全 文 ：China Pharmacy 2012 Vol. 23 No. 7 中国药房 2012年第23卷第7期
糙叶败酱药材中异白花败酱醇的定性定量分析
姚振宇 1，2＊，石晓峰 2 #，刘东彦 2，马趣环 2（1.兰州理工大学生命科学与工程学院，兰州 730050；2.甘肃省医学科
学研究院，兰州 730050）
中图分类号 R284.1；R927.2 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2012）07-0644-03
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.07.25
摘 要 目的：建立糙叶败酱药材中异白花败酱醇的定性和定量分析方法。方法：采用薄层色谱（TLC）法定性鉴别糙叶败酱药材
中的异白花败酱醇；采用反相高效液相色谱法测定其含量，色谱柱为Agilent Eclipse plus C18（250 mm×4.6 mm，5 µm），流动相为乙
腈-磷酸水溶液（pH2.5）＝7 ∶ 93，流速为1.0 mL·min－1，检测波长为210 nm，柱温为30℃。结果：糙叶败酱药材中异白花败酱醇的
TLC鉴别特征明显，专属性好；异白花败酱醇的进样浓度在 0.2～1.2 mg·mL－1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r＝
0.999 7），平均加样回收率为98.8％，RSD＝2.84％（n＝9）。结论：所建分析方法准确、可靠，可用于糙叶败酱的质量控制。
关键词 糙叶败酱；异白花败酱醇；薄层色谱法；高效液相色谱法
Qualitative and Quantitative Analysis of Isovillosol in Patrinia scabra
YAO Zhen-yu（School of Life Science and Engineering，Lanzhou University of Technology，Lanzhou 730050，
China）
YAO Zhen-yu，SHI Xiao-feng，LIU Dong-yan，MA Qu-huan（Gansu Academy of Medical Sciences，Lanzhou
730050，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the method for qualitative and quantitative analysis of isovillosol in Patrinia scabra.
METHODS：Isovillsol in Patrinia scabra was identified by TLC. The content of isovillosol was determined by RP-HPLC. The de-
termination was performed on Agilent Eclipse plus C18（250 mm×4.6 mm，5 µm）column with mobile phase consisted of acetoni-
trile-phosphoric acid solution（pH＝2.5，7 ∶ 93）at the flow rate of 1.0 mL·min－1. The detection wavelength was set at 210 nm and
column temperature was 30 ℃. RESULTS：Isovillosol has an obvious character in the result of TLC. There was a good linear rela-
tionship in the range of 0.2～1.2 mg·mL－ 1（r＝0.999 7）. The average recoveries were 98.8％（RSD＝2.84％，n＝9）. CONCLU-
SION：The established method is accurate and reliable. It is suitable for the quality control of P. scabra.
KEY WORDS Patrinia scabra；Isovillosol；TLC；HPLC
＊硕士研究生。研究方向：药物分析与植物化学。E-mail：yz-
hy20027@yahoo.com.cn
#通讯作者：主任药师，教授，硕士研究生导师。研究方向：天然
药物化学及中药制剂。电话：0931-2614521-6039。E-mail：shixiao-
feng2005@sina.com
糙叶败酱Patrinia scabra Bunge为败酱科败酱属植物，主
要分布于河北、山西和甘肃等地，药用其根茎及全草，常与其
同属植物异叶败酱P. heterophylla Bge.混用，因其治疗崩中带
下疗效显著，有“起死回生之功效”，故又得名“墓头回”。糙叶
败酱具有清热解毒、祛瘀排脓、活血化瘀、镇静安神等功效，
民间用其治疗伤寒、温症、跌打损伤、妇女崩中、赤白带下等
证[1]。近年来，国内对糙叶败酱的药理作用进行了较广泛的研
究，发现其具有抑菌、抗肿瘤、止血、免疫调节及镇静等多方面
