全 文 ：1 04 2一 药物分析杂志 C hi , 1 J Pll a mr A n : 、 1 2 00 8 , 2 8 ( 7 )
毛细管电泳 一 电致化学发光法测定
维 U 颠茄铝胶囊中硫酸阿托品的含量
杨志明 ’ , 汪芸 2 , 张小军 , 汪敬武 ’ *
( 1
. 南吕大学化学系 , 南昌 3 300 3 1 ; 2 . ) ’ `东省药品检验所 , ) ’ ` 州 , 5 10 180 )
摘要 目的 :建 认 种快速测定硫酸阿托品的电化学发光分析新方法 方法 : 从 J;硫酸阿托 .Wt对 几联毗咙钉在铂电极 l几的电
致发光信 号有增敏作用 , 与毛细管电泳结合 ,建立 一种快速 、 灵敏 、准确的 i则定制剂 中硫酸阿托品含 狱的方法 「 结果 : 在优化
的实验条件下 ,硫酸阿托 「{吉在 1 0 x 10 一礴一 0 x 1 0 一 “ n l o -一 ’ 范围 lAJ 呈良好线日: ( r = 0 . 9 97 8 ) ;检出 l垠 ( 3 。 )为 3 . 0 x 10 一 7 : 11。、 I
·
I
一 ’ , 回收率为 87 % 一 引% , R S D 小于 5 % 。 峰高和迁移时间的 RS D 分别为 4 . 3% 和 1 , 2 % ( n = 6 ) . 结论 : 本法与高效液相
色谱法相比 ,具有检出限低和线性范围宽的优点 , J[丁用」几维 U 颠茄铝胶卖的质虽控制及相关药物的含量检测 。
关键词 : 硫酸阿托品 ; 电致化学发光 ; 几联毗咤钉
中图分类号 : R g 1 7 文献标识码 : A 文章编号 : 0 2 5 4 一 17 93 ( 2 00 8 ) 07 一 10 42 一 04
C E 一 E C L d e t e r m in a t i o n o f a t r o P i n s u laf t e i n
V i t a m i n U a n d A l u m in iu m C a P s u l e s
Y AN G z h i 一 m i n g ` , W A N G Y u n ,
,
Z H A N G X i a o 一 j u n
,
W A N G J i n g 一 w u
( 1 1)
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A b s t r a C t
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C a n g化 a t e n li a n e e d b y a t一o p i n s u laf t e , ( : ( ) “ 一l) i n e ( 1 E C I w i t ll e a p i l l a l了 e le e t r o -
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V i t a m i n U a r l d A I一, m i n i u nr C a p s u l e s w i th s a ti s fa e to卿 r e s u l ts , r e e o v e r i e s a er 87 %
d e t e r m i n a t i ( ) n ( ) f a t l
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一 9 1%
.
