全 文 ：中国临床药学杂志 创公犯 叮困 劲丑随忧 年第 卷第 期
半边莲煎剂对小鼠 肝癌荷瘤细胞系 和 表达的影响
邵金华 ,张 红 大连医科大学附属第二医院中西医结合临床内科 ,大连 印
【摘要】 目的 观察半边莲煎剂对实验性小鼠 型肝癌的抑制作用 。方法 小鼠右腋下皮下种瘤造成实体瘤模型 ,昆明
种小鼠泌只 早舍各半 ,随机分为 组 ,即中药组、西药组 、对照组 ,每组 只。造模后分别给予半边莲煎剂灌胃、一 腹腔注
射 、生理盐水灌胃给药 ,连续给药 。第巧天以颈椎脱臼法处死 ,并将肿瘤组织取出称其质量 ,计算抑瘤率 制作小鼠肿瘤
细胞切片 ,用免疫组织化学方法对肿瘤细胞切片进行染色 ,检测半边莲煎剂对肿瘤的抑制作用及对 山 和巧 表达的影
响。结果 半边莲煎剂对小鼠肝癌细胞的生长抑制率为 , 。七耳 及巧 在 组中均呈阳性表达 ,中药组 七压 表
达减弱 ,巧 表达升高 ,与对照组比较差异有统计学意义 尸均 。结论 半边莲煎剂对小鼠 型肝癌有明显的抑制
作用 ,其机制可能与肿瘤细胞内 由耳 、巧 蛋白表达有关。
【关扭词】半边莲 肝癌 山耳 巧
【文献标志码】 文章编号 仪刀闷川拓《加 璐仍 以
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原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一 ,其高 发病率越来越受到临床研究的重视。肝癌发生发展
作者简介 邵金华 兜卜
山 因 , 喊
张 红 日一
,女 ,在读硕士研究生。主要研究方向 中西医结合治疗消化道疾病及消化道肿瘤的实验与临床研究。 面】坛
通信作者】 女 ,教授 。主要从事中西医结合治疗老年病及肿瘤的实验与临床研究 。份 以 一
中国临床药学杂志 路 州 七任困 年第 卷第 期
是一个多步骤的伴有多个癌基因的激活和抑癌基因
的失活为基础的复杂过程 ,同时也是一种细胞的异
常增生 ,肿瘤细胞内与生长分化有关的信号障碍是
增殖失控的重要因素 。半边莲
为桔梗科植物半边莲的干枯全草 ,性辛 、平 ,归心 、小
肠 、肺经。其始载于 《滇南本草 》 ,后李时珍在 《本草
纲目》中也有记载。 《陆川本草 》曰其具有 “解毒 、消
炎 、利尿 、止血 ”的功效 。近年来研究 〔`表明 ,半边莲
有抑制癌细胞增殖作用 ,它是临床上常见的抗癌中
药 ,用于治疗肝癌 、胃癌 、肠癌 、乳腺癌等 ,并可外敷
治疗癌症。高冬等 认为半边莲可通过提高肝癌细
胞胞内游离钙离子浓度诱导癌细胞凋亡 。日本学者
发现多炔类成分对肿瘤细胞具有显著的细胞毒性 ,
已申报抗癌剂专利 。我们采用免疫组化法对肝癌
小鼠肿瘤连续切片组织行 一 一及 两种
癌相关基因蛋白产物同时检测 ,观察半边莲煎剂对
小鼠肝癌细胞 的抑制作用 。
材料与方法
药品与试剂 半边莲煎剂 半边莲煎煮浓缩而
成 ,质量 ,质量浓度为 一` ,由本院中草药
局提供 氟尿啥陡【一 ,生产批号 ,天津金
耀氨基酸有限公司 ,每支 〕。兔抗鼠
巧 单克隆抗体工作液 、兔抗鼠 一 一单克隆抗
体工作液 、正常山羊血清 、生物素化山羊抗兔 多 、
辣根酶标记的链酶卵白素 、 抗体免疫组织化学检
测试剂盒及 显色盒 ,均购自北京中杉金桥生物
技术有限公司 。
动物与瘤株 一 周龄健康清洁级昆明种小
白鼠 ,体质量 一 ,早舍各半 ,共 只 ,购自本
校动物实验中心 ,合格证号 即欢 辽 田 一仪刃 小
鼠肝癌 细胞株由本校病理生理学教研室提供 。
仪器与设备 仅刃 型显微镜 日本 抑
公司 、 型滑台切片机 日本樱花牌 、 一
型干燥箱 上海市实验仪器总厂 、 型电热恒温
水温箱 北京市医疗设备厂 、傀一 一 型电热恒
温干燥箱 上海跃进医疗器械厂 等 。
建立肝癌模型 在无菌条件下 ,抽取接种传代
的腹水型 口 小鼠腹水 ,用 生理盐水稀释成
细胞悬液 ,反复冲打 ,水平振摇以充分混匀 ,于显微
镜下计数 ,并用生理盐水稀释调整至所需细胞浓度
