全 文 ：衡，从而有效抑制免疫反应对神经功能的损伤，抑制 EAE 的进
展，很有希望进一步研制成为一种颇有前途的抗 MS新药。
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收稿日期:2012-03-22; 修订日期:2012-07-20
基金项目:国家自然科学基金面上项目(No． 81173645) ;国家“重大新药创制”科技重大专项“十二五”课题(No． 2012ZX09301 － 002 － 001)
作者简介:宋 婷(1987-) ，女(汉族) ，黑龙江绥化人，现为黑龙江中医药大学硕士研究生，主要从事药物分析研究工作．
* 通讯作者简介:陈 曦(1973-) ，男(汉族) ，黑龙江哈尔滨人，现任中国医学科学院协和医科大学药用植物研究所副研究员，博士学位，主要从事中药
药理学研究工作．
白花败酱草体外抗肿瘤活性部位筛选
宋 婷1，2，孙 晖2，路 娟1，李凤金1，2，张颖智1，2，陈 曦1*
(1．中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究所，北京 100094;
2．黑龙江中医药大学 药学院，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘要:目的 建立白花败酱草活性部位的提取方法，初步筛选出白花败酱草抗肿瘤活性部位。方法 采用四甲基偶氮唑蓝
(MTT)比色法。结果 白花败酱草粗提物能够显著诱导 Hela 和 Mcf － 7 细胞发生凋亡;80%乙醇树脂部位对 Hela 、Mcf －
7 和 Hct － 8 细胞具有显著的抑制作用，IC50值分别为 11． 90，12． 55，15． 61 mg·L
－1，对 EJ细胞的抑制作用次之，IC50值为
65． 32 mg·L －1，其他部位的抑制作用较弱或无抑制作用;紫外显色法测得 80%乙醇树脂部位中总皂苷含量是 61． 81%。
结论 80%乙醇树脂部位主要成分是皂苷，其具有明显的体外抗肿瘤作用。
关键词:白花败酱草; 总皂苷; 抗肿瘤; 活性筛选
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 10． 012
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2012)10-2410-03
The Anti － tumor Effect of the Extracts of Patrinia villosa Juss
SONG Ting1，2，SUN Hui2，LU Juan1，LI Feng-jin1，2，ZHANG Ying-zhi1，2，CHEN Xi1*
(1． Institute of Medicinal Plant Development，Chinese Academy of Medical Sciences． Beijing，100094，China;
2． College of Pharmacology，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China)
Abstract:Objective To estimate the anti － tumor activity of the extracts of Patrinia villosa Juss． Methods MTT assay was ap-
plied to screen the anti － tumor effect of the extracts of Patrinia villosa Juss on different tumor cell lines in vitro． Results Different
extracts had various inhibitory effects on different tumor cell lines． Hela，Mcf － 7，EJ and Hct － 8 cell lines had sensibility to the
crude extracts of Patrinia villosa Juss． 80% alcohol elution from mastic part had remarkable anti － tumor activity in vitro． The half
inhibition concentrations were 9． 29，10． 21 and 10． 33 mg·L －1 to Hela，Mcf － 7 and EJ of human respectively，and other parts of
