全 文 ：RP-HPLC法测定辐状肋柱花中獐牙菜苦苷的含量＊
宋萍 ,吴启勋 ,俞学荣
(青海民族学院化学系 , 西宁 810007)
摘要　目的:建立反相高效液相色谱法分离并测定辐状肋柱花中獐牙菜苦苷的含量。方法:采用 ZORBAXSB-C
18
(250 mm×
4.6mm, 5 μm)色谱柱 ,以甲醇 -水(含 0.04%磷酸)为流动相进行线性梯度洗脱(0 ～ 15 min, 23∶77※ 30∶70), 流速 1.0 mL·
min-1 , 检测波长 238nm, 柱温 35 ℃。结果:进样量在 0.093 ～ 3.72 μg范围内 , 与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998, n=
6);平均回收率(n=5)为 99.7%, RSD为 1.3%。结论:本方法简便 、快速 , 结果准确 、可靠。
关键词:反相高效液相色谱;辐状肋柱花;獐牙菜苦苷
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2009)06-1013-03
HPLCsimultaneousdeterminationofswertiamarin
inLomatogoniumrotatum(L.)FriesexFern.＊
SONGPing, WUQi-xun, YUXue-rong
(DepartmentofChemistry, QinghaiNationalitiesInstitute, Xining810007, China)
Abstract　Objective:TodevelopanHPLCquantitativemethodfordeterminingthecontentofswertiamarininLom-
atogoniumrotatum.Method:ThesampleswereseparatedonaZORBAXSB-C18 column(250 mm×4.6 mm, 5
μm)elutedwithmethanolandwatercontaining0.04% phosphoricacid.Theratioofmethanolandwaterincreased
from23∶77 to30∶70 in15minwithdetectingwavelengthat238nm, flowrateat1.0mL·min-1 , columntempera-
tureat35℃.Result:Thecalibrationcurvewasfoundtobelinearovertherangeof0.093-3.72μg(r=0.9998,
n=6);Theaveragerecovery(n=5)was99.7% withRSD1.3%.Conclusion:Themethodissimple, rapid, accu-
rateandreliable.
Keywords:RP-HPLC;Lomatogoniumrotatum;swertiamarin
　　辐状肋柱花 [ Lomatogoniumrotatum(L.)Fries
exFern.]是龙胆科肋柱花属植物 ,系蒙医临床常用
药 ,生长于海拔 3 ～ 4.1 km的山坡草地 、灌丛
中 [ 1 ～ 4] 。该属植物和龙胆科中的龙胆属和獐牙菜属
植物在藏药中疗效类同 ,主要用于治疗有关肝脏 、胆
囊及脾脏类疾病 ,其味苦 、性寒 ,具有清热 、健胃 、愈
伤的功效 [ 5] 。它的主要化学成分獐牙菜苦苷具有
提高皮肤机能 、促进毛发生长 、抑制中枢神经 、镇痛
和抗炎等作用 ,另外 ,獐牙菜苦苷等环烯醚萜类化合
物对子宫平滑肌有明显的解痉作用 [ 6, 7] 。目前 ,有
关辐状肋柱花的文献报道 [ 2]较少 ,而对其中有效成
分獐牙菜苦苷的分析方法及含量测定更未见报道 。
为此 ,本文建立了反相高效液相色谱法对辐状肋柱
花中獐牙菜苦苷的含量进行测定 。该方法具有快
速 、方便 、稳定 、准确的特点 ,适用于辐状肋柱花中獐
牙菜苦苷含量的测定。
1　仪器 、试药
Agilent1100高效液相色谱仪(配置:手动进样
器 、在线真空脱气机 、高压二元梯度泵 、恒温柱温箱 、
DAD检测器);Agilent色谱工作站;KQ3200超声波
清洗器(昆山市超声波仪器有限公司);SZ-97自动
三重水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)。
甲醇:色谱纯;水:自制三重蒸馏水;磷酸:AR
级(北京红星化工厂);獐牙菜苦苷对照品(批号
0785-200203)购自中国药品生物制品检定所。
辐状肋柱花样品采自青海互助北山林场 (编
号:200601, 200802, 200803),由青海大学青海医学
院魏全嘉教授鉴定为龙胆科肋柱花属植物辐状肋柱
—1013—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(6)
＊ 教育部重点科技攻关项目(项目编号:2051675)
第一作者　(0971)8800307;E-mail:spzhe@126.com
DOI :10.16155/j.0254-1793.2009.06.024
花 Lomatogoniumrotatum(L.)FriesexFern.。样品