K e y w o r d s : a r r o p i n s u l fa te : e le e t r o p h o ,
·
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,
15 ( 2
,
2 一 b i p y r id y l ) ,
,
u th e n i u m ( 1 )
维 U 颠茄铝胶囊是近年来新兴的一种治疗 胃
酸过多 、 胃溃疡 、保护 胃勃膜的新型 胃药 , 每粒胶囊
主要成分及含量 : 维生素 U 50 m g , 氧化铝 14 0 m g ,
颠茄流浸膏 10 m g , 其中硫酸阿托品是维 U 颠茄铝
胶囊中重要的活性成分 。 故研究维 U 颠茄铝胶囊
中硫酸阿托品的含量对产品质量监控有十分重要的
意义 。 目前文献报道硫酸阿托品的分析方法有高效
液相色谱法川 、 酸碱滴定法 [ 2 〕 等 , 但这些力一法普遍
存在耗时长 , 成本高 ,样品处理烦琐等缺点 。 电化学
发光分析法具有电化学分析与化学发光分析的优
点 ,把毛细管电泳与电致化学发光结合起来 ,是一种
集高效分离与高灵敏度检测 于一体的分离分析新方
法 〔’ { 。 近年来 ,毛细管电泳 一 电致化学发光法 ( C E
一 E c )L 已在一些胺类药物及氨基 酸等生化物质的
检测中得到了广泛的应用 “ 一 6 ’ 〕 而用毛细管电泳 -
电致化学发光法测定硫酸阿托靛「作者尚未见报道 。
本文根据 R u( b yP ) ” 十 能够在电极 }: 发生 氧化
还原 反 应 生 成 R u ( h yP ) ; ` , 而 硫 酸 阿 托 品 与
R u ( l甲y ) ;
` 经过一系列反少友增强 R u ( b p y ) ; ` 的发光
强度 。` 通过优化 E C L 的分离检测条件 , 建 立 了 C E
* 通 讯作者 『r e 一: ( 0 79 1 ) 39 5 0 3 4 6 ; E 一 , , l a l l : n 、 .` · ; l w 0 104 @ S i n a · ` ` , rn
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2008. 07. 028
药物分析杂志 h C in J p }l r a m An al 2 008 , 2 5 ( 7 ) 104 3 一
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一 E C L 快速测定硫酸阿托品的新力一法 。
1 实验部分
1
.
1 试剂 气联毗 咙钉纯品 ( .IT is ( 2 , 2 ’ 一 hi yP .il -
d y l ) ur t h e n i u m ( 1 )
e h l o r i ( l e h
e x a h y d
r a t e
,
A l d r ie h
e h e m i e a l C o
.
u SA ) ;硫酸阿托品对照品 (中国药品生
物制品检定所 ) ,维 U 颠茄铝胶囊 (大同市云华药业
有限公司 ;批 号 : 0 5 0 7 0 1 , 0 5 0 7 0 4 ) , 磷酸二氢钠 (上
海众晨化 一卜实业有限公司 ) ,磷酸氢二钠 (核工业实
验化工厂 ) 和氢氧化钠 ( ! _几海试剂 一厂 ) 均为分析
纯 。 硫酸阿托况:对 照品用二次蒸馏水溶解 , 浓度为
1 m m 、〕一 I J 一 ’ , 4 ℃储存备用 。
1
.
2 仪器与操作 M IP 一 B 型 多参数化学分析测
试系统 (西安瑞迈 电子科技有限公司 ) 。。 未涂层石
英毛 细管 ( 2 5 林m i` (1. , 3 7 5 卜m 0 . d . , 4 0 e m ) (河
北永年光导纤维厂 ) , 第 一次使用 前用 0 . 1 m ol ·
L
’ N a O H 冲洗过夜 , 然 后每次实验使用 前用二次
水冲洗 2 im n , 10 : n m ol · L 一 ’磷酸盐缓冲溶液冲洗
2 1示 n 。 电化学检测采用 三 电极 系统 : 工作 电极为
直径 5 0 0 林m 铂盘 电极 , 参 比电极 为 A g / A g CI 电
极 , 辅助电极为铂电极 ;使用前铂盘电极先用粒径
为 0 . 3 林m 1A 2 O 3粉末抛光 , 然 后 再用粒径为 0 . 05
林 m 1A 2 O 3 粉末抛光 , 最后 用 二次水超声 清洗 10
m in 后将其放置在正对毛细管出 1 末端处 , 并调节
毛细管和工作 电极之间 的距离在 ( 75 士 5) 林m 之
内 。 E C L 反应在约 4 0 0 林 L 的 E C L 池中进行 , 其结
构 与文献 [ 7 〕中设计 的相 同 。 3 h 更换新鲜 E C L
溶液 , 每两星期取出工作电极用粒径为 0 . 3 林m 和
0
.
05 林m 1A 2 0 3粉末重新抛光 , 以保持实验重现性 。
用酸度计 ( L海大中分析仪器 厂制造 ) 测定磷酸盐
缓冲液的 p H 位 。
1
.