的药理作用 [2]。其化学成分主要有挥发油、环烯醚萜及其苷
类、苯丙素类和黄酮类化合物等[3]。文献报道[4，5]，糙叶败酱环
烯醚萜苷元和总环烯醚萜苷元具有较好的抗癌作用和免疫调
节功能，有进一步开发研究价值。为此，笔者分别采用薄层色
谱（TLC）法和反相高效液相色谱（RP-HPLC）法对糙叶败酱中
环烯醚萜类成分异白花败酱醇（Isovillosol）进行了定性和定量
分析。
1 仪器与试药
1100 HPLC仪，含四元梯度泵、可变波长扫描紫外检测器、
1100化学工作站、标准手动进样器（美国 Agilent公司）；
AE-260分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；R-200旋转蒸发
器（瑞士Büchi公司）。
糙叶败酱的根及根茎于 2006年采自甘肃兰州市兴隆山
区，由甘肃省医学科学研究院石长栓研究员鉴定为真品，标本
存放于甘肃省医学科学研究院标本室；异白花败酱醇标准品
（笔者自制，由HPLC归一化法测得纯度＞98％，并应用各种现
代波谱技术（X-ray、IR、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT）对
其化学结构进行了化学表征）；GF254薄层硅胶板（石嘴山市同
创化工有限公司）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为
分析纯。
2 方法与结果
2.1 药材的脱脂处理
称取粉碎过筛（40目）的糙叶败酱药材粉末5.0 g，共3批，
分别加入 15倍量石油醚回流提取 2次（2、1 h），过滤，药渣于
50℃干燥至恒重，备用。
2.2 定性鉴别
称取脱脂药材粉末1 g，加甲醇10 mL，加热回流提取2 h，
放冷，过滤，滤液作为供试品溶液。另取异白花败酱醇标准
品，加甲醇制成每 1 mL含 1 mg的溶液，作为标准品溶液。照
TLC法 [6]试验，分别吸取上述 2种溶液各 1 µL，点于同一硅胶
GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇（4 ∶3 ∶1）为展开剂，
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展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇
试液，105 ℃加热至斑点显色清晰。
结果，供试品色谱中，在与标准品色
谱相应位置上显紫红色的斑点。糙
叶败酱脱脂药材的TLC见图1。
2.3 含量测定
2.3.1 色谱条件 色谱柱：Agilent
Eclipse plus C18（250 mm ×4.6 mm，5
µm）；流动相：乙腈 -磷酸水溶液
（pH2.5）＝7 ∶ 93；柱温：30 ℃；流速：
1.0 mL·min－1；检测波长：210 nm。
2.3.2 供试品溶液的制备 精密称
取 0.5 g脱脂药材，加入 25 mL甲醇，
称重，回流提取 2 h，用甲醇补充失
重，过滤，取滤液10 mL，蒸干，用流动
相充分溶解并定容于 10 mL容量瓶
中，经0.45 µm滤膜过滤，取续滤液作
为供试品溶液。
2.3.3 标准品贮备液的制备 精密称取异白花败酱醇标准品
10 mg，用流动相溶解并定容于5 mL容量瓶中，配制成浓度为
2 mg·mL－1的标准品贮备液，即得。
2.3.4 系统适用性试验 分别精密吸取浓度为 0.4 mg·mL－1
的标准品溶液和“2.3.2”项下供试品溶液各20 µL，按“2.3.1”项
下色谱条件测定。结果，标准品与供试品中异白花败酱醇的
保留时间均为 8.4 min，与其相邻色谱峰的分离度R＞1.5。理
论板数以异白花败酱醇峰计算应不低于5 000。色谱见图2。
2.3.5 线性关系考察 分别精密吸取上述标准品贮备液100、
200、300、400、500、600 µL，置于 1 mL容量瓶中，用流动相定
容，配成浓度分别为 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mg·mL－1的系列
标准品溶液，按上述色谱条件分别进样20 µL。以对照品浓度
（X，mg·mL－1）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，进行线
性回归，得回归方程为 Y＝0.573 8X－0.640 2（r＝0.999 7，n＝
6）。结果表明，异白花败酱醇的进样浓度在0.2～1.2 mg·mL－1
范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。
2.3.6 精密度试验 精密吸取 0.6 mg·mL－1的标准品溶液 20
µL，连续进样6次，测定异白花败酱醇的峰面积。结果，RSD＝
0.67％（n＝6），表明仪器精密度良好。
2.3.7 稳定性试验 取“2.3.2”项下供试品溶液，室温下放置
0、2、4、6、8、12、24 h后分别进样20 µL，测定异白花败酱醇的峰
面积。结果，RSD＝1.97％（n＝7），表明供试品溶液在室温下
放置24 h内基本稳定。
2.3.8 重复性试验 取同一批样品粉末适量，按“2.3.2”项下
方法平行制备 6份供试品溶液，分别进样 20 µL，测定。结果，