为每毫升 护个 ,充分混匀 ℃备用 。接种前瘤
株用 锥虫蓝染色 ,计活细胞数为 一 。
碘化消毒小鼠右前肢腋窝部位 ,每只皮下接种瘤细
胞悬液 。 只小鼠造模过程在 内完成 。
动物分组及取材 小鼠接种鼠肝癌 细胞
株 后 ,按体质量随机分为 组 ,每组 只 。中药
组 、西药组和对照组造模后分别给予半边莲
,约相当于生药 , 一 按照 ·吨一 ·
一 , 生理盐水 礼 ,连续 。第 天颈
髓脱臼法处死 ,并将肿瘤组织取出称其质量 ,计算抑
瘤率 。抑瘤率 对照组平均瘤质量一实验组平均
瘤质量 对照组平均瘤质量 。然后制作小
鼠肿瘤细胞切片 ,观察病理变化 用免疫组织化学方
法对肿瘤中的 一 一及 巧 蛋白进行染色 ,检测 ,
对结果进行分析 。
一 一及巧 蛋白的表达
免疫组化方法 将剥取的肿瘤标本用
甲醛固定 ,梯度浓度乙醇脱水 ,石蜡包埋 于肿瘤组
织最大横断面切片 ,厚度约 脚 。流水冲洗 ,脱蜡
水化后 ,用 耐 ·一磷酸盐缓冲液 冲洗 ,
置 氏仇室温封闭 而 ,以灭活内源性酶。
冲洗 ,滤纸吸干周围水分 , 耐 ·一构椽酸盐缓
冲液 声 的℃微波修复抗原 汕 后 ,冷却至
室温 , 冲洗 ,置正常山羊血清室温封闭 ,
倾去血清 ,滴加适量一抗 一 一或 巧 工作液 ,
℃过夜 。取片后 ℃复温 而 浸洗 ,加人
生物素化山羊抗兔 够 ,室温孵育 巧 。 浸
洗 ,滴加辣根酶标记的链酶卵白素 ,室温封闭
而 。 浸洗 , 显色 ,流水冲洗 ,苏木素复染 ,
脱水 ,透明 ,中性树胶封片 。
结果判定 倍光镜视野下 ,随机选取每
张切片中 一 一、巧 着色最明显的 个视野 ,采
集图像 ,并利用 玩鸭 哪 美国 。五
公司 图像分析软件半定量检测 种阳性染色物质
的面积及积分吸光度 ,求积分吸光度平均值 ,用平均
吸光度值代表组织中特定蛋白表达水平的高低 ,即
表示 一 一、巧 的含量 。
统计学处理 运用 只治 统计学软件 ,以
单因素方差分析进行检验 ,两组间比较用 巧 法 ,
数据以牙土 表示 。
结果
抑瘤率 中药组瘤质量与对照组相比 ,明显减
小 ,差异有统计学意义 尸 ,表明半边莲对肝
癌有明显的抑瘤作用 ,其抑瘤率为 ,见表 。
一汕 一及巧 蛋白的表达量 免疫组化结果
显示 , 一 一的阳性表达定位于细胞膜上 的
374 中国临床药学杂志 公弧 叮幽 团 止刊田妊块认 加 年第 卷第 期
阳性表达定位于细胞核中 ,呈棕黄色。 组均呈阳
性表达 ,见图 。经结果判定后显示中药组和西药
组 一汕 的表达下降 ,而巧 表达升高 ,与对照组
比较 ,差异有统计学意义 ,见表
衰 半边莲煎荆对 刃口实体摘的抑制作用
。 ,无土
组别 瘤质 抑瘤率
对照 兜士 一
中药 印土 `
西药 书土 匆
与对照组相比 , ` 仿 ,
表 钊压 及玲 的表达情况
二 ,无土
值组别 — 心心压 巧
对照 工 刀 土 刀 翻 土 卯
中药 印 卯 土加以左 汤 , 护
西药 洲 翻 土 《阴 夕 卯田 伪土 分
与对照组相比 , ` 仍 , 仍
讨论
肝癌是是严重危害人类健康的主要恶性肿瘤之
一。因其起病隐匿、发展迅速 、高度恶性 、易转移复
发 、治疗难度大 、生存期短等 ,所以发现病情大多进
人中、晚期 ,从而丧失手术机会。近年来中医药在肝
癌的临床和实验研究方面成为热点。半边莲具有利
水消肿 、清热解毒 、活血祛寮的作用 ,其全草含生物
碱 、黄酮昔 、氨基酸等 ,生物碱中主要为山梗菜碱 、山
梗菜酮碱 、异山梗菜酮碱 、山梗菜醇碱等。姜艳艳
等 对半边莲的成分进行系统研究 ,从中分离得到
个黄酮类化合物 ,鉴定为芹菜素 、木犀草素 、香叶
木素 、白杨黄酮 、橙皮昔 、木犀草素一一口一卜 一葡萄糖
昔 、芹菜素一一一卜 一葡萄糖昔 、蒙花昔 、香叶木昔 ,
黄酮类成分为其主要活性成分 另外还含有少量的
香豆素类 、脂肪酸类和幽醇类成分。其中昔元木犀
草素具有抗氧化活性及抗菌活性 ,芹菜素具有抑
制致癌物质的抗癌活性 ,可作为治疗 和其他病