自然风干后粉碎 ,过 100目筛 ,置于阴凉干燥处保
存 。
2　溶液制备
2.1　对照品储备液　精密称取对照品獐牙菜苦苷
1.86mg,置 10 mL量瓶中 ,用甲醇溶解并定容至刻
度 ,摇匀 ,配制成 0.186mg·mL-1的对照品储备液 ,
使用时稀释成所需浓度。
2.2　供试品溶液　精密称取辐状肋柱花干粉 1.0
g,加入甲醇 10 mL,超声提取 (150 W, 40 kHz)30
min,滤过 ,滤渣再加入甲醇 10mL超声提取 ,如此反
复 3次 ,合并所得滤液 ,并将滤液浓缩后用甲醇定容
至 10mL量瓶中 ,经 0.45 μm微孔滤膜滤过 ,即得。
3　色谱条件
采用 ZORBAXSB-C18 (250 mm×4.6 mm, 5
μm)色谱柱 ,以甲醇 -水 (含 0.04%磷酸)为流动
相 ,进行梯度洗脱 [ 0 ～ 15 min, 23∶77※30∶70] ;流速
1.0mL·min-1;检测波长为 238nm;柱温 35℃;在
该色谱条件下獐牙菜苦苷保留时间为 12.1 min,与
其他成分达到良好的基线分离 ,见图 1。
图 1　獐牙菜苦苷对照品(A)与辐状肋柱花样品(B)的色谱图
Fig1　Chromatogramsofswertiamarinreferencesubstance(A)and
sampleofLomatogoniumrotatum(B)
1.獐牙菜苦苷(swertiamarin)
4　线性关系考察
精密量取浓度为 0.186 mg· mL-1的獐牙菜苦
苷对照品溶液 0.5, 2, 4, 10, 14, 20 μL, 进样测定。
以色谱峰面积 Y为纵坐标 ,以进样量 X(μg)为横坐
标 ,绘制工作曲线 ,得线性回归方程:
Y=1.798×103X-38.49　 r=0.9998
线性范围为 0.093 ～ 3.72 μg。在选定的色谱条件
下 ,当信噪比 S/N=3时 ,测得獐牙菜苦苷的检出限
为 0.25 ng。
5　精密度试验
精密吸取浓度为 0.186 mg· mL-1的獐牙菜苦
苷对照品溶液 4 μL连续进样 6次 ,在选定的色谱条
件下测定色谱峰的峰面积 , 计算 RSD(n=6)为
0.72%,表明仪器精密度良好。
6　稳定性试验
精密称取辐状肋柱花样品(编号:200601)1.0
g,按 “ 2.2”项下方法制备供试品溶液 ,在 0, 3, 6, 10,
20, 24 h分别进样 0.5 μL,测定獐芽菜苦苷的峰面
积 ,计算 RSD(n=6)为 0.68%,表明供试品溶液在
24 h内稳定。
7　重复性试验
精密称取 5份辐状肋柱花干粉(编号:200601)
各 1.0 g,按 “2.2”项下方法制备供试品溶液 ,并在
选定的色谱条件下进样 0.5μL,测定獐芽菜苦苷的
含量 。结果平均含量 (n=5)为 4.21%, RSD为
0.6%,表明该方法的重复性满足要求。
8　回收率试验
精密称取 5份已测知獐牙菜苦苷含量的辐状肋
柱花样品(编号:200601)0.5 g,分别加入獐牙菜苦
苷对照品 21mg,按 “ 2.2”项下方法制备所需溶液 ,
进样 0.5μL,测得獐牙菜苦苷平均回收率(n=5)为
99.7%, RSD为 1.3%。
9　样品含量测定
按 “ 2.2”项下方法制备供试品溶液 3份 ,在选
定色谱条件下进样测定辐状肋柱花中獐牙菜苦苷的
含量 。通过测定峰面积 ,由线性方程计算出 3批辐
状肋柱花样品(编号:200601, 200802, 200803)中獐
牙菜苦苷的平均含量 (n=3)分别为 4.21%,
4.28%, 4.16%;RSD分别为 0.6%, 1.4%, 1.3%。
符合测定要求 。
10　讨论
10.1　检测波长的确定　上述配制的对照品溶液进
样后 ,利用检测器在 220 ～ 260nm扫描其吸收光谱 ,
发现对照品在 238nm处有最大的吸收 ,则选择此波
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长为本实验检测波长 。
10.2　提取方法确定　对于獐牙菜苦苷的提取 ,参
照文献 [ 8 ～ 10] ,比较了不同提取方法(超声波振荡
和热回流)、提取溶剂(甲醇 、乙醇 、水)、溶剂用量
(5 , 10, 15mL)、提取时间(15, 30, 45, 60 min)、提取
次数(1, 3, 5次)对提取率的影响 。结果表明 ,超声
波提取法优于热回流提取法 ,且用 10 mL甲醇作溶
剂 ,反复 3次用超声波提取 30 min即可将样品中有
效成分提取完全 。
10.3　流动相的选择　分析测定时獐牙菜苦苷色谱
峰易拖尾 ,经试验 ,当在水中加入磷酸时可改善其峰
形 。故选择甲醇和含磷酸的水做流动相。
10.4　小结　通过对辐状肋柱花中獐牙菜苦苷含
量的测定 ,发现辐状肋柱花中獐牙菜苦苷的含量较
高 ,这对于在一定程度上揭示辐状肋柱花用于治疗
肝胆疾病的物质基础具有重要意义 ,同时也为以肋
柱花为代表的该属药用植物资源的进一步开发利用
提供了依据 。
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(本文于 2008年 5月 17日收到)
—1015—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(6)