 . 2 6 6 7 + l . 6 5 7 1 x r = 0 . 9 9 8
Y o = 0
。
3 3 3 4 + 0
.
4 2 1 4 x r = 0
.
9 9 3
Y 。 = 一 0 . 0 6 6 7 + 1 . 0 2 1 4 x r = 0 . 9 9 9
]
。
2
.
6 样品 的含童浏定 采用标准品一点对
照法 一 , 在同一块板上 , 标准品各点 3 个点 ,
样品点 3 个点 , 调 整点样量使标准品与所测
衰 4 双浪长薄层扫描法含 t 洲定结 .
. 3
衰 5
样吕的劝一扫描困奋
回收率实脸结 .
生 . 旅 T 生 物 城 T
虱
xS
C V %
O。 1 8 6
1
。
6 3 x 10一 3
0 。 8 8
0 。 0 4 1
0 。 9 6 x 10一 3
2 一 4 0
0
。
0 9 4
1
。
2 6 x 10一 3
1
。
3 4
R%
5义
9 8
.
8 9 9 8
.
9 1 9 9
_
5 5
CV % ::::
I
。
3 8
1
一
4 0 ::::
生物碱含量基本相同 , 展开后分别测定吸收曲线 , 并根据峰面积积分值求得三种生物碱在生
药中的百分含量如表 4 , 样品的薄层扫描图谱如图 3 .
1
.
2
.
7 加样回收率测定 供试液采用反相 H P L C法的供试液 , 按样品测定方法 , 测得结果如
表 5 。
1
.
3 两种洲定方法的比较
为了说明含量测定所用方法的可靠性和结果的准确性 , 我们对两种方法所测的生物碱含
量结果进行了比较 , 见表 6 , 并对二种方法进行了假设检验 , 结果见表 7 。
假设检验 【2 ’
F = S ,` S , ` 5 1 > 5 2 ’ S总 =丫 云 ( x i 一 x : ) “ + 名 ( x s 一 x : )n 一 + n : 一 2
_ x 一 X Z
S总 罕 n一 n Zn l + n Z
衰 6 两种方法所派生物玻含 t 的比较
方 法 反相高效液相色谱 法 双波长薄层妇摘法
生 钧 孩 T 0 C T O C
含 t 平均值
夕
N
0。 18 4
2
。
19 x 10一 6
0 . 0 4 0
1
。
3 O x 1 0一 6
O
。
0 9 3
3
。
6 9 x 10一 6
O
。
18 6
2
。
66 x 1 0一 6
0。 0 4 1
0
。
9 6 X 1 0一 6
0。 0 0 4
1
。
S O x 1 0一 6
衰 了
检脸项 目 F i 一 。 。 0 5
健设位脸结 .
结 果 t i一 。 。 0 5 结 果
1
。
2 1
1
。
4 1
2 。 32
6。 6 9
6
。
5 9
6。 6 9
F < F
i 一 0
.
0:
F < F
l一 。 。 o:
F < F
i 一 。 。 0 5
1
。
9 1
l 。 4 3
0。 日 4
2 。 8 6
2。 8 6
2
。
8 6
t < t l
一 。 。 0 ,
t < t l
一 0 . 0 5
t <
i 一 。 。 o -
OTG
l }叼 王晓霞等 :小果店松草中三种生物碱的含址测定
由以 上数据检验可知二种含量测定方法无显著差异 。
2 结果与讨论
a
. 木文通过反相 H L P C法和双波长薄层扫描法对小果唐松 一草根 . 1, 二二种生物碱 自蓬西
米定 、 氧化紫番荔枝碱和海婴粟碱进行了含量测定 , 结果表明两种测定方法所测结果基木一
致 , 但前者较后者的重现性好 , 准确度高 , 操作简便 , 所测含量分别为 0 . 1 8 , 0 . 04 , 0 . 09 % .
b
. 高效液相色谱法采用正相柱效果不佳 , 后改用反相柱 , 流动相调 p H = 3 时效果 较
理想 , 此条件不仅可使待测定的三种生物碱彼此分离 , 且使杂质 与生物碱 分开 , 样 .钻的保留
时间少 , 峰形对称 。
c
. 双波长薄层扫描法采用反射式比透射 式效果要好 , 且所测结果稳定 , 准确 。
致谢 : 本室姚乃贤老师给予帮助。
今 考 文 献
中国科学院植物研究所等 。 中国植物志 , 北 京 : 科学 出版社 , 1 9 了幻 2 7 ; 5 0 2
2 罗旭 . 化学统计学基础 . 沈阳 : 辽宁人民出版社 , 1 9 8 6 , 1 37 ~ 16 了
D E T E RM IN A T IO N O F T H E C O N T E N T S O F T HR E E A L K A L O ID S IN
T H E R 0 0 T S O F T HA L IC T R U M M IC RO G Y N U M L E C O Y
.
W a n g X i a ox i a G u o Y un
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T h e e o n t e n t s o f t h a l i e s i m i d in
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, o x o P u l
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.
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.
0 4%
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0 9 % ,
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K e y w o r d s T h a l i e枷 u m m i e 一gO y n u m L e e o y . ; R创 e r s e d 一 Ph as e H P L C , D o u b l e
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