elution mastic part had little inhibitory effect on these cell lines． The contents of total saponins and total flavonoids of 80% alcohol
－ soluble part were 61． 81% and 8． 69% respectively． Conclusion 80% alcohol － soluble part，which is considered as the active
parts of Patrinia villosa Juss，has considerable anti － tumor effect．
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时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 10 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 10
Key words:Patrinia villosa Juss; Total saponins; Anti － tumor activity; Active screening
败酱草始载于《神农本草经》，分布广泛并具有清热利湿、活
血化瘀、解毒排脓等功效［1，2］。白花败酱出自《本草纲目》［3］，系
败酱科败酱属植物白花败酱 Patrinia villosa Juss． 的干燥全草，
1977 年版《中国药典》将其收载为正品败酱草［4］。近年来，败酱
草的抗肿瘤作用日益引起关注，但对其抗肿瘤活性部位的实验数
据并不充分，结论尚不统一。作者通过白花败酱草粗提物及大孔
树脂分离各部位对体外肿瘤细胞抑制作用的研究，初步筛选并判
断白花败酱草的抗肿瘤活性部位。
1 材料
1． 1 药材 白花败酱草:购自于河北安国县药材市场(批号
20100823) ，经黑龙江中医药大学生药学教研室孟祥才副教授鉴
定为白花败酱草正品。
1． 2 试剂与仪器 RPM I 1640 培养基干粉购自 Gibco公司、胎牛
血清购自天津灏洋生物制品公司;噻唑蓝(MTT)购自 Sigma 公
司;芦丁对照品(上海融禾医药科技发展有限公司，批号:
101030) ;齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号:
110709 － 200505) ;NAPCO公司 model5410 型 CO2 培养箱;BioTek
公司 MQX200 型微孔板扫描酶标仪;北京普析通用仪器有限责任
公司 TU － 1901 型紫外可见分光光度计;梅特勒托利多公司 MET
－ TLER AE240 型电子分析天平;AB － 8 型大孔吸附树脂(沧州
宝恩吸附材料科技有限公司)。
1． 3 细胞株与细胞培养 人宫颈癌细胞 Hela 细胞株、人乳腺癌
细胞 Mcf － 7 细胞株、人肝癌细胞 Bel － 7402 细胞株、人膀胱癌细
胞 EJ细胞株和人结肠癌细胞 Hct － 8 细胞株均购自于中国医学
科学院基础医学研究所细胞中心。在含 10%胎牛血清的 RP-
MI1640 培养液、饱和湿度、饱和温度为 37 ℃，CO2 浓度为 5%的
培养箱中培养。
2 方法
2． 1 提取分离及各部位总皂苷和总黄酮含量测定 将白花败酱
草干燥全草截断约 0． 5 cm 长度后，称取 100 g 药材，用 10 倍量
70%乙醇水加热回流 1． 5 h，共 2 次。合并提取液减压回收溶剂
后，得浸膏，冻干后得粗提物冻干粉 7． 01 g。在层析柱(Φ4cm ×
H 30cm)中装入经过预处理的 300 g AB － 8 型大孔吸附树脂，干
法上样。依次用 5 倍柱体积的水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇
和 80%乙醇洗脱，分别减压浓缩，冻干后得各部位。根据徐洁
昕［5，6］的实验方法对白花败酱草的粗提物及 5 个树脂部位的总
皂苷和总黄酮进行含量测定。
2． 2 白花败酱草提取物对肿瘤细胞的抑制作用
2． 2． 1 样品溶液的制备 精密称取白花败酱草粗提取物 10 mg，
加磷酸盐缓冲液(PBS)溶解至 5g·L －1，用含 10%灭活新生小牛
血清 RAPM1640 培养基将其稀释成 10，50，250，1250 mg·L －1溶
液，过滤除菌，4℃保存备用［7］。
精密称取白花败酱草各部位 10 mg，用 DMSO 溶解，用培养
液稀释至 10 ml，制成 1 g·L －1溶液。再用培养液稀释成 2，10，
50，250 mg·L －1溶液。DMSO最终浓度小于 0． 05%，在该浓度下
DMSO对细胞的生长无影响［8］。过滤除菌，4℃保存备用。
精密称取 H2O部位 10 mg，用培养液溶解并稀释至 10 ml，制