3 实验方法 样品按文献「8 」处理 , 最后残渣 用
二次水溶解并稀释 定容 。 溶液进人毛 细管前 用
0
.
2 林m 醋酸纤维素膜过滤 , 采用 or k V 1/ 0 5 电驱
动进样 ,光电倍增管的电压设置为 s o V ,在分离电
压 18 k v 驱动下待测物进人检测池检测 , 并记录其
C E 一 E C L 谱图 。
2 结果与讨论
2
.
1 进样电压和时间
进样电压和时间是对 E C L 强度的影响见图 1 。
在图 l 中 ,理论塔板数用公式 ( l) 计算 19 :
刀 = 5 . 5 4 ( t , ; / w , / 2 ) ’ ( l )
其中 t 。 和 w : / 2分别表示迁移时间和峰宽 。
由图 1 可见 , 当进样电压在 5 一 巧 V 范围内变
化 , 进样时间在 4 一 14 5 范 lB 内变化时 , E C L 强度随
豁 6。。
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I n j e e t i o n v o l t a g e / kV
(b )
图 ! 进样时问 ( a) 和进样电 )任( h )对 ECI 强度和理沦塔板数的影响
卜’ 19 1 E fe 。 [ 5 o f i nj e e t i o , 1 * im e ( a ) a n d i「I Je e 一i o n v 《 ) It a g e ( h ) o n r he EC [
」
a , l d rh e , l u . n b e , ( )f Ih e
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样 l专}: ( S a rt lj l e ) : ]o 一 5 m o l · L 一 `硫酸 l` 1J托 .钻 ( 一。 一 5 m . )一 I J 一 ’ a : or p i n e s u l -
fa [ e ) ;分离缓冲溶液 ( s叩二二: i` , n l ) u ft e r ) : 40 rn , v ,0 1一 ’ , p H 5 . 0 , 磷酸盐缓冲溶液 (如 :。 m o一 [ 一 ’ p h o s p h a t e 50 1; , 110 ,: , l 》H 5 . 0 ) ;分离 f匕J l、 ( s e p a r a t i o ,1
v o l t卿 ) : 15 kv ;检测池中 ( d e Le e : i ,〕 。 。 e l一) : 5 。 。 , 10 1 · L 一 ’ R。 ( l ) p y ) ;十 , 印
,n lo o l
·
I 一 ’磷酸欲缓冲液 ( p Hs . o ) ( 5 0 n l r n 。,一 I 一 ’ r , ho , F,h a re 、 o lu * i o n , p H
8
.
0 ) :检测 J匕位 ( Io r e n r i习 ) : 1 . Is v ; ( a )进样 l匕J f l仪又幻 V ( inj e ( r i o n v o l t卿
15 1献 X) v ) , ( l ) )进样 r!」1飞口10 5 ( i , IJ e e t so n r im e 15 10 、 )
着电压和时间的增加而增加 ,但是理论塔板数随着
电压和时间的增加而减小 。 综合考虑进样电压和时
间对 E C L 强度和分离效率的影响 ,本实验选择进样
电压 10 kV ,进样时间 10 5 。
2
.
2 E C L 检测条件的优化
2
.
2
.
1 工作电极电位的影响 施加在工作电极上
的电位是影响 E C L 强度的一个重 要 因素 。 如图 2
所示 ,控制电极电位在 1 . 0 0 一 1 . 35 V 范围内变化 ,
E C L 强度随着工作电极电位的增加而增加先增大后
1 04 4一 药物分析杂志 C I :i n J P la l rm A a n l5 20 0, 2 5 ( 7 、
卜p洲们au尸叫闷。国
减小 。 当工作电极 电位为 1 . 20 V 时 , E C L 强度达到
最大数值 ; 而当电极电位低于 1 . 10 V 时 , 没有电化
学发光 , 这可能是由于 R .(t 饰妇 : ` 没有被氧化 。 本
文选择 l . 20 V 为最佳检测 电位 。
40268
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0ǐCU八IJ八UonùOnC八曰42Rnōb0自`胜皮1`.1
卜拭的ug尸月d国
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.