样品中异白花败酱醇的平均含量为 19.2 mg，RSD＝1.55％
（n＝6），表明该方法重复性良好。
2.3.9 加样回收率试验 精密称定 9份脱脂糙叶败酱药材各
0.25 g，分别加入异白花败酱醇标准品适量，按“2.3.2”项下方
法制备供试品溶液，分别进样 20 µL，按上述色谱条件测定含
量，计算加样回收率，结果见表1。
表1 加样回收率试验结果（n＝9）
Tab 1 Result of recovery test（n＝9）
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
称样量/g
0.249 7
0.250 2
0.249 8
0.249 8
0.250 5
0.249 9
0.249 6
0.250 3
0.250 1
样品含量/mg
9.59
9.61
9.59
9.59
9.62
9.60
9.58
9.61
9.60
加入量/mg
12.0
12.0
12.0
10.0
10.0
10.0
8.0
8.0
8.0
测得量/mg
21.7
21.2
21.3
19.4
19.5
19.2
18.0
17.4
17.5
回收率/％
100.9
96.6
97.6
98.1
98.8
96.0
105.3
97.4
98.8
x/％
98.8
RSD/％
2.84
2.3.10 样品含量测定 精密称取 3批脱脂糙叶败酱药材各
0.5 g，分别按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条
件测定样品中异白花败酱醇的含量，结果见表2。
表2 样品中异白花败酱醇含量测定结果（n＝3）
Tab 2 Results of content determination of isovillosol in sam-
ples（n＝3）
编号
1
2
3
含量/mg
18.7
19.3
18.3
x/mg
18.8
RSD/％
1.80
3 讨论
据报道，糙叶败酱环烯醚萜苷元PS-1是抗肿瘤的活性成分
之一，可显著抑制人前列腺癌细胞株DU145和PC3的生长[7]。此
外，环烯醚萜苷元PS-1、BJ3401可显著抑制小鼠结肠癌细胞株
C26的生长，总环烯醚萜苷元可显著减轻荷瘤鼠瘤重，其中高
剂量组灌胃总环烯醚萜苷元 800 mg·kg－1·d－1，连续给药 10 d
后抑瘤率可达41.4％；体外细胞试验和荷瘤小鼠实验均表明糙
叶败酱中环烯醚萜苷元具有抗结肠癌作用[4]。糙叶败酱中总
环烯醚萜苷元能显著提高小鼠胸腺指数和脾指数及伴刀豆球
蛋白A（Con A）诱导的脾淋巴细胞增殖，促进小鼠血清溶血素
水平，提高小鼠NK细胞活性及腹腔巨噬细胞的吞噬活性，表
明糙叶败酱中总环烯醚萜苷元能明显提高小鼠机体的免疫功
能[5]。因此，对糙叶败酱中环烯醚萜类化合物进行深入研究具
有重要意义。
Kounnu I等 [8]曾在糙叶败酱根中分离得到黄花败酱醇
（Patriscabrol）和异黄花败酱醇（Isopatriscabrol）；笔者从该植物
根中分离得到白花败酱醇（Villosol）和异白花败酱醇
（Isovillosol），这些化合物都是同分异构体，且为手性异构体。
文献报道[9]白花败酱醇具有一定的抗肿瘤活性，故有必要对其
同分异构体进行研究。
在试验中，为了去除杂质峰对目标峰的干扰，笔者曾尝试
将药材进行甲醇提取后，依次用石油醚和氯仿萃取，但分离效
果不理想。为了提高目标峰的分离效果及柱效，最后确定用
石油醚回流脱脂后的药材作为异白花败酱醇的提取材料。
异白花败酱醇在 210 nm波长处有最大吸收，因此选择
210 nm作为检测波长。试验中分别考察了甲醇-水和乙腈-水
流动相系统，以乙腈-水作流动相效果较好。经过反复试验，发
现在流动相中加入磷酸能够显著改善分离效果，故考察了乙
腈和不同浓度的磷酸水溶液作为流动相对色谱分离的效果，
图 1 糙叶败酱脱脂药
材的TLC
1.异白花败酱醇标准品；
2～5.供试品
Fig 1 TLC of defatted
P. scabra
1.isovillosol standard subst-
ancl；2～5. test samples
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
A
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
B
图2 高效液相色谱图
A.异白花败酱醇标准品；B.供试品
Fig 2 HPLC chromatograms
A. isovillosol standard substance；B. test sample
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最后确定以乙腈-磷酸水溶液（pH2.5）作为流动相，结果较满
意。
本试验建立了糙叶败酱药材中异白花败酱醇的定性和定
量分析方法，其中TLC鉴别特征明显、专属性好；RP-HPLC法
准确、可靠，具有很好的重复性和稳定性。可见，所建方法可
作为糙叶败酱药材的质量控制手段之一。
参考文献
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[ 9 ] 肖崇厚.中药化学[M].上海：上海科学技术出版社，2001：
438.