成 1 g·L －1溶液。再用培养液稀释，分别配制成 2，10，50，250 mg
·L －1溶液，过滤除菌，4℃保存备用。
2． 2． 2 细胞增殖抑制实验 采用四甲基偶氮唑蓝比色法。选取
对数生长期的 Hela 、Mcf － 7、Bel － 7402、EJ、和 Hct － 8 细胞，调整
细胞浓度至 3 × 104 个 /ml，分别接种于 96 孔板上，每孔 100 μl。
培养 24 h后加药，对照调零组加入 100 μl培养基作本底，实验组
分为空白对照组和受试药组，每组设三个复孔。受试药组药物终
浓度为 50 μg·ml －1，终体积为 200 μl，空白对照组加入等体积
RAPM1640 不完全培养基继续培养 48 h。培养结束前 4 h，每孔
加入 20μl浓度为 5 mg·L －1的 MTT。培养结束后，小心吸弃培
养基，每孔加入 DMSO(二甲基亚砜)150μl，轻轻震荡 10min 后，
用酶标仪于 570 nm处测定吸光度(A)值，测定时需减去空白对
照的 A值。细胞生长抑制率(%)=(1 － A实验组 / A对照组)× 100%
3 结果
3． 1 粗提物及各部位中总皂苷和总黄酮的含量测定 结果见
表 1。
表 1 样品中总黄酮和总皂苷的含量测定结果 %
样品名称 总皂苷含量 总黄酮含量
80%乙醇树脂部位 61． 81 8． 69
60%乙醇树脂部位 28． 68 12． 84
40%乙醇树脂部位 18． 44 51． 61
20%乙醇树脂部位 5． 38 7． 67
H2O树脂部位 7． 62 2． 68
粗提物 19． 38 38． 39
3． 2 白花败酱草粗提物对不同肿瘤细胞的抑制作用 对于白花
败酱草粗提物，Mcf － 7 细胞最敏感，IC50值达 22 mg·L
－1。Hela
细胞、Hct － 8 细胞和 EJ细胞次之，Bel － 7204 细胞较差。结果见
表 2 。
表 2 粗提物对不同细胞的抑制作用
肿瘤细胞株 剂量 C /mg·L －1 抑制率(%) IC50 /mg·L －1
Hela 10 10． 61 57
50 32． 23
250 88． 34
1250 99． 24
Mcf － 7 10 16． 20 22
50 89． 29
250 90． 78
1250 95． 95
Bel － 7204 10 6． 54 628
50 9． 13
250 45． 67
1250 58． 65
EJ 10 4． 65 248
50 44． 93
250 55． 11
1250 67． 21
Hct － 8 10 2． 54 89
50 17． 03
250 78． 90
1250 99． 67
3． 3 不同部位对四种肿瘤细胞的抑制作用 浓度为 250 mg·
L －1的 80%乙醇树脂部位对 Hela、MCF － 7、HCT － 8 和 EJ细胞的
抑制率都达到 80%以上，IC50值均小于 100 mg·L
－1。20%乙醇
树脂部位和 H2O树脂部位对 Hela、MCF － 7 和 HCT － 8 细胞的抑
制率很弱，IC50值均大于 250 mg·L
－1。由此可知白花败酱草的
抗肿瘤活性主要集中在 80%树脂部位。结果见表 3。
4 讨论
近年来研究表明败酱属植物具有一定的抗肿瘤作用，其含有
的黄酮醇、齐墩果酸、多糖、异香豆素糖苷和挥发油等活性成分在
体外能抑制人宫颈癌 Hela 细胞增殖［9］。但是，目前针对白花败
酱草的抗肿瘤活性部位说法不一，其皂苷部位、黄酮部位以及水
提液部位已被证实具有一定的药理活性。如张永强等［10］研究了
败酱草通过正丁醇萃取的总皂苷部位对 U14 荷瘤小鼠体内肿瘤
的抑制作用，并推测败酱草皂苷通过增强机体抗氧化能力而清除
体内过多的氧自由基而达到抗肿瘤作用。杨晓蕾［11］实验得出白
花败酱草乙酸乙酯萃取获得的总黄酮部位具有体外诱导 Hela细
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 10 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 10 期
胞凋亡作用和对 U14 荷瘤小鼠的体内抗肿瘤活性。陈磊等［12］实
验说明白花败酱草水提液可以诱导肿瘤细胞损伤。鉴于白花败
酱草的抗肿瘤活性部位处于不明确状态，作者建立 70%醇提后
经大孔树脂分离的纯化工艺，将白花败酱中的总黄酮和总皂苷部
位尽量分开，利用紫外显色法测定各部位总黄酮和总皂苷含量，
之后采用 MTT法分别进行抗肿瘤细胞的筛选以及抗肿瘤活性部
位的考察，更直观地筛选出总皂苷是白花败酱草的抗肿瘤活性部
位。
本实验选择 Hela、Mcf － 7、EJ、Hct － 8 和 Bel － 7402 五种人肿
瘤细胞系，针对白花败酱草粗提物分别考察了这五种肿瘤细胞的