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.
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.
0 5 1
.
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.
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.
25 1
.
3 0 1
.
35 1
.
40
E/ V
图 2 检测电位对电致化 J货发光强度的形响
F 19 Z E限 ( 、 s ( ,f a l) I) l i e . { l一( , l e rl l i a l 。川 E (二[ 」 i ll t e 一l s i t y
进样 ( i o je 。· r i o n ) : 10 0 0 0 v / 10 5 ; J霎余条件 l司l冬1 1 ( o t }l e r 《 。 , n d i l i .川 ; a 、 i , ,
F ig l 、
2
.
2
.
2 检 测 池溶 液 的 影响 E C L 检 测池 中 的
R u ( b yP ) ;
` 浓度对发光强度的影响比较大 。 实验发
现 , 当 R l , ( b p y ) : 的浓度为 5 m m o l · L 一 ’ 时 ,有最大
的信噪比 。 磷酸盐缓冲液的浓度和 p H 值对 E C[ 强
度也有较大的影响 。 实验发现 , 当缓 冲液浓度在 30
一 10 0 m m ()]
·
l
j 一 ’ 范围内变化时 , E c L 强度随缓冲液
浓度的增大 ;但当其浓度超过 50 m m ol · L 一 ’后 , E c L
强度随着浓度的增加反 而减小 。 故选择 E C L 池中
缓冲溶液浓度为 50 m m d · L 一 ’ 。 控制缓冲溶液浓
度不变 ,磷酸盐缓冲液 PH 值为 8 . 0 时 , E C L 强度达
到最大 , 实验选择 E C L 池中缓冲溶液 p H 为 8 . 0 。
2
.
3 分离条件的优化
2
.
3
.
1 分离电压的选择 分离电压越高 ,迁移时间
越短 , 但产生焦耳热增大 , 导致峰宽和噪声增大 , 引
起峰形变化 。 当分离电压在 6 一 18 k V 范围内变化 ,
发现 E C L 强度及峰形都没有明显的变化 。 因此 , 综
合考虑峰宽 、 灵敏度 、 噪声 、 焦耳热及分析时间等因
素 , 选择 18 kV 作为分离电压 。
2
.
3
.
2 分离缓冲液的影响 分离缓冲液的 p H 和
浓度是影响 C E 一 E CI 体系的主要 因素 。 经在 p H
6
.
5 一 9
.
0 范围内考察分离缓冲液对体系的影响 , 如
图 3 所示 ,在 p H 8 . 0 左右 , 硫酸阿托品的发光强度
达最大值 目峰形较好 。 因此 , 选择分离缓冲溶液的
p H 为 8 . 0 。 固定缓冲溶液 p H 8 . 0 , 当分离缓冲液浓
度在 10 ~ 10 0 m m ol · L 一 ’ 范围内变化 , E C L 强度先
增大后减小 , 在 50 m m ol · L 一 ’ 达到最大 , 如图 4 所
示 。 故选择分离缓冲液浓度为 50 m m ol · L 一 ’ 。
6
.
5 7
.
0 7
.
5 8 0 8
.
5 9
.
0
PH
l冬13 分离缓川,液 p H f广[ f内影响
F 19 3 E f fe c ls o f p H
一J r 1
E ( : 1 i
r l te ll s i t y
检测电位 ( a即 l i e o l p o t e , 1一ia l ) : l . Z o V ; J鱿余条了`}小1 1冬1 2 ( o [h e r 。“ ) , 1、 11-
[ io n s a s i n 卜’ 19 2 )
c 、 。 .t r腼口 0 1 . L一 ,
l到 4 分离缓冲液浓度的影一响
F 19 4 E fe
〔一s ( )1 h l一 fe r e
( ) n e e rl t r a t i ` ) n o r一 E ( ; L i n t尸 n s i t y
缓冲液 p H 8 . 0 ( , ) H 8 . 0 ) ;其余条件 l司J冬13 ( o rh e r (、 , n 。{i l i o r l s a s F ig 3 )
2
.