（收稿日期：2011-09-22 修回日期：2011-12-26）
＊主任药师，副教授，硕士。研究方向：药学的教学与科研。
E-mail：cxb04032308@sina.com
RP-HPLC法测定云香十五味丸中栀子苷的含量
陈晓北＊，邹继红（赤峰学院医学院，内蒙古赤峰 024000）
中图分类号 R283.64；R927.2 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2012）07-0646-03
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.07.26
摘 要 目的：建立测定云香十五味丸中栀子苷含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Agilent Eclipse
XDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为水-乙腈（85 ∶ 15），流速为1 mL·min－1，检测波长为238 nm。结果：栀子苷的进样量在
0.784～3.920 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r＝0.999 8）；平均加样回收率为99.3％，RSD＝1.0％（n＝9）。结论：本方
法简便、快速、准确，适用于云香十五味丸中栀子苷的质量控制。
关键词 反相高效液相色谱法；云香十五味丸；栀子苷；含量测定
Content Determination of Gardenoside in Yunxiang Shiwu Pills by RP-HPLC
CHEN Xiao-bei，ZOU Ji-hong（Medical College of Chifeng University，Inner Mongolia Chifeng 024000，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of gardenoside in Yunxiang shiwu pills. METH-
ODS：RP-HPLC method was adopted. The separation was performed on Agilent Eclipse XDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）column
with mobile phase consisted of water-acetonitrile（85 ∶ 15）at the flow rate of 1 mL·min－1. The detection wavelength was set at 238
nm. RESULTS：The linear range was 0.784～3.920 μg（r＝0.999 8）with an average recovery of 99.3％（RSD＝1.0％，n＝9）. CON-
CLUSION：The method is simple，quick，accurate，and is suitable for the quality control of gardenoside in Yunxiang shiwu pills.
KEY WORDS RP-HPLC；Yunxiang shiwu pills；Gardenoside；Content determination
􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔􀤔
云香十五味丸又名嘎日迪-15，是根据蒙医药学配方理论
及现代药理研究方法研制而成的传统名方，主治风湿性关节
炎、类风湿性关节炎、“巴木”病、游痛症、疮疡、梅毒等，是治疗
“协日乌素”病的良药。为了有效控制其质量，笔者参考有关
文献[1，2]，采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法对云香十五味
丸中的栀子苷含量进行测定，操作简单而省时，结果准确、可
信，精密度和重复性较好。
1 仪器与试药
1200 HPLC系统（美国安捷伦公司）；KQ-250E超声波清洗
器（昆山市超声仪器有限公司）；AE240电子天平（瑞士梅特勒-
托利多公司）；UV-765紫外-可见分光光度计（上海精密科学仪
器有限公司）。
栀子苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110748-
200512）；乙腈为色谱纯，甲醇为分析纯，水为娃哈哈纯净水；
云香十五味丸（内蒙古库伦蒙药厂，批号：100302、100305、
100308）；制备阴性样品所需药材由内蒙古赤峰市中蒙医院提
供，经赤峰市药品检验所鉴定为真品。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；
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