敏感性。本研究中 MTT试验发现对于白花败酱草粗提物，Hela 、
Mcf － 7、EJ 和 Hct － 8 细胞株具有一定的敏感性，IC50值均小于
250 mg·L －1，其中 Mcf － 7 细胞和 Hela细胞最为敏感，IC50值分
别是 22 mg·L －1和 57 mg·L －1。提示其药理作用可能主要表现
在抑制妇科肿瘤宫颈癌和乳腺癌方面。同时分别设计了 10，50，
250，1250 mg·L －1四个浓度考察粗提物的肿瘤细胞抑制率，发现
粗提物在抑制肿瘤细胞体外增殖方面具有一定的剂量 －效应依
赖性。因此，本课题组对粗提物进一步分离纯化，通过体外抗肿
瘤实验模型，筛选白花败酱草的抗肿瘤活性部位并客观评价其抗
肿瘤活性。
表 3 不同部位对四种肿瘤细胞的抑制作用
受试样品
Hela
剂量 C /
mg·L －1
细胞抑制率
(%)
IC50 /
mg·L －1
MCF － 7
细胞抑制率
(%)
IC50 /
mg·L －1
HCT － 8
细胞抑制率
(%)
IC50 /
mg·L －1
EJ
细胞抑制率
(%)
IC50 /
mg·L －1
80%乙醇树脂部位 2 1． 64 11． 90 1． 38 12． 55 0． 21 15． 61 0． 02 65． 32
10 26． 23 30． 61 21． 78 4． 77
50 98． 63 89． 09 93． 76 65． 31
250 99． 89 99． 99 99． 99 84． 88
60%乙醇树脂部位 2 － 25． 69 － － 20． 72 － 0． 33 482． 44 － 12． 21 －
10 － 23． 44 － 5． 43 3． 98 － 7． 66
50 － 20． 86 － 1． 85 10． 70 － 5． 30
250 － 10． 10 3． 82 29． 46 － 0． 55
40%乙醇树脂部位 2 － 18． 21 － － 5． 24 － － 0． 99 － － 28． 56 －
10 － 17． 36 3． 47 3． 45 － 18． 22
50 － 6． 35 6． 22 9． 70 － 6． 38
250 1． 12 18． 45 14． 89 － 0． 99
20%乙醇树脂部位 2 0． 09 291． 54 － 0． 89 － 0． 05 328． 30 － 3． 88 －
10 5． 32 1． 22 6． 89 0． 05
50 15． 28 4． 37 14． 52 3． 37
250 29． 31 10． 56 21． 99 10． 62
H2O树脂部位 2 1． 25 622． 18 0． 05 1779． 00 2． 01 570． 12 － 3． 67 －
10 7． 56 1． 25 5． 33 0． 55
50 13． 51 4． 30 17． 58 4． 17
250 31． 89 6． 88 34． 77 4． 78
实验结果显示，80%乙醇树脂部位对 Hela 、Mcf － 7、EJ 和
Hct － 8 细胞株的 IC50值较粗提物均明显降低，并且对 Hela和 Mcf
－ 7 细胞株的抑制效果最明显，IC50值分别为 11． 9 mg·L
－1和
12． 55 mg·L －1。此外 20%树脂部位和 H2O 树脂部位对 Hela 、
Mcf － 7 和 EJ虽具有一定的抑制作用，但其抑制率较低，IC50值均
大于 250 mg·L －1。综合以上结果，80%乙醇树脂部位对 Hela和
Mcf － 7 细胞株具有显著的抑制作用，提示 80%乙醇树脂部位可
作为白花败酱草的抗妇科肿瘤的有效部位。显色法测得活性部
位的总皂苷和总黄酮的含量分别是 61． 81%和 8． 69%，因此可确
定总皂苷部位是白花败酱草抗妇科肿瘤有效部位。本试验通过
白花败酱草总皂苷对人体肿瘤细胞抑制率的考察，明确了白花败
酱草总皂苷的抗妇科肿瘤活性，填补了其总皂苷抗肿瘤的体外研
究数据的空白。
另外，本试验中黄酮成分主要集中在 40%乙醇树脂部位，其
总黄酮含量达 51． 61%。MTT试验结果显示此部位对 Hela 、Mcf
－ 7、EJ和 Hct － 8 细胞株均无明显的抑制作用。此试验结果与杨
晓蕾等人的试验结果不同，作者分析其原因，可能是因为提取方
法不同造成的。
近年来，妇女宫颈癌和乳腺癌的发病率逐渐上升，其治疗费
用昂贵且治愈率低。妇科肿瘤严重危害妇女健康，给家庭、社会
和国家带来沉重的负担。目前，西医的化学疗法和放射疗法均抑
制机体的免疫功能，运用中医疗法，注重机体免疫调节成为肿瘤
治疗的必然趋势。因而本实验以白花败酱草为出发点，从中草药
资源中寻找高效、经济的抗肿瘤药物，为白花败酱草抗肿瘤新药
的研发奠定了基础。同时作者也相信，中草药治疗在未来的医学
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