4 线性范围 、精密度和检出限
在优化的分离和检测条件下 , 硫酸阿托品的回
归力一程 、 线性范围 、 相关系数和检出限分别为 ( s/ N
= 3 ) : 了 = 2 0 5 . 9 2 + 1 . 9 9 x 10 , x ( 二 的浓度 单位为
m m o l
·
I一 ’ ) , 1 . 0 x 10 一 ` 一 。 火 10 一 6 m o l · L ’ ,
0
.
9 9 7 8
,
3
.
0 x 10
一 7 m o l
·
L
一 ’ 。
对 10 一 “ m ol · I 」 一 ’ 的硫酸 阿托品标准液连续 6
次测定 , 峰高的 RS D 为 4 . 3% , 迁移时间的 R S D 为
1
.
2%
。
2
.
5 样品测定及 回收率
将 2 个批号的维 U 颠茄铝胶囊 内容物分别研
细 , 各精密称取 3 9 左右 , 按照实验方法处理样品 ,
得硫酸阿托品用 二次水溶解 , 定容于 10 m L 量瓶 。
再精密移取 _ L述试液 1 . 0 m l J 于 10 m L 容量瓶中 ,
二次水稀释至刻度 , 得到样品浓度约 10 一 ’ m ol ·
L
一 ’ 。 进样测定 , 记录样品的谱图 ( 图 5 一 a 中 ) , 以
峰高定量 : 测定结果如表 l( 药品未注明 侮粒维 U
颠茄铝胶囊中硫酸阿托品 !狗含量 ) 。
药物分析杂志 Ch in J p h ar m An al 2 0 0 8 , 2 5 ( 7 ) 1 04 5 一
表 1 样品含量的测定结果 ( n = s)
T a b 1 D e t e r m in a t io n r e s u l t s of a t r o P i n e s u l af te i n e a P s u le
样占l 总量
t o 一a l )
回收率
r e ` o v e 州 )
药 .}l’ : 含晕
川群 g
(
、 u : n 一, l。 )
05 07 0 ]
050 704
测得敏
( {b
u : 1。 { )
10 一 5 n l ()】·
1
.
75 2
加 人量
(
a o l《l。、 I )
1( )
一
5 , 21 0 1
·
I
J
10 一 s n 一0 1 · I %
(
【叹 , r l一吸、 厂1盆 )
本法 ( t }1 . 5 . , 1。、 tl l` ,《 1) 药典法 ( c }11, )
2
.
65 8 9 0
,
6 0
.
04 25 0
.
04 3 7
1 7 4 7 2
.
6 19 87
.
2 0
.
04 】8 0 . 04 33
2
3
4
50 10 0 1 50 20 0
5
t /
s
图 5 样品 ( a ) 、 对照品 ( b ) 毛细管电泳图谱
F ig S E (儿 、 h ,。 n l a 一o gar r, , 5 o f 、 a , n !〕 l e ( a ) a n `」e h e m i o a l r e倪 er rl o e 、 u b -
、 一a : le e ( l, )
6
3 结论
本实验初步探索 r 维 U 颠茄铝胶囊中硫酸阿
托品的测定方法 , 具有操作简便 , 所需试剂量少 ,检
测快速 ( 180 5 出峰 )等特点 , 与高效液相色谱法相
比 ,避免 了使用有机溶剂做流动相 , 这不仅降低了运
行成本 , 且_有利于环保 。 同时检出限低 , 结果可靠
( RS D 小于 5 % ) 可用于该类药物的质量控制及为其
他制剂中硫酸阿托品的测定及质量控制奠定 了基
石出, 是一种 可子lJ的方法 。
7
8
9
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( 本文于 2 0 0 7 年 Z j ] 5 日收到 )