全 文 ：第 28卷
X 2 (X) 年 6 月
分析化学 (FE NX l l lX UE l JA) 研究简报
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第 6 期
70 2 ~7 2
毛细管区带电泳法用于中药高乌头的质量控制
范瑞芳 史雪岩 顾峻岭 ` 邓玉林 李桂玲 傅若农
(北京理工大学材料与化工学院 , 北京 1《X洲) 81)
摘 要 运用毛细管区带电泳法 , 以 irT s 作缓冲体系 ,在 14 vk 电压下 ,考察了不同声 值和
缓冲溶液及其浓度对 电渗流和高乌头下脚料中各物质分离度的影响。 结果表明 , 以 so
n
~ U L irT
s 缓冲体系 ,在碱性区 , 可在 4 而n 之内对高乌头的下脚料进行快速有效的分析 。 该
法适用于在大规模工业生产中对中药高乌头进行快速分析检定和质量控制 。
摘 要 毛细管电泳 ,高乌头 ,高乌甲素 ,环糊精
1 引 言
自 90 年代以来 , 毛细管电泳以其高效 、快速 、 样品用量少 , 成本低等优点赢得越来越多的
分析人员 的青睐 ,特别是在中草药有效成分及大分子蛋白质的分析鉴定方面 ,有极好的应用前
景 。
高乌甲素 ( lap pac on it in e )是毛食科植物高乌头 ( A co in ultn s in 0 lr 幻 n ta n uln akn ia )根中的主要有效成分 。 药理实验证明 , 高乌甲素具有较强的镇痛作用 ,因其无成隐无蓄积中毒而优于吗啡和
度冷丁 。 北京市新技术应用研究所用 pH 区带精制逆流色谱分离制备了高乌甲素纯品 。 我们
用毛细管区带电泳法 ( CZ )E 为大规模工业生产过程中的药物质量控制建立了一种高效 ,快速 ,
实用的方法 。
2 实验部分
2
.
1 试剂与仪器
CAp E L10 3 型毛细管电泳仪 , C h or m & S详 e 软件 (俄罗斯 UL M E x 公司 ) , 46 . 5 138 e而50脚 1 .
d
. 石英毛细管柱 (河北永年光导纤维厂 ) 。 样品精 1
及下脚料 (北京新技术应 用研究所张 天佑教授赠
送 ) 。 高乌甲素的结构式由图 1所示 。 三 (经甲基 )氨
基甲烷 ( irT s ) 、 硼砂 、 氢氧化钠 、 二 甲亚矾为分析纯 。
户环糊精 、梭甲基 户环糊精 、聚合 户环糊精为本教研
室合成 。 所用水为二次去离子水 。
.2 2 实验方法
样品精 1及下脚料用二次去离子水配制 ,经离心
机离心后取上层清液 。 用 30 ~ F L irT
s 体系作缓冲
液 ,用磷酸调 pH 值 ,使用前经 0 . 45 脚 的纤维树脂膜 图 1
过滤 。 毛细管使用前分别用 0 . l mol 几 氢氧化钠溶 isF
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、水各冲洗 o . s h。 每两次运行之间用缓冲液冲洗 3 而 n 。
高乌甲素的分子式
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更换缓冲液时平衡冲洗 5 而 n 。 采
1 kaP 压力进样 , 于 254 mn 波长检测 。 用二甲亚矾标记电渗流 ,取 3 次标记值的平均值 。
用液
l望刹〕伪一 0’7 收稿 ;l 创尹孤or 一25 接受 。
第 6期 范瑞芳等 :毛细管区带电泳法用于中药高乌头的质量控制
3 结果与讨论
3
.
1 缓冲液 pH 值对分离和电渗流的影响
在 03 ~ 1儿 rTi
s 一 H 3 .PO 缓冲体系 ( p H Z 一 s) 中 , 当 p H 值 < 7 时 , 下脚料始终呈现一个峰 。
当 p H > 7 时 ,逐步出现 3 个峰 。 曾试图将 5 ~ U L 月
一
c D
、
6
~
lL/ 梭甲基 户 C D 及聚合 尽 C D
(2 % )作为假固定相添加人缓冲溶液 中〔’ 〕 ,结果表明没有得到新的物质峰 。
在 CZ E 中 , p H 值对分离的影响尤为显著 。 在低 p H 值下 , 高乌头中各物质的电渗淌度相
同 ,无法分离 。 随着 p H 值增高 ,不同物质的淌度产生差异 , 因而得以分离 。 图 2 所示 为不同
p H 值下下脚料中各物质的分离度 。 当 pH 值为 or
时 , 电渗流反而下降了 。 这与离子强度等有关 。 当
PH 值和离子强度都升高时 ,离子强度的影响可能超
过 “ 纯州 ” 效应 ,使得电渗流降低 2[J 。
3
.
2 不同缓冲体 系对分离的影响
我们分别研究了相同浓度 ( 30 ~ l/ L )
, 不同体
系的缓冲溶液 (包括 irT S , 硼砂 , 氢氧化钠体系 )对分
离的影响 。 发现 irT S 体系对该样品的分离效果最好 。
这是因为 irT S 一从 R ) 4 体系的离子强度小 ,缓冲容量大
的缘故 。
3
.
3 不同缓冲溶液浓度对分离度及电渗流的影响
我们考察了不同缓冲溶液浓度 , 30 In l n o l / L 、 50
~
F L
、
7 0
~
l/ L
、
90 ~
l/ L irT
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图 2 pH 值对分离度的影响
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A
. 高乌甲素与杂质 1 的分离度 ( ht e r凶〕】u it on of
18 p l班 on i t sn e an d i恻 ir yt l ) ; B . 杂质 l 与杂质 2 的
分离度 (山 e ~ d u t ion of i恻五yt 1 an d Z ) 。 条件
(
e on d i t i二 ) : 3 0 n u邢 1/L irT s 一 H 3 ()P 4 , 14 kV 。
度的影响 。 结果表明 ,随着缓冲液浓度增大 , 电渗流逐步减小 , 分析时间延长 。 但对混合物的
分离度影响不大 。 从快速与节约试剂的角度出发 , 我们选择 30 ~ l/ L irT
S 作缓冲溶液 。
3
.
4 实际样 品的测定
实验发现 ,在 p H 值 二 8 . 5 时 ,分离效果最好 。 图 3 所示为精 1 及下脚料的电泳图 。 用迁
移时间法标记高乌甲素 。 对峰面积进行积分 ,精 1中有 1 . 1 1% 的杂质 ,说明用 p H 逆流色谱制
图 3 精 l曳a )及下脚料 ( b )的电泳图
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.
3 E fe
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备高乌甲素纯品基本达到了要求 。但在下脚料中仍有 印 . 86 % 的高乌甲素 ,所以在生产中应对
下脚料进行充分的循环使用 。 对比两张电泳图 ,通过迁移时间可以判断 ,精 l 中的杂质与下脚
料中的杂质 2 为同一物质 。
7 22 分 析 化 学 第 2 8卷
综上所述 ,运用毛细管区带电泳法可在 4 而 n 之内对高乌头下脚料进行快速 , 有效的分
析 。
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