感染的抗病毒药物 ,并可治疗各种炎症 黄酮昔成分
香叶木昔具有改善血管通透性和微循环 、减轻肢体
水肿的功效 ,是欧洲已上市 余年的药物 ,而香叶
木昔和橙皮昔的药物组合也具有改善微循环和淋巴
回流 、减轻水肿等作用 。也有文献 报道香豆素
类成分具有抗肿瘤的活性。这些活性与半边莲利尿
消肿 、清热解毒 、抗癌等功效一致 。本实验表明 ,半
边莲煎剂对接种 型肝癌瘤株的小鼠具有明显
的抑瘤作用 。
圈 刀口肝摘荷摘小皿肿启切片中 改创压 《上圈 和 吃 《下圈 蛋白表达 免佼组化方法 侧】
对照组 中药组 西药组
心七耳 基因是一种原癌基因 ,又称 或
印讯 ,位于人类第 号染色体长臂的 够 ,编码
相对分子质量为 伽 的跨膜糖蛋白。该基因编
码的蛋白位于细胞膜上 ,具有酪氨酸激酶活性 ,其结
构与表皮生长因子受体 至少有 的顺序
同源 。该基因的变异方式主要是基因扩增和 或 过
中国临床药学杂志 口肛闻路 】 州 刃 洲 年第 卷第 期
度表达 。该基因扩增或过表达见于某些肿瘤组织 ,
提示参与肿瘤的发生和发展过程 。本实验结果显
示 ,中药组 山 一表达与对照组比较 ,表达减少 ,
表明半边莲煎剂降低了 一表达的水平 ,说明
该剂可能有抑制癌细胞的分裂 、中断癌细胞 和
蛋白质的合成 。
基因是人类恶性肿瘤中最常涉及的抑癌基
因 ,位于染色体 ,长约 汕 ,而州 为
。近年的研究已证明 ,野生型 基因是一种抑
癌基因 ,对细胞的生长 、分化 、增殖起调控作用 。突
变型 不但丧失抑癌活性 ,并可能在 复制水
平上调节细胞生长 ,是促进肿瘤发生 、发展及导致增
殖异常活跃的一个重要因素 。本实验结果显示 ,中
药组 巧 表达与对照组比较 ,表达升高 ,表明半边莲
煎剂上调了巧 表达 ,可能是该剂抑制巧 在
复制水平上调节细胞生长 ,从而抑制或阻止细胞转
化的功能 ,促进细胞凋亡 ,达到抑制肿瘤的发生。
本实验结果显示 ,半边莲煎剂可明显地抑制小
鼠 口 型肝癌细胞的生长 ,抑瘤率为 。在
应用了半边莲煎剂后 ,中药组和西药组与对照组相
比 , 一 一的表达明显的降低 ,而巧 的表达明显
升高 ,说明半边莲煎剂对肝癌细胞的增殖有明显的
抑制作用 。本实验只是初步就 一 一 、巧 基因产
物的表达进行检测 ,但其抗癌机制尚不明确 ,有待进
一步研究 。
【参考文献】
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京中医药大学学报 , 为, 界
〔〕阎高峰 ,李学刚 ,袁吕江 木犀草素生物活性研究〔 粮食与油
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〔 徐淑永 ,曾和平 ,魏传晚 ,等 生物活性香豆素的研究进展【〕合
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加的 一 收稿
机械瓣膜置换术后再手术的抗凝治疗
朱海宏 ,徐铁铮 ,周 琉 ,郭劝民 浙江省衙州市人民医院心胸外科 ,衙州 刃
【摘要】 目的 探讨机械瓣膜置换术后再手术的抗凝治疗 。方法 回顾并随访 卯 年 月一 年 月在我科行心脏机械
瓣膜置换术后并再次行其他外科手术患者 例 ,术前 一 停用华法林 ,检测凝血酶原国际标准化比值 州 ,术后 一
恢复服用华法林 ,并依据州 调整用量 。结果 全组再手术患者均安全渡过围手术期 ,未出现血栓 、颅内出血及胃肠道等异
常出血 。结论 机械瓣膜置换术后再手术必须合理调整华法林的使用 依据州 值维持一个有效的抗凝强度 ,可以安全地进
行手术 ,也可以安全地妊娠 、分娩 。
【关健词】人工机械瓣膜 再手术 华法林
【文献标志码】 【文章编号】晰 科伪 陈 扔
姆 幼加雌间朋 汾切能 吮 抽面 吐佃 ·
田
刀刊 , 汕 飞 , , 翻圈曲 众铆凶砚瓜 肠州勿呀刃 峨罗叮 , 几川瓜几从即蒯
【作者简介】朱海宏 卜 ,男 ,主治医师。 卯 耐 以卿物 